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《贵阳中医学院》 2012年
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按摩动态力学刺激防治肥胖对成熟脂肪细胞凋亡和分泌功能的影响及机制研究

刘鲲  
【摘要】:目的:探讨动态力学刺激对成熟脂肪细胞凋亡(PCD,Programmed cell death)及脂联素(APN,Adiponectin)及其结合受体(AdipoR1、AdipoR2)、内脂素(Visfatin)mRNA表达影响的研究,为推拿按摩防治单纯性肥胖提供理论及实验依据。 方法: 1、以28日龄雄性SD大鼠(Sprague Dawley Rat)为实验材料,无菌采集附睾周围的脂肪组织,采用酶消化法分离培养成熟脂肪细胞,通过形态学观察、油红O染色法及RT-PCR方法检测成熟脂肪细胞标志性基因脂联素APN mRNA表达对原代细胞进行鉴定,并配合恒温振荡培养装置对细胞加载动态力学刺激; 2、消化分离30只雄性SD大鼠附睾周围脂肪组织原代培养得到的成熟脂肪细胞并随机分为五组,OR组、60R组、90R组、120R组、150R组。经24h培养同步化后,根据相应的组别加载力不同强度的刺激,每日刺激2次,每次时长30min,间隔时间为12h,连续3日,总计刺激6次。刺激结束后,收集细胞提取DNA、总RNA,分别使用DNA凝胶电泳检测DNA Ladder的产生,观察细胞凋亡现象,RT-PCR半定量分析Bax、Bcl-2基因mRNA表达的变化。 3、按照第二部分的实验方法,获取大鼠的成熟脂肪细胞并随机分组,24h培养同步化后,根据相应的组别加载力不同强度的刺激,刺激结束后,收集细胞提总RNA,使用RT-PCR半定量分析Adiponectin及其结合受体(AdipoR1、 Adipo2)和Visfatin基因mRNA表达的变化。 结果: 1、成功分离及在体外培养成熟脂肪细胞,油红O染色结果呈阳性、RT-PCR法检测脂肪细胞特异性表达基因也为阳性,且表达的量稳定。 2、DNA凝胶电泳观察到DNA Ladder现象的产生,且具有有明显的强度依赖性,刺激强度越大凋亡现象越明显;RT-PCR半定量分析各转速组别间的Bax、 Bcl-2基因mRNA表达水平的变化,Bax基因mRNA表达水平随刺激强度的增强不断上升,且组间差异非常显著(P0.01),Bcl-2的表达基因mRNA表达水平有轻度降低,但无显著性差异(P0.05); 3、 RT-PCR半定量分析各转速组别间的APN、AdipoR1、AdipoR2、Visfatin基因mRNA表达水平的变化,①APN基因mRNA的表达:与OR组相比,60R组与90R组APN的表达水平高于OR组,有及显著差异(P0.01),呈上调趋势;与90组相比,120R组与150组APN的表达水平低于90R组(P0.01),有及显著差异,呈下调趋势;②Adipo Rl基因mRNA的表达:与OR组相比,60R组与90R组APN的表达水平呈上调趋势,60R组高于OR组,但无显著差异(P0.05),90R组高于OR组,有显著差异(P0.05);与90组相比,120R组与150组Adipo Rl的表达水平低于90R组(P0.01),有及显著差异,呈下调趋势;③dipo R2基因mRNA的表达:与OR组相比,60R组与90R组AdipoR2的表达水平呈上调趋势;,60R组高于OR组,但无显著差异(P0.05),90R组高于OR组,有极显著差异(P0.01);与90组相比,120R组与150组AdipoR2的表达水平低于90R组,有极显著差异(P0.01),呈下调趋势;④Visfatin基因mRNA的表达:与OR组相比,60R组与90R组Visfatin的表达水平高于OR组,有极显著差异(P0.01),呈上调趋势;与90组相比,120R组与150组Visfatin的表达水平低于90R组,有极显著差异(P0.01),呈下调趋势; 结论: 1、在现有的实验条件下,通过最大限度模拟成熟脂肪细胞在体内受力环境,成功建立了模拟推拿力学作用机制的模型,为从成熟脂肪细胞角度探讨单纯性肥胖病症防治奠定了基础。 2、体外模拟推拿按摩动态力学刺激能促进成熟脂肪细胞的凋亡,动态力学刺激通过改变Bax和Bcl-2这对凋亡基因的表达水平来调控成熟脂肪细胞的凋亡是推拿能防治单纯性肥胖病症的重要机制之一。 3、通常肥胖患者通常伴有严重的胰岛素抵抗(IR),适当强度按摩动态力学刺激可通过上调脂联素及其受体、内脂素的表达水平来降低肥胖患者的胰岛素抵抗,从而达到肥胖病症的治疗作用。 4、高强度的按摩动态力学刺激使得脂联素及其受体和内脂素的表达水平降低,提示强刺激可激活某种负反馈调节机制,抑制脂联素及其受体和内脂素的表达水平,但具体机制还有待进一步研究。
【学位授予单位】:贵阳中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R244.1

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