贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin基因的克隆、表达及生理活性的研究

【摘要】： Ghrelin是生长素促泌物受体(growth hormone secretagague receptor,GHS-R)的内源性配体,是目前为止除了生长激素释放激素和生长抑素外,第三个调节GH分泌的内源性物质。哺乳类的Ghrelin促进生长激素的释放,提高动物的食欲;特别在能量平衡等生理过程中起重要的调节作用,成为近年来备受关注的脑肠肽。 目前关于Ghrelin在禽类方面的研究较少,贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin与其生长和摄食调控等之间的关系还不清楚。本研究应用PCR、RT-PCR等技术对Ghrelin基因的结构、原核表达及生理活性进行了研究。在克隆了Ghrelin基因和cDNA的基础上,成功构建了Ghrelin的原核表达质粒,获得原核表达菌株ER2566/PTYB11/G,经优化,该菌株在37℃,OD_(600)=0.5,诱导5小时的表达量最高,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%,经亲和层析纯化了融合蛋白。以纯化的融合蛋白和人工合成的Ghrelin-KLH为抗原,制备了鸡、兔抗血清:通过主动免疫、被动免疫中和实验证实禽类Ghrelin对鸡血浆中代谢产物、胰岛素、胰高血糖素、甲状腺素浓度没有明显的影响,对GH的分泌有促进作用,但与哺乳动物中不同,Ghrelin抑制鸡的脂重、体重的增加,抑制鸡的摄食。本文的研究为贵州竹乡乌骨鸡的规模化养殖奠定了理论基础。