收藏本站
《贵阳中医学院》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

改良SD大鼠肾小管上皮细胞的原代培养

周治彦  
【摘要】: 目的:建立一种良好的SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养、传代及鉴定方法。 方法:选用四周龄SD大鼠的肾皮质进行细胞培养。在无菌条件下取肾,去除肾盂及包膜,将肾皮质剪碎至1mm大小,洗去血液及尿液,0.25%胰蛋白酶消化20min,未消化皮质再次消化20min,经100目筛网、200目筛网过滤,收集200目筛网上物,离心后去上清,加入DMEM/F12培养基重悬,经,Percoll密度梯度离心法纯化肾小管,选择含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行原代培养及传代。利用分离纯化的肾小管节段,培养于24孔板内,从第三天开始,每天检测3孔细胞数量,绘制细胞生长曲线图;制作细胞爬片,采用免疫细胞化学法,细胞角蛋白18表达阳性鉴定肾小管上皮细胞。 结果:接种后观察,视野中分布大量肾小管节段,纯度在98%以上。原代培养24~48小时见肾小管节段大部分贴壁,少部分始终漂浮于培养液中、不能贴壁。24小时后有少量上皮样细胞从肾小管节段周边爬出,48小时后有大量卵圆形上皮样细胞从肾小管节段爬出、围绕肾小管节段呈岛屿状向四周扩展。72小时首次更换培养基,细胞生长旺盛、数量几乎较48小时倍增,覆盖45%左右培养瓶底。原代培养96小时,细胞达75%融合;培养120小时,细胞达95%以上融合。细胞于3~7天呈指数样生长,5天后细胞已基本能达到融合、铺满瓶底,细胞呈多边鹅卵石样,透明度及折光性强。传代后的细胞生长迅速,4~5天后可传第2代,传3代后细胞可能因缺乏特殊的生长因子及特定的细胞外基质,生长渐渐缓慢,不能进一步传代。原代培养的细胞经免疫细胞化学鉴定,结果显示:RTECs染色组中98%以上的细胞CK18表达阳性,可见细胞大小均一、细胞核中空而胞浆染色,胞核周围和胞浆内可见不均匀散在分布、强度不一的棕褐色颗粒状、点状染色。阳性染色结合形态学观察证实培养细胞98%以上为肾小管上皮细胞。 结论:采用机械分离、胰蛋白酶2次消化、2次筛网过滤、结合Percoll密度梯度离心法分离纯化肾小管后进行改良原代培养。结合形态学及免疫细胞化学鉴定,原代培养及传代的细胞98%以上为肾小管上皮细胞。该改良方法分离原代培养的肾小管上皮细胞数量多,均一性生长佳,可重复性操作良好;为体外研究草酸钙结晶-肾小管上皮细胞相互作用及治疗药物筛选提供一个良好的实验平台。
【学位授予单位】:贵阳中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R692.4

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 杜胜华,唐德燊,刘华锋;SD大鼠肾小管上皮细胞两种原代培养及传代方法的比较[J];广东医学院学报;2005年01期
2 方开云;石明隽;肖瑛;桂华珍;郭兵;张国忠;;原代肾小管上皮细胞的培养和鉴定[J];贵阳医学院学报;2008年02期
3 毛慧娟,王笑云,徐昌芬,程宝庚;人肾近端小管上皮细胞的原代培养、传代及鉴定方法研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2004年06期
4 刘红,罗蕾,高原;鼠肾近曲小管微分离技术[J];川北医学院学报;2004年02期
5 Marina G MARTYNOVA,Olga A BYSTROVA,Olga M MOISEEVA,Anton L EVDONIN,Kirill A KONDRATOV,Natalja D MEDVEDEVA;The presence of ANP in rat peritoneal mast cells[J];Cell Research;2005年10期
6 刘晓玲;邢淑华;;Percoll法分离培养肾小管上皮细胞[J];徐州医学院学报;2006年02期
7 熊祖应,梅俏,徐叔云;肾组织上皮细胞的培养及其应用进展[J];中国药理学通报;1999年04期
8 廖晓星,唐洪林,孙庭,侯垒,崔功静;肾小管上皮细胞原代培养及鉴定[J];中国现代医药杂志;2004年05期
9 王林;卓丽玲;顾建红;路浩;王富民;刘宗平;;SD大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定[J];中国兽医学报;2008年12期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王庆华;王富民;李前勇;张德志;桂小燕;潘耀宗;汤继顺;;常用分离培养肾细胞方法的比较[J];安徽农业科学;2012年15期
2 王俊然;郑素琴;邢红英;;川芎嗪对TGF-β_1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究[J];重庆医学;2012年06期
3 王金勇;申元英;季伶斌;;胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养[J];大理学院学报;2009年12期
4 刘红;罗蕾;高原;;2型糖尿病大鼠近球小管Na~+,K~+-ATPase活性变化[J];第三军医大学学报;2006年20期
5 陈曦;李军;姜小飞;石理;;对比剂对大鼠肾近球小管钠钾ATP酶活性的影响[J];广东医学;2011年11期
6 刘晓玲;邢淑华;;SB203580对缺氧/复氧损伤诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制[J];中国临床药理学杂志;2008年05期
7 方开云;石明隽;肖瑛;桂华珍;郭兵;张国忠;;原代肾小管上皮细胞的培养和鉴定[J];贵阳医学院学报;2008年02期
8 方开云;石明隽;肖瑛;桂华珍;郭兵;张国忠;;小干扰RNA对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞Snail 1表达的抑制作用[J];贵阳医学院学报;2009年02期
9 刘朋飞;黄秀英;董超;冯业童;吴昊昱;刘迪;吴璇;周余来;孙波;;大鼠肾小管上皮细胞的分离鉴定及其增殖活力分析[J];吉林大学学报(医学版);2013年01期
10 周治彦;梁培育;欧善际;李浩勇;;SD大鼠肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定[J];海南医学院学报;2010年05期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 毛慧娟;新型血液净化方式治疗多器官功能障碍综合征及其对免疫功能影响的实验和临床研究[D];南京医科大学;2009年
2 刘志刚;泄浊除痹方治疗高尿酸血症物质基础研究[D];广州中医药大学;2011年
3 潘晓亮;棉粕和棉籽壳诱发雄性新疆细毛羊尿石症的研究[D];浙江大学;2011年
4 王林;铅镉联合对大鼠肾脏的毒性研究[D];扬州大学;2009年
5 王代红;内皮祖细胞对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建的实验研究[D];第三军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 欧善际;草酸钙晶体对大鼠肾小管上皮细胞骨桥蛋白表达的影响[D];吉林大学;2011年
2 臧路平;泄浊除痹方总黄酮治疗高尿酸血症机制研究[D];华南理工大学;2011年
3 寇焕起;游离棉酚对小白鼠泌尿系统的影响研究[D];石河子大学;2009年
4 何锦园;含钙肾结石患者肾组织中TRPV5的表达[D];广州医学院;2010年
5 向华;新生山羊肾小管上皮细胞分离培养及永生化的研究[D];西北农林科技大学;2011年
6 石浪涛;钙、磷对奶牛RTECs中STC-1 mRNA和蛋白表达的影响[D];华中农业大学;2011年
7 崔伟;氯沙坦对自发性高血压大鼠近端肾小管上皮细胞Na~+,K~+-ATP酶的影响[D];遵义医学院;2011年
8 梁宁霞;槟榔碱对结肠平滑肌细胞内游离钙离子浓度的影响[D];南京医科大学;2005年
9 沙玉根;Podocin在肾病综合征蛋白尿发生机制中的作用研究[D];南京医科大学;2005年
10 宋静;三甲基氯化锡引发大鼠低血钾症的分子机理探讨[D];山西医科大学;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周世文,刘世杰;牛磺酸和茵陈素对顺铂引起的原代培养肾小管上皮细胞内游离Ca~(2+)浓度变化的影响[J];第三军医大学学报;2002年01期
2 喻陆;肾小管上皮细胞传代培养[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1997年05期
3 沈青,姚裕家,熊英,王峥;新生猪肾近曲小管上皮细胞的体外培养与鉴定[J];华西医科大学学报;2002年03期
4 郑丰;黎磊石;;大黄对体外肾小管细胞增殖的影响[J];金陵医院学报;1991年04期
5 毛慧娟,王笑云,徐昌芬,程宝庚;人肾近端小管上皮细胞的原代培养、传代及鉴定方法研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2004年06期
6 严玉澄;钱家麒;戴慧莉;许雁萍;;人近端肾小管上皮细胞的原代培养[J];上海第二医科大学学报;2005年04期
7 杜胜华,刘华锋,唐德燊,陈孝文;大鼠原代肾小管上皮细胞上IL-18Rα、β链的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年03期
8 刘晓玲;邢淑华;;Percoll法分离培养肾小管上皮细胞[J];徐州医学院学报;2006年02期
9 熊祖应,梅俏,徐叔云;肾组织上皮细胞的培养及其应用进展[J];中国药理学通报;1999年04期
10 涂明利,陈双郧,王卫民,陈霞萍,曹树军;人肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定[J];郧阳医学院学报;2002年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 万建新;郭琦;潘阳彬;崔炯;傅槟槟;许艳芳;;骨髓间充质干细胞修复损伤肾小管上皮细胞:可能与可行?[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年32期
2 李玲,邹万忠,张波,王盛兰,侯琳;病理性因素对体外肾小管上皮细胞表型转化的影响[J];中华肾脏病杂志;2003年01期
3 楚非,邹万忠,孙锁柱,韩志惠,王盛兰;大鼠肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转化的研究[J];中华肾脏病杂志;2003年01期
4 张梅,李晓玫;丝裂素激活蛋白激酶活化与肾小管上皮细胞生物学行为的关系[J];中华肾脏病杂志;2004年03期
5 罗昌霞,张建鄂,丁国华,张庆红,李涛;尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞损伤的作用机制研究[J];实用医学杂志;2004年12期
6 唐可京,李幼姬,谢灿茂,黄顺伟,王碧飞,余学清;Fractalkine/CX3CR1介导的肾小管上皮细胞对巨噬细胞的趋化作用[J];中华内科杂志;2005年03期
7 何玉华,冯梅,梁勇,李飞燕,叶传蕙;肾小管上皮细胞表型转化在肾小管间质纤维化中的作用[J];中国中西医结合肾病杂志;2005年05期
8 张建鄂;罗昌霞;张庆红;李涛;;血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的实验研究[J];郧阳医学院学报;2006年05期
9 刘翔;余学清;李志坚;李军;彭文兴;聂静;;大鼠成体骨髓干细胞在肾小管上皮细胞再生中的作用[J];中国病理生理杂志;2008年01期
10 西月;陈素贤;李才;田琳;苗春生;;马兜铃酸作用下大鼠肾小管上皮细胞尾加压素Ⅱ含量的变化[J];疑难病杂志;2008年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨晓;张春;邓安国;朱忠华;;结缔组织生长因子在肾小管上皮细胞细胞外基质积聚中的作用[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
2 杨雅丽;程晓霞;;肾小管上皮细胞凋亡在肾间质纤维化中的作用及其防治的研究进展[A];2009全国时间生物医学学术会议论文集[C];2009年
3 谭玉莉;黄妍;杨亦彬;;鱼胆汁毒素致肾小管上皮细胞死亡方式及实施干预的试验研究[A];贵州省医学会肾脏病学分会2008年学术年会论文汇编[C];2008年
4 乔晞;陈香美;吴镝;丁瑞;师锁柱;谢院生;洪权;吕杨;王兆霞;尹忠;;衰老大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中肾小管上皮细胞不同凋亡途径的研究[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
5 海波;;环孢素A诱导肾小管上皮细胞转分化作用机制的研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
6 蔡明;袁清;朱有华;;乙醛脱氢酶2介导乙醇预处理减轻肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的作用[A];2012中国器官移植大会论文汇编[C];2012年
7 徐忠秀;秦卫松;曹香华;陈朝红;郑春霞;曾彩虹;刘志红;;二甲苯体外诱导肾小管上皮细胞和足细胞损伤的表观遗传机制研究[A];中国生理学会肾脏生理专业委员会第二届学术年会论文汇编[C];2013年
8 水华;徐联芳;;氟伐他汀对肾小管上皮细胞核因子-κB活性及炎症因子表达的影响[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
9 何丽洁;王汉民;沈青;陈威;;肾小管上皮细胞无血清同步化方法的研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
10 王军祥;;应用原代肾小管上皮细胞检测灵长类血型抗体水平[A];2013中国器官移植大会论文汇编[C];2013年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 华红梅;药损肾先“知”[N];医药养生保健报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曹维;晚期氧化蛋白产物活化肾小管上皮细胞肾素血管紧张素系统[D];南方医科大学;2010年
2 王沛;低氧诱导因子1α在白蛋白过负荷致肾小管上皮细胞损伤中作用的研究[D];郑州大学;2010年
3 丁巍;内质网应激在肾小管上皮细胞凋亡中的作用及机制研究[D];复旦大学;2012年
4 张燊;肾小管上皮细胞损伤诱导草酸钙结石形成与大鼠泌尿系数字构建[D];南方医科大学;2012年
5 王艳艳;马兜铃酸通过膜转运蛋白进入肾小管上皮细胞的研究[D];中国协和医科大学;2009年
6 谭小月;骨形态形成蛋白-7对肾小管上皮细胞转分化作用及其机制的研究[D];中国协和医科大学;2004年
7 曾锐;胆绿素还原酶对缺氧诱导肾小管上皮细胞—间充质转分化的影响和机制研究[D];华中科技大学;2007年
8 陈国纯;Kim-1小鼠模型的构建及其肾纤维化机理研究[D];中南大学;2011年
9 谢恺庆;C-反应蛋白在慢性肾脏病进展中的作用及机制的研究[D];南方医科大学;2010年
10 乔晞;老年大鼠肾脏缺血/再灌注损伤诱导肾小管上皮细胞凋亡的变化特点及机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王阳;改构型酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的预防作用[D];广西医科大学;2010年
2 罗昌霞;白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的实验研究[D];武汉大学;2005年
3 杨永红;细胞因子对肾小管上皮细胞细胞粘附分子-1表达的调控作用[D];第一军医大学;2002年
4 廖晓星;肾小管上皮细胞原代培养及氧化应激凋亡模型的建立[D];江西医学院;2003年
5 向华;新生山羊肾小管上皮细胞分离培养及永生化的研究[D];西北农林科技大学;2011年
6 罗旭;缺氧预处理对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡损伤的保护作用[D];江西医学院;2005年
7 张秀玲;肾小管上皮细胞—间质转化过程中细胞迁移率的变化[D];复旦大学;2011年
8 冉威;低渗对比剂对犬肾小管上皮细胞凋亡及其蛋白表达的影响[D];辽宁医学院;2012年
9 欧善际;草酸钙晶体对大鼠肾小管上皮细胞骨桥蛋白表达的影响[D];吉林大学;2011年
10 钟波;酸性成纤维细胞因子对肾小管上皮细胞—肌成纤维细胞转分化影响的实验研究[D];第三军医大学;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026