收藏本站
《遵义医学院》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

2型糖尿病患者脂肪来源干细胞促创面愈合能力的实验研究

姚远镇  
【摘要】:目的:通过分离、培养正常脂肪来源干细胞(normal Adipose-derived stem cells,nASCs)与糖尿病脂肪来源干细胞(diabetic Adipose-derived stem cells,dASCs),体外对比研究两种细胞的形态、表面标志、增殖与分化功能,体内对比研究两种细胞局部移植后压疮创面的愈合情况,探讨dASCs是否保留促创面愈合能力,为dASCs自体移植治疗慢性创面提供实验依据。方法:1、经知情同意后,于遵义医学院附属医院烧伤整形外科患者术中无菌条件下获取糖尿病病人脂肪组织和非糖尿病病人脂肪组织(即正常的脂肪组织)标本。采用胶原酶消化法提取脂肪来源干细胞(Adipose-derived stem cells,ASCs),用含胎牛血清的低糖DMEM培养基培养细胞,胰酶消化传代。倒置显微镜下观察两种不同来源细胞的形态,流式细胞仪检测第三代细胞表面标志的表达情况。2、取传至第三代的nASCs和dASCs,采用MTT法检测两种来源细胞的增殖能力并绘制生长曲线;将两种细胞接种于六孔板后分别诱导成脂、成骨,21天后分别行油红及茜素红染色观察成脂及成骨情况;取诱导成骨及成脂两周后的细胞进行实时荧光定量PCR检测脂肪特有基因PPAR-γ及成骨基因骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和骨钙素(BGP)mRNA的表达情况。3、建立小鼠背部皮肤压疮动物模型,随机分三组:nASCs移植组、dASCs移植组及PBS组(对照组,NC),每组8只。取增殖期的第三代细胞,用病毒包被好的绿色荧光蛋白(GFP)进行细胞转染标记细胞后,分别于每个压疮周边及基底部多点注射1×10~6个相应细胞,PBS组注射同等体积的PBS,观察创面的愈合情况。分别于注射后11天、21天分批处死小鼠后切取压疮创面组织行HE染色和Masson染色,观察创面组织炎症细胞浸润程度、表皮厚度及胶原蛋白沉积情况;进行CD31及S100免疫组化染色观察创面血管及神经细胞再生情况;第11天取创面组织行冰冻包埋切片追踪两种细胞在创面中的定植及存活情况。结果:1、成功从正常与糖尿病患者脂肪组织中分离提取出ASCs,原代接种8小时后可见贴壁细胞,传代后细胞生长明显加速;两种第3代细胞外形均一,多呈长梭形,呈放射样旋涡状生长,形态无明显区别。流式细胞仪检测两种第三代细胞CD90、CD105、CD73、CD44均呈阳性表达,CD34均呈阴性表达。2、MTT法检测细胞增殖能力结果显示nASCs增殖能力较dASCs强,生长速度较快;诱导分化结果显示nASCs与dASCs均可被诱导成脂及成骨,其中dASCs成脂能力强于nASCs,但成骨能力低于nASCs。实时定量PCR结果显示诱导后dASCs脂肪特有基因PPAR-γmRNA的表达水平高于nASCs,而成骨基因骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和骨钙素(BGP)mRNA的表达水平低于nASCs,差异均具有统计学意义(P0.001)。3、成功建立小鼠背部皮肤压疮模型;行细胞移植后第5、9、13天nASCs组的创面愈合率分别为36.47±5.83%、89.18±2.14%、99.47±0.89%,dASCs组的为35.66±6.52%、60.40±7.67%、87.18±2.56,PBS组的为19.89±7.20%、46.32±4.21%、66.25±5.26%,nASCs组创面愈合最快,dASCs组愈合速度次之,PBS组创面愈合最慢。第11天取创面组织行HE染色结果显示nASCs组开始出现上皮化,而dASCs组与PBS组创面表面痂皮与基底组织分离;在nASCs组、dASCs组及PBS组中炎性细胞浸润程度依次递减,组间差异具有统计学意义(P0.001)。第21天,炎性细胞浸润程度在三组中无明显区别;表皮厚度在nASCs组、dASCs组和PBS组依次递减,组间差距具有统计学意义(P0.05);三组中创面周边均可见再生的毛囊,其中dASCs创面中央可见新生毛囊。马松染色结果显示,第11天,dASCs组(48.38±1.36%)胶原沉积比nASCs组(45.85±1.95%)多,但无统计学意义;dASCs组和nASCs组胶原沉积明显大于PBS组(41.46±1.75%),差异有统计学意义(P0.001)。第21天,nASCs组(56.93±1.67%)、dASCs组(54.17±1.71%)与PBS组(50.34±1.29%)胶原沉积依次递减,组间差异均具有统计学意义(P0.05)。CD31免疫组化结果显示,第11天,nASCs组(17.80±0.84)的血管数目与dASCs组(17.20±1.30)无显著差别;但两者血管数目均明显大于PBS组(8.00±1.41),差异具有统计学意义(P0.001)。第21天,血管数目在nASCs组(20.00±1.87)、dASCs组(18.00±2.12)及PBS组(14.00±1.58)中依次递减,各组间差异均具有统计学意义(P0.05)。S100免疫组化结果显示,第11天,nASCs组与dASCs组均未见阳性显色细胞;第21天,nASCs组(1.63±0.08)的雪旺氏细胞密度小于dASCs组(1.76±0.12),但无统计学意义;nASCs组和dASCs组均明显大于PBS组(0.55±0.04),差异具有统计学意义(P0.001)。创面细胞追踪结果为,第11天后nASCs与dASCs均可定植于创面皮肤内。结论:1.和nASCs相比,dASCs的形态和表面标志无明显变化,其增殖和成骨分化能力下降,而成脂分化能力增加。2.dASCs局部移植可通过调节局部炎症、增加胶原沉积、促进血管新生和神经再生促进压疮创面愈合。3.dASCs局部移植仍具备促进创面愈合的能力,但其能力较nASCs减小。
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 赵珮娟;程辰;谢芸;李青峰;;脂肪来源干细胞相关生长因子及其作用的研究进展[J];组织工程与重建外科杂志;2013年05期
2 赵建辉;易成刚;郭树忠;;脂肪来源干细胞的基础研究进展[J];中国美容医学;2011年03期
3 李萍;田方;宋琦;刘焕霞;李孟芳;魏丹;;新生牛血清对大鼠脂肪来源细胞生长的影响[J];遵义医学院学报;2011年04期
4 于婷;陈薇;;脂肪来源间充质干细胞研究进展[J];军事医学科学院院刊;2008年01期
5 陶凯;刘晓燕;汪曾炜;石杰;梁久龙;;人脂肪来源干细胞增强型绿色荧光蛋白质粒转染及体内示踪[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年12期
6 唐林平;刘恿铂;蒋亚楠;谭谦;;脂肪来源基质血管组分对难愈性创面愈合的影响[J];江苏医药;2015年08期
7 赵建辉;李龙;梁丽华;易成刚;曾淑红;郭树忠;;人与家兔脂肪来源干细胞体外培养特性的比较[J];中国组织工程研究;2012年14期
8 徐小春;李光早;;脂肪来源干细胞的基础研究及成脂应用进展[J];中华全科医学;2012年05期
9 蔡震;潘博;林琳;蒋海越;庄洪兴;;脂肪来源干细胞的生物学特性及细胞表型[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年36期
10 吴红年;袁玉琳;;脂肪来源干细胞生长行为特征及自体移植大鼠心肌梗死的生物行为影响[J];咸宁学院学报(医学版);2007年04期
11 卫传元;顾建英;;脂肪来源干细胞在慢性创面愈合中作用的研究进展[J];中国临床医学;2017年04期
12 汤银娟;董为人;;脂肪来源干细胞分化潜能的现状研究[J];湘南学院学报(医学版);2011年03期
13 裴艳;徐亚伟;侯磊;于学靖;;兔脂肪来源干细胞表面标记分析及向心肌样细胞分化[J];同济大学学报(医学版);2006年06期
14 王植;田晓红;柏树令;;脂肪来源干细胞-组织工程学的新亮点[J];中国民康医学;2015年14期
15 张琪;刘李娜;邓景成;曹卫刚;;瘢痕内注射脂肪来源干细胞对兔耳增生性瘢痕的抑制作用研究[J];组织工程与重建外科杂志;2015年03期
16 翟羽佳;仉红刚;;脂肪来源间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展[J];中国生物工程杂志;2010年06期
17 韦玉军;周建丽;郑震寰;龚锴;王爱军;敖强;公衍道;张秀芳;;体外共培养诱导脂肪来源干细胞分化为Schwann-like cell的方法研究[J];生物物理学报;2009年S1期
18 薛桂松;张英;蒋婷;郭妤;周广东;祁佐良;;人脂肪来源细胞体内构建组织工程化脂肪的实验研究[J];组织工程与重建外科杂志;2008年02期
19 郭淑军;刘伟;金媛;王强;李雅丹;陈小佳;;一种体外快速分离脂肪来源干细胞的方法[J];激光生物学报;2017年01期
20 赵强;吕爽;翟颖仙;高振平;石英爱;;人脂肪来源干细胞的分离、培养及成骨分化的研究[J];中国实验诊断学;2013年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高景恒;;脂肪来源干细胞与延缓衰老[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
2 刘琳;张亚;周云;翟景梅;曹戌;;兔脂肪来源干细胞分离培养及向血管内皮细胞分化能力的研究[A];2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2012年
3 梁春;贺治青;刘星;刘焕波;姜其钧;吴建祥;潘晓明;任雨笙;李玫;吴宗贵;;糖基化终产物诱导人脂肪来源干细胞节律紊乱[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
4 韦玉军;周建丽;郑震寰;龚锴;王爱军;敖强;公衍道;张秀芳;;体外共培养诱导脂肪来源干细胞分化为Schwann-like cell的方法研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
5 梁春;贺治青;刘星;刘焕波;姜其钧;吴建祥;潘晓明;任雨笙;李玫;吴宗贵;;糖基化终产物诱导人脂肪来源干细胞节律紊乱[A];第十次中国中西医结合学会心血管病学术大会暨第五次江西省中西医结合学会心血管病学术大会论文汇编[C];2010年
6 贺治青;梁春;刘星;刘焕波;姜其钧;吴建祥;潘晓明;任雨笙;李玫;吴宗贵;;糖基化终产物通过RAGE-MAPK-NF-κB通路诱导人脂肪来源干细胞功能紊乱[A];第十次中国中西医结合学会心血管病学术大会暨第五次江西省中西医结合学会心血管病学术大会论文汇编[C];2010年
7 赵春华;孙昭;曹莹;韩钦;;脂肪来源的间充质干细胞血液血管内皮细胞分化的研究[A];中国微循环学会第五届中国微循环学术大会论文摘要汇编[C];2004年
8 曹莹;孟艳;孙昭;廖联明;韩钦;李静;刘艳宁;赵春华;;成人脂肪来源成体干细胞分化为内皮细胞的体内外研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
9 游利;潘凌;陈琳;陈瑾瑜;;下调锌指蛋白467可促进脂肪来源间充质干细胞向成骨细胞分化[A];中华医学会第五次中青年骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文集[C];2013年
10 李静;何觅春;韩钦;孙昭;刘艳宁;阎曦;史明霞;赵春华;;低氧预处理增强脂肪来源间充质干细胞CXCR4的表达和对裸鼠下肢缺血模型的修复研究[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 方萌;减肥谈“油”色变?大可不必![N];中国食品报;2015年
2 浙江省台州医院营养中心 何晓琴;说说女糖友的“脂生活”[N];健康时报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邓呈亮;脂肪来源干细胞基质胶促进慢性创面愈合的基础和临床研究[D];南方医科大学;2018年
2 姚尧;SVF-gel:一种高浓度脂肪来源干细胞基质胶的实验研究及临床应用[D];南方医科大学;2017年
3 曹莹;脂肪来源的间充质干细胞的生物学特性以及间充质干细胞在急性肝损伤中治疗机制的研究[D];中国协和医科大学;2006年
4 管利东;人脂肪来源干细胞的可塑性及其在体外脂肪组织构建中的应用基础研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
5 王文加;人脂肪来源基质细胞的实验研究[D];吉林大学;2007年
6 马国涛;脂肪来源干细胞移植治疗心肌梗死大鼠的实验研究[D];北京协和医学院;2011年
7 贺治青;晚期糖基化终产物诱导人脂肪来源干细胞功能紊乱的机制研究[D];第二军医大学;2009年
8 冯自豪;富血小板血浆促进脂肪来源干细胞—支架复合物成骨的相关研究[D];复旦大学;2013年
9 梁久龙;脂肪来源干细胞在整形外科的应用研究[D];第二军医大学;2010年
10 茅泳涛;血小板裂解液复合脂肪来源干细胞促进腱骨愈合的实验研究[D];苏州大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 姚远镇;2型糖尿病患者脂肪来源干细胞促创面愈合能力的实验研究[D];遵义医学院;2018年
2 张攀;脂肪来源干细胞基质胶促进缺血皮瓣成活的实验研究[D];南方医科大学;2018年
3 李奕润;兔脂肪来源干细胞联合可吸收聚乳酸支架材料修补牙槽突裂的体外及体内实验研究[D];浙江大学;2018年
4 刘林奇;低氧预处理的人脂肪来源干细胞促进血管生成的体外实验研究[D];南方医科大学;2013年
5 赵强;人脂肪来源干细胞的分离、培养及生物学特性的实验研究[D];吉林大学;2011年
6 杨玲玲;富血小板血浆对人原代脂肪来源干细胞增殖的影响[D];第二军医大学;2014年
7 彭华志;体外诱导脂肪来源干细胞向成骨细胞分化的相关研究[D];第四军医大学;2007年
8 赵琦;脂肪来源干细胞旁分泌效应对平滑肌细胞凋亡的影响[D];遵义医学院;2013年
9 马继中;羊膜负载脂肪来源干细胞修复大鼠皮肤缺损的实验研究[D];南昌大学;2011年
10 熊凌云;N-乙酰-L-半胱氨酸对脂肪来源干细胞增殖与白介素-8分泌影响的实验研究[D];华中科技大学;2012年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978