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《遵义医科大学》 2020年
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环境浓度NP长期暴露对雄性大鼠甲状腺功能与增生性病变的影响及锌硒茶干预研究

王林  
【摘要】:目的:1)分析环境浓度NP长期暴露是否会影响雄性大鼠甲状腺激素水平及功能的稳态,探讨雌激素受体与甲状腺素受体在NP致甲状腺疾病中的表达情况。2)分析锌硒茶摄入对环境浓度NP长期暴露而引起的雄性大鼠甲状腺功能损伤及增生性病变的干预作用,探讨锌硒茶对NP致甲状腺功能损伤的保护作用机制。方法:240只雄性SD大鼠共分为7组(空白对照组,0.4mg/kg/d,4mg/kg/d,40mg/kg/d NP暴露组,30μg/kg/d E_2组,普通茶治疗组,锌硒茶治疗组)。每日按体重灌胃,灌胃量为5ml/kg/day,连续灌胃染毒34周,茶叶干预组染毒NP剂量与高剂量组相同,第18周开始进行茶叶干预。染毒组分两次剖杀取材(17周、34周),茶叶干预组于第34周剖杀取材。解剖前对大鼠进行甲状腺B超检查,利用ELISA法检测血清FT3、FT4、TSH水平,高效液相色谱法检测甲状腺组织和血清NP蓄积水平。甲状腺左叶用于透射电镜观察超微组织结构、HE切片观察大鼠甲状腺组织损伤情况、免疫组化切片比较ERα、ERβ,TRα、TRβ蛋白的表达情况。甲状腺右叶使用高效液相色谱法检测甲状腺组织中NP蓄积含量及Western Blot法检测ERα、ERβ,TRα、TRβ、HMGB1蛋白的相对表达量。结果:1)染毒17周时,高剂量组大鼠血清FT3水平较空白对照组明显增加(P0.05);高剂量组大鼠甲状腺内有低回声区出现,甲状腺细胞出现细胞核畸形、线粒体肿胀、内质网扩张。随染毒剂量的增加,甲状腺组织及血清中蓄积的NP含量均不断增加,NP各暴露组甲状腺组织内及血清中的NP含量均明显高于空白对照组(P_(甲状腺)0.01,P_(血清)0.01);且随暴露剂量的增加,甲状腺滤泡细胞损伤情况不断加重,滤泡上皮厚度增加(P0.01),单个滤泡面积减少(P0.01),滤泡上皮复层情况明显,立方上皮细胞变扁平;与对照组相比,NP暴露组和E_2组的ERα、ERβ、TRα和TRβ的IOD/Area明显高于空白对照组(P_(ERα)0.01,P_(ERβ)0.01,P_(TRα)0.01,P_(TRβ)0.01)。ERα、TRα和HMGB1蛋白的表达明显高于对照组(P_(ERα)0.01,P_(TRα)=0.05,P_(HMGB1)0.05)。并且甲状腺组织中ERα(r=0.66,P0.01),ERβ(r=0.57,P0.01),TRα(r=0.55,P0.05)和HMGB1(r=0.80,P0.01)蛋白的表达与甲状腺中NP含量呈正相关。2)染毒34周,高剂量组大鼠血清FT3水平较空白对照组明显增加,FT4水平明显降低(P_(FT3)0.05,P_(FT4)0.05);中、高剂量组均出现结节点,甲状腺细胞中细胞核有畸形、线粒体肿胀严重、内质网扩张明显并有囊泡化形成。血清及甲状腺组织中NP蓄积含量随暴露剂量的增加而增加,且明显高于空白组(P_(甲状腺)0.01,P_(血清)0.05);甲状腺细胞病理损伤严重,滤泡上皮厚度明显增多(P0.01),单个滤泡面积减少(P0.01),滤泡上皮复层化严重;与对照组相比,NP染毒组和E_2组的ERα、ERβ、TRα和TRβ的IOD/Area明显高于空白对照组(P_(ERα)0.01,P_(ERβ)0.01,P_(TRα)0.01,P_(TRβ)0.01)。ERα、ERβ、TRα、TRβ和HMGB1的蛋白表达水平明显高于对照组(P_(ERα)0.01,P_(ERβ)0.01,P_(TRα)0.01,P_(TRβ)0.05,P_(HMGB1)0.01)。且大鼠甲状腺组织中ERα(r=0.57,P0.01),ERβ(r=0.73,P0.01),TRα(r=0.64,P0.01),TRβ(r=0.58,P0.01)和HMGB1(r=0.74,P0.01)的蛋白表达情况与甲状腺中NP含量呈正相关。3)第34周大鼠血清和甲状腺组织中NP的含量明显高于第17周,甲状腺滤泡上皮的厚度在第34周时也明显增加,且第34周大鼠甲状腺中ERα,ERβ,TRα,TRβ和HMGB1蛋白的表达水平明显高于第17周(P0.05)。4)锌硒茶干预组并无高回声点存在,茶叶干预组甲状腺细胞病理损伤较高剂量组有所减轻,滤泡上皮厚度明显降低(P0.01);茶叶干预后ERα、ERβ、TRα和TRβ相对表达量均较高剂量组有所降低(P_(ERα)0.01,P_(ERβ)0.01,P_(TRα)0.01)。结论:1、环境剂量NP长期暴露后会在甲状腺组织及血液中蓄积,可导致大鼠甲状腺组织结构及激素水平等发生改变、增生性病变的发生、雌激素受体和甲状腺素受体蛋白的相对表达量明显增加。初步认为激素受体的表达增加是NP致甲状腺功能紊乱的机制之一。2、摄入锌硒茶可有效降低NP暴露大鼠甲状腺组织中ERα、ERβ、TRα、TRβ蛋白的表达,并对NP引起的甲状腺损伤起保护作用。
【学位授予单位】:遵义医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2020
【分类号】:R114

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