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《遵义医科大学》 2020年
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miRNA-145促进胚胎干细胞向血管平滑肌细胞诱导分化的实验研究

向龙  
【摘要】:目的:本研究拟将miRNA-145作为诱导剂联合其他诱导剂诱导胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)分化为血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs),初步建立miRNA-145促进ESCs向VSMCs诱导分化方案。最后在最佳诱导方案中,过表达Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4),初步研究miRNA-145促进ESCs诱导分化为VSMCs的机制。为后续进一步研究调控机制以及建立更加快速高效的ESC-VSMCs诱导方案打下基础。方法:1、ESCs诱导分化为VSMCs过程中,检测miRNA-145、KLF4以及VSMCs特异性标记蛋白表达情况。2、以miRNA-145作为诱导剂,与不同诱导剂进行组合,建立最佳的诱导分化方案,同时在此方案基础上,过表达KLF4,观察诱导分化出的细胞VSMCs标记蛋白表达以及收缩功能的变化情况。结果:1、miRNA-145在胚胎干细胞向血管平滑肌细胞诱导分化过程中表达的实验研究(1)成功诱导出ESC-VSMCs,随着诱导的进行,光镜下表现为密切接触的克隆样细胞逐渐向为长梭形转变。(2)在不同诱导阶段,通过Q-PCR鉴定显示,miRNA-145及VSMCs特异性标记α平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA),Calponin,平滑肌22α(Smooth muscle 22 alpha,SM22α)动态变化,第1-3天,KLF4表达降低。第3天开始,miRNA-145表达显著升高,到第6天达到高峰,特异性标记基因呈现出相同的变化趋势。(3)通过免疫荧光染色检测,ESC-VSMCs中特异性标记蛋白α-SMA,Calponin,SM22α均阳性表达。2、miRNA-145在胚胎干细胞向血管平滑肌细胞诱导分化过程中表达的实验研究miRNA-145促进胚胎干细胞向血管平滑肌细胞诱导分化方案的初步研究(1)通过miRNA-145与ActivinA、血小板衍生生长因子-BB(Platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)不同的组合作为诱导剂,均能诱导出既表达特异性标记蛋白,又具有收缩功能的VSMCs,但不同分组具有差异,其中miRNA-145联合PDGF-BB诱导效率最佳。(2)miRNA-145可能通过抑制KLF4促进干细胞向VSMCs诱导分化,尤其是在促进中间谱系细胞分化为VSMCs过程中。结论:1、通过miRNA-145与ActivinA、PDGF-BB不同的组合作为诱导剂,均能诱导出既表达特异性标记蛋白,又具有收缩功能的VSMCs,但不同分组具有差异,其中miRNA-145联合PDGF-BB诱导效率最佳。2、miRNA-145可能通过抑制KLF4促进干细胞向VSMCs诱导分化的作用,尤其是在促进中间谱系细胞分化为VSMCs过程中。
【学位授予单位】:遵义医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2020
【分类号】:R329.2

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