银杏叶提取物对新生鼠缺氧缺血后脑p-Tau蛋白表达的影响研究

【摘要】：目的:通过制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)模型,观察银杏叶提取物注射液(Ginkgo biloba extract,EGB)治疗HIBD过程中磷酸化Tau(phosphorylated Tau protein,p-Tau)蛋白表达情况,为EGB应用于新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的临床治疗提供新的理论依据。方法:将60只新生7日龄清洁级SD大鼠随机分为假手术组20只、NS治疗组(NS组)20只和EGB治疗组(EGB组)20只,按治疗时间点分为6h、12h、24h、48h、72h分为5个亚组,每个亚组各4只动物。分组及术后均与母鼠同笼正常生活。假手术组切开颈部皮肤,分离右侧颈总动脉,不结扎。NS治疗组以及EGB治疗组均参照Rice法建立HIBD动物模型,观察造模前后新生大鼠的行为学改变,EGB组每日腹腔注射一次EGB0.01g/g,NS组每日腹腔注射一次生理盐水0.01g/g。在各时间点断头取脑组织。分别对脑组织采用HE染色方法观察脑神经细胞病理损伤;采用免疫组织化学染色法检测各组新生鼠脑组织中p-Tau蛋白的阳性表达强度;采用q-PCR检测各组新生鼠脑组织中p-Tau mRNA水平。结果:1、HIBD术后新生大鼠行为表现:活动缓慢、点头颤动、四肢抖动、站立不稳、无法翻身等。2、脑组织HE染色表现:假手术组脑组织神经元形态结构正常,未见明显的病理改变。NS组和EGB组脑组织均出现不同程度的损伤情况:新生鼠脑组织可见脑细胞有不同程度的肿胀,细胞核排列紊乱,可见核固缩。NS组中6h组细胞核排列有少许紊乱,随着时间的增长,12h组可见细胞出现肿胀,组织结构疏松,可见较多空泡化结构伴有小胶质细胞浸润,仅可见少量细胞神经元,且神经元固缩,脑血管充血,血管周围伴炎症细胞浸润,72h组较12h组细胞排列整齐,细胞肿胀程度减弱。EGB组中6h组细胞核排列有少许紊乱,12h组可见少量神经元固缩,组织结构疏松,局部区域细胞数量稀少,而72h组较12h组细胞排列整齐,细胞肿胀程度减弱,且可见小胶质细胞。EGB组与NS组相比病理损伤形态程度有所减轻。3、免疫组化结果显示:p-Tau蛋白脑神经细胞胞浆阳性染色均呈棕黄色,三组均可见棕黄色阳性表现。假手术组p-Tau阳性细胞数在6h开始增多,于12h时达最高点(P0.05),之后24h、48h逐渐下降(P0.05),48h组与72h组(P0.05)。NS组p-Tau阳性细胞数在6h开始增多,于12h时达最高点(P0.05),之后24h、48h、72h逐渐下降(P0.05)。EGB组p-Tau阳性细胞数在6h开始增多,于12h时达最高点(P0.05),之后24h、48h、72h逐渐下降(P0.05)。各时间点NS组中p-Tau蛋白阳性细胞数较EGB组均升高(均P0.05)。4、q-PCR结果:假手术组p-Tau mRNA相对表达量在6h开始增多,于12h时达最高点(P0.05),之后24h、48h逐渐下降(P0.05),48h组与72h组(P0.05)。NS组p-Tau mRNA相对表达量在6h开始增多,于12h时达最高点(P0.05),之后24h、48h、72h逐渐下降(P0.05)。EGB组p-Tau mRNA相对表达量在6h开始增多,于12h时达最高点(P0.05),之后24h、48h、72h逐渐下降(P0.05)。各时间点NS组中p-Tau蛋白mRNA相对表达量较EGB组升高(均P0.05)。结论:1、EGB可通过抑制p-Tau蛋白的表达对HIBD后新生大鼠发挥治疗作用。2、p-Tau蛋白参与了HIBD的过程。3、正常新生大鼠及HIBD新生大鼠脑p-Tau蛋白呈动态变化。