收藏本站
《遵义医学院》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

高表达hRAMP1基因腺病毒载体的构建及其在兔MSCs中表达的实验研究

宋付凯  
【摘要】: 目的:构建重组腺病毒载体pAdxsi-EGFP-hRAMP1,转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察其转染率及hRAMP1的mRNA及蛋白表达。方法:质粒pOTB7-hRAMP1用EcoRI+XhoI双酶切后回收hRAMP1片段,亚克隆至pShuttle-EGFP-CMV中,得到重组穿梭质粒;I-CeuI+I-Sce1双酶切处理pShuttle-EGFP-CMV-hRAMP1,回收EGFP-CMV-EGFP-hRAMP 1片段,亚克隆至腺病毒骨架载体pAdxsi,得到重组腺病毒质粒;重组腺病毒质粒酶切线性化后应用脂质体法转染293细胞,观察细胞出毒迹象并进行包装、收毒、冻融、扩增、再收毒并作毒种鉴定后以离心,透析方法纯化腺病毒进行滴度测定及检测。提取新鲜骨髓,体外分离、培养并鉴定MSCs。将带有hRAMP1和EGFP基因的腺病毒载体,感染第3代MSCs,荧光倒置显微镜下计算感染率。收集病毒感染后的MSCs行RT-PCR检测表明存在hRAMP1基因的mRNA表达,WesternBlot亦证实hRAMP1基因的蛋白表达。结果:构建的重组穿梭质pShuttle-EGFP-CMV-hRAMP1用EcoRI+XhoI双酶切,得到大小为0.8kbp (hRAMP1)和5.1kbp (pShuttle-EGFP-CMV)两个片段;重组腺病毒质粒pAdxsi-EGFP-CMV-hRAMP 1用XhoI酶切得到7个片段,而作为对照的空腺病毒质粒只得到6个片段;重组腺病毒质粒在293细胞中包装后产生的重组腺病毒对293细胞有致病作用;重组腺病毒Ad-EGFP-hRAMP1 PCR鉴定可见164bp的阳性扩增条带;经多次重复感染后,病毒滴度检测达2.5×1011PFU/ml.成功转染Ad-EGFP-hRAMP1的兔MSCs可表达绿色荧光,当MOI值为800,转染效率为80%。RT-PCR检测转染后的MSCs有hRAMP1基因mRNA表达;Wester-blot检测转染后的MSCs有bRAMP1蛋白表达。结论:(1)成功构建了携带增强型绿色荧光蛋白基因和hRAMP1基因的重组腺病毒载体;(2)MSCs是一种理想的基因载体细胞,可用于hRAMP1的基因治疗。
【学位授予单位】:遵义医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R329

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王勤,龚跃法,杨祥良;基因载体阳离子聚合物的研究进展[J];广东药学院学报;2004年01期
2 冯敏燕,刘晓黎,李素梅,解琨;降钙素受体家族的受体活性修饰蛋白的研究进展[J];四川生理科学杂志;2004年02期
3 齐永芬,薛琳,柴三葆,石彦荣,庞永正,唐朝枢;肾上腺髓质素和降钙素基因相关肽受体在血管平滑肌细胞的脱敏──受体活性修饰蛋白的作用(英文)[J];生理学报;2001年05期
4 刘杰;房春红;;腺相关病毒载体介导的基因打靶技术的研究进展[J];现代生物医学进展;2008年05期
5 王海鹰;万家余;徐明;徐静;高宏伟;;AAV载体的最新研究进展[J];现代生物医学进展;2008年11期
6 范凌云;谢庆军;;腺病毒载体的研究进展[J];中国生物制品学杂志;2008年02期
7 侯淑红;王挹青;陈东平;侯炳波;;血管生成素1基因修饰骨髓间质干细胞移植后心肌梗死大鼠的心功能变化[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年19期
8 马会利;胡桃红;刘胜林;邹建宏;丁立平;杨慧娟;卢鑫;;冠心病患者经PCI治疗后支架内再狭窄的原因分析[J];血栓与止血学;2008年04期
9 宋建蓉,张馥敏,杨志健,马文珠,李玉华,哈团柱,李传富,高翔;血管内皮细胞生长因子-165和血管形成素-1促进干细胞动员[J];江苏医药;2005年05期
10 朱国强;吴织芬;王勤涛;李袁飞;;IGF-1基因转染对骨髓基质细胞分泌IGF-1、VEGF、BMP-2的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王忠;高毅;汪艳;潘明新;;人骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定[J];中华神经医学杂志;2006年10期
2 王君;付小兵;李存保;;骨髓间充质干细胞的免疫逃逸机制[J];创伤外科杂志;2006年05期
3 韩雪晶;曲德伟;肖烨;;大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性研究[J];临床医学;2010年12期
4 李经伦,刘长征;干细胞移植治疗中的示踪术研究现状(文献综述)[J];放射免疫学杂志;2004年06期
5 林沪;陈黎明;王福生;;间充质干细胞在肝脏的分化机制研究进展[J];实用肝脏病杂志;2010年03期
6 杨新文;张本斯;王勇;;骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究[J];解剖学研究;2008年03期
7 徐海娥;闫翠娥;;壳聚糖作基因载体及其改性研究进展[J];高分子通报;2006年08期
8 吕春荣;叶绍辉;马月辉;顾恩妍;关伟军;;骨髓间充质干细胞及其应用[J];中国畜牧兽医;2009年04期
9 王芹;李进;王颖嫒;宋力;岳井银;穆传杰;樊飞跃;;人IL-21cDNA的克隆及重组腺病毒表达载体的构建[J];广西医科大学学报;2009年04期
10 朱孟芝;董雅娟;龚宜超;王文明;刘玮;柏学进;;体外诱导牛骨髓间充质干细胞向乳腺样上皮细胞分化的初步研究[J];中国畜牧兽医;2012年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 王忠;高毅;汪艳;潘明新;;人骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定[A];广东省肝脏病学会2007年年会论文集[C];2007年
2 王文明;董雅娟;柏学进;村上正夫;刘玮;张守宝;董懿为;;不同供体核对牛核移植胚胎发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 林先和;PPARγ对骨髓MSC向心肌样细胞分化的影响及调控作用的研究[D];第三军医大学;2004年
2 金艳;骨髓间充质干细胞心肌分化过程中电生理特性及其心肌移植致心律失常机制的研究[D];南京医科大学;2005年
3 滕勇;人骨髓基质干细胞永生化及相关研究[D];第四军医大学;2005年
4 郑爱青;乏氧—辐射双敏感启动子载体的构建及乏氧和辐射诱导下调控HSVtk基因对肺癌细胞的杀伤作用[D];天津医科大学;2005年
5 李志勇;大鼠骨髓间充质干细胞牙向分化潜能的实验研究[D];四川大学;2005年
6 李海红;细胞分化调控对皮肤及其附属结构损伤修复与再生作用的基础研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
7 符刚;体外诱导毛囊Bulge细胞向皮脂腺细胞定向分化的研究[D];第三军医大学;2005年
8 李华壮;TGF-β1基因修饰的骨髓间充质干细胞/胶原海绵复合移植修复兔退变椎间盘的实验研究[D];第三军医大学;2006年
9 丁旵东;骨髓间充质干细胞心肌移植后室性心律失常的危险性评估及其机制分析[D];南京医科大学;2006年
10 郑晓舟;骨髓间质干细胞诱导分化内皮细胞进行同种瓣体外受体内皮化的初步研究[D];山东大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宁改君;降钙素基因相关肽与糖尿病肾病的关系研究[D];桂林医学院;2010年
2 李建杰;骨髓间充质干细胞向神经元方向诱导分化及其机制的实验研究[D];华北煤炭医学院;2010年
3 代静澜;小鼠骨髓干细胞在缺血再灌注损伤肾脏内分化的研究[D];第三军医大学;2004年
4 艾正亚;绿色荧光蛋白标识小鼠胸腺免疫抑制作用的研究[D];江南大学;2005年
5 胡鸢;缺氧诱导因子-1a基因转染人间充质干细胞的体内促血管生成作用研究[D];第三军医大学;2005年
6 赵兴;小鼠MSCs的分离培养与体外多潜能分化的研究[D];青岛农业大学;2007年
7 贾鹏;骨髓间充质干细胞移植治疗实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠的实验研究[D];南京医科大学;2007年
8 陈莉娜;北京油鸡骨髓间充质干细胞和胚胎生殖细胞重要生物学特性研究[D];中国农业科学院;2007年
9 刘悦;骨髓间充质干细胞体内移植治疗肝硬化的初步实验研究[D];中国医科大学;2007年
10 耿岚;胰腺干细胞及转分化过程的免疫学特性研究[D];暨南大学;2007年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 袁中玉,张力,李苏,钱晓洲,管忠震;E1B缺失腺病毒瘤内注射治疗恶性肿瘤的安全性研究[J];癌症;2003年03期
2 徐瑞华,袁中玉,管忠震,曹烨,王华庆,胡晓桦,冯继峰,张阳,李方,陈正堂,王杰军,黄建瑾,周清华,宋三泰;瘤内注射E1B缺失腺病毒(H101)与化疗联合治疗恶性肿瘤的Ⅱ期临床试验[J];癌症;2003年12期
3 夏忠军,常建华,张力,姜文奇,管忠震,刘基巍,张阳,胡晓桦,吴国华,王华庆,陈正常,陈建超,周清华,陆建伟,樊青霞,黄建瑾,郑晓;基因工程腺病毒(H101)瘤内注射联合化疗治疗头颈部及食管鳞癌的Ⅲ期临床研究[J];癌症;2004年12期
4 王伟,张志坚,林建华3,吴秀丽,余良宏,康德智;大鼠骨髓间质干细胞培养扩增及表面标志[J];福建医科大学学报;2005年01期
5 黄世文,章雪晴,卓仁禧,付烈振,刘辉,李文鑫;六方向核聚酰胺-胺树形高分子的合成及其介导的基因转移[J];中国科学(B辑 化学);2003年01期
6 郭晋村;王挹青;谢良地;许昌声;;血管生长素-1基因修饰骨髓间充质干细胞对黏附因子表达的影响[J];基础医学与临床;2008年01期
7 朱国强,吴织芬,王勤涛,李袁飞;IGF-1对骨髓基质细胞分泌BMP-2和VEGF的影响[J];临床口腔医学杂志;2004年04期
8 叶迅;陆琴;赵毅;任臻;孟夏;葛盛芳;邱祺宏;童涌;LIEBER ANDRE;梁旻;胡放;陈红专;;嵌合型E1B55-kDa蛋白缺陷型腺病毒载体治疗肿瘤的评价(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2005年12期
9 吴文溪,沈历宗,刘新垣,丁强,王学浩,姚堃;含胞嘧啶脱氨酶基因的靶向腺病毒载体的构建及应用[J];实用癌症杂志;2002年03期
10 周磊,马文珠,张馥敏,杨志建,陆丽,丁兆丰,丁必森,哈团柱,李传富,高翔;血管内皮生长因子和血管生成素-1抑制心脏成肌细胞凋亡研究[J];中国临床康复;2003年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 柳云帆;吴小兵;阮力;;腺病毒载体在疫苗研究中的应用[J];生物技术通讯;2011年04期
2 卢建溪;阳莉;钱师宇;王强;;携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建[J];中国微生态学杂志;2011年08期
3 徐远玲;张旭东;马宏宝;;腺病毒载体左侧反向末端重复区对下游基因表达特异性的影响[J];郑州大学学报(医学版);2011年04期
4 林峰;苗北平;卢永田;;重组adv5.oriP.HRP腺病毒载体构建及对EBV阳性鼻咽癌C666-1细胞株的靶向表达[J];数理医药学杂志;2011年03期
5 林茂海;苏津自;蔡文钦;郑礼裕;许昌声;王华军;;携带肾上腺髓质素基因腺病毒体外转染骨髓间充质干细胞及其蛋白的表达[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年23期
6 王荥;王延洲;徐惠成;;deltex-1腺病毒载体的构建及其在大鼠bMSCs中的表达[J];第三军医大学学报;2011年15期
7 孟希亭;林晨;梅佳;王海娟;马飞;张金龙;张颖;钱海利;;活体成像系统检测携荧光素酶增殖缺陷型腺病毒在小鼠体内的表达和分布[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2011年04期
8 冷加燕;许文林;沈慧玲;龙璐璐;吴晓君;陈巧云;姚俊;;YB-1腺病毒载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞耐药性的影响[J];江苏大学学报(医学版);2011年04期
9 应希;王一;;αA晶状体蛋白重组腺病毒载体的构建和鉴定[J];眼科新进展;2011年09期
10 钟声;刘丹平;刘素伟;李晓禹;李谌;李媛;;血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王晋慧;姚明忠;顾锦法;孙兰英;郎明非;刘菁;刘新垣;;肿瘤靶向性腺病毒载体的构建[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 刘旭;田长富;;癌基因治疗中的腺病毒载体的开发和应用(综述Ⅱ)[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
3 凌昌全;李绍祥;张晨;张亚妮;;携蜂毒素基因腺病毒载体的构建及体外抑瘤实验研究[A];第九届全国中西医结合肿瘤学术研讨会论文集[C];2002年
4 马立新;马琪;徐松;;新型、简捷、有效的方法构建基于腺病毒载体系统的cDNA表达文库[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
5 王桂兰;鲁继荣;成焕吉;马青山;张云峰;;高滴度含有目的基因IL-4RA的逆转录病毒的包装和浓缩[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
6 吴运谱;张晓华;乔传玲;;腺病毒载体流感疫苗研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 刘金娟;马翔;;小鼠HSP27基因腺病毒表达载体的构建与鉴定[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
8 刘潇聪;陈耀凯;;腺病毒体外介导CTLA4-Ig在L02细胞中的表达及其生物学活性[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年
9 张春燕;李方和;龚劲松;陈妍;;抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
10 张子阳;袁春玉;杨亦彬;;人促血管生成素1腺病毒载体的构建[A];贵州省医学会肾脏病学分会2008年学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 李天舒 通讯员 朱丹萍;一研究证实腺病毒载体依然是安全的[N];健康报;2011年
2 魏妍平;MSCs研究列入豫重大攻关计划[N];中国医药报;2004年
3 于建港 邢燕霞;R4网络接口和电路域容灾技术[N];人民邮电;2005年
4 张中桥;异体MSCs移植有利于梗死心肌功能修复[N];中国医药报;2004年
5 本报记者 刘松柏;基因治疗的探路者[N];经济日报;2010年
6 ;领先技术和市场需求的完美结合[N];人民邮电;2004年
7 中国电信集团广州研发中心 曹磊 胡乐明;演进中的WCDMA R4与NGN[N];人民邮电;2004年
8 ;全方位提供“贴心”服务[N];中国医药报;2004年
9 吴广颖 于化龙 郑涛;R4核心网规划应处理好几个关系[N];人民邮电;2005年
10 ;带宽不够时怎样做远程实时备份?[N];计算机世界;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴成君;Ad35腺病毒载体构建及病毒蛋白免疫原性研究[D];北京协和医学院;2009年
2 张铭杰;成人MSCs体外定向成骨分化及激素性股骨头坏死MSCs活性研究[D];广州中医药大学;2011年
3 于彬;六邻体嵌合型重组5型腺病毒载体逃避预存免疫的研究[D];吉林大学;2012年
4 席启林;维生素D受体调控尿钙重吸收的分子机制研究[D];华中科技大学;2010年
5 徐尤年;血管生成素1腺病毒载体的构建及其对内毒素性肺损伤炎症消退的影响[D];华中科技大学;2010年
6 陈剑;BMP2和BMP7基因共转染兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的实验研究[D];第二军医大学;2011年
7 王鹏;表达His-tag-ICP47融合基因腺病毒载体的构建及其免疫活性的研究[D];郑州大学;2011年
8 刁彦鹏;腺病毒载体介导转染CD基因抑制大鼠移植静脉内膜增生及其机制的实验研究[D];中国医科大学;2005年
9 张岩;腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA抑制前列腺癌的实验研究[D];山东大学;2005年
10 吴慧颖;转染HO-1基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗慢性心衰的实验研究[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宋付凯;高表达hRAMP1基因腺病毒载体的构建及其在兔MSCs中表达的实验研究[D];遵义医学院;2010年
2 陈媛媛;hIL-12腺病毒载体的构建及在人hBMSCs中的表达[D];山西医科大学;2010年
3 宋默;携带p53基因和Flt3L配体基因的腺病毒载体的构建及鉴定[D];大连医科大学;2010年
4 刘海斌;腺病毒介导的mda-7/IL-24基因对人喉癌细胞Hep-2的凋亡作用[D];第二军医大学;2010年
5 魏菁;腺病毒介导ChM-I基因抑制BMSCs体内构建的软骨血管化的实验研究[D];西北大学;2010年
6 刘海平;非增殖性腺病毒携带全长抗体Cetuximab的肿瘤基因治疗的研究[D];浙江理工大学;2010年
7 苏秀云;应用AdEasy腺病毒载体系统构建携带人骨形成蛋白2基因的重组腺病毒[D];第一军医大学;2005年
8 毛亮;选择增殖型腺病毒ZD55携带自杀基因Dm-dNK(果蝇脱氧核糖核苷酸激酶)治疗大肠癌的研究[D];中国医科大学;2010年
9 王晓刚;人白细胞介素23基因克隆和携带EGFP腺病毒载体的构建与鉴定[D];大连医科大学;2007年
10 陈童;构建降钙素基因相关肽的穿梭载体[D];浙江大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026