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《贵州医科大学》 2017年
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姜黄挥发油对皮肤鳞癌A431细胞增殖及凋亡的影响

昝雪娟  
【摘要】:目的:研究姜黄挥发油对人皮肤鳞癌(CSCC)A431(以下简称A431)细胞增殖与凋亡的影响,并探究其凋亡机制。方法:应用不同浓度的姜黄挥发油分别作用于皮肤鳞癌A431细胞24h、36h、48h,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测增殖抑制率;倒置显微镜观察细胞形态学变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察A431细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达量。结果:本实验通过CCK-8检测不同浓度(0、5、10、20、40、80μmol/L)姜黄挥发油作用人皮肤鳞癌A431细胞24h、36h、48h后,表现出不同大小的抑制作用,药物浓度从低浓度至高浓度,抑制率呈增高趋势,且其作用方式呈现剂量依赖性.作用24h后,当药物浓度达到10 mg/L,倒置显微镜下观察到当加入药物后,表现为细胞形态不规则,细胞增殖速度明显变慢,AO/EB染色后可见部分早期凋亡细胞,核染色质着黄绿色或黄色;当药物浓度达到20 mg/L,细胞核固缩,部分肿瘤细胞膜开始破裂,可见部分细胞内容物释放,AO/EB染色后可见部分黄色荧光的早期凋亡细胞和呈橘红色荧光的晚期凋亡细胞;当药物浓度达到40 mg/L,肿瘤细胞明显减少,部分细胞裂解成细胞碎片,并有大量漂浮细胞,AO/EB染色后可见大量细胞核染色质呈橘红色,并可见橘红色坏死细胞及碎片;流式细胞仪检测表明姜黄挥发油对皮肤鳞癌A431细胞具有促进凋亡作用,且随着药物浓度的增加,呈药物浓度-凋亡率正相关性;Western blot法检测结果半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达量随着药物浓度增加而增加,呈一定范围范围内浓度依赖性,且同一药物浓度作用下,Caspase-3蛋白表达量均多于Caspase-9。结论:姜黄挥发油对皮肤鳞癌A431细胞具有增殖抑制及促进其凋亡的作用,其凋亡的机制可能与上调Caspase-3、Caspase-9的表达有关。
【学位授予单位】:贵州医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R739.5

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