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麻疯树(Jatropha curcas)核糖体失活蛋白(curcin)的分离纯化

蒋华梅  
【摘要】: 植物核糖体失活蛋白(RIPs)是一种多活性的物质,尤其是其特殊的抗肿瘤、抗生育、抗人体免疫缺陷病毒(HIV)、抗寄生虫和杀菌、杀虫等多种生物活性和其在植物抗病毒基因工程中的广泛应用预示着RIPs巨大的应用前景。而目前关于麻疯树核糖体失活蛋白curcin的分离和各种生物活性研究的并不多,因此,本课题着重研究curcin蛋白的提取纯化条件和生物活性。 本论文中测定了贵州省当年生野生麻疯树种子中的总蛋白质、总灰分和水分的含量分别为:24.17%、8.00%、4.40%。而且贵州省当年生麻疯树种子中的总蛋白质含量(24.17%)高于贮藏种子中总蛋白质含量(13.98%)。 采用95%饱和度的硫酸铵盐析和葡聚糖凝胶柱层析纯化法从麻疯树种仁中分离纯化出两种蛋白质。一种是麻疯树核糖体失活蛋白curcin(又称麻疯树毒蛋白),其相对分子量为29.10 kDa,等电点为8.70;另一种是分子量10 kDa的小分子蛋白质。 设计了关于磷酸盐缓冲溶液(PBS)浓度和pH值、氯化钠溶液浓度的正交实验方案。用以上不同的磷酸盐缓冲溶液提取麻疯树种仁中的蛋白质,电泳后用quantity one软件分析,计算得到麻疯树毒蛋白curcin占种子质量的百分比,以此筛选提取麻疯树毒蛋白粗提液的最佳条件。当磷酸盐缓冲溶液浓度为0.05mol/L,pH=6.80,氯化钠溶液浓度是0.14 mol/L时,麻疯树种仁中毒蛋白有最高提取率0.103%。此外,还对麻疯树种仁粗蛋白的纯化条件进行了筛选。结果显示,当柱高为80 cm时麻疯树种仁粗蛋白中两种不同蛋白组分能得到较好的分离纯化效果。 体外生物活性实验表明,curcin蛋白对PC3细胞、BGC823细胞的增殖没有抑制作用,对Bcap37细胞的增殖有一定的抑制作用,但效果并不显著。小分子蛋白(10 kDa)对PC3细胞、BGC823细胞、Bcap37细胞的增殖均没有抑制作用。


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