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《贵阳中医学院》 2007年
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神经营养和神经损伤保护活性物质筛选研究

袁芳  
【摘要】: 目的:构建有效便捷的细胞模型筛选具有神经营养和(或)神经损伤保护的活性物质。利用所建模型对部分贵州中药及民族药粗提物及化合物进行神经营养和神经损伤保护活性筛选,寻找具有神经营养和(或)神经损伤保护的活性物质,为进一步开展对贵州中药及民族药进行神经营养和神经损伤保护活性物质研究提供方法学保障和实践经验。 研究方法:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(rat pheochromocytoma cells, PC12)具有较高的稳定性和同质性,分化程度高,对神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)有较强的反应,生长出神经突起,被广泛应用于有关神经细胞分化和功能的各种研究。本工作利用PC12以上特点构建以下细胞模型1)促神经细胞分化小分子活性物质的筛选模型,2)抗过氧化氢损伤PC12细胞模型,3)抗β-淀粉肽损伤PC12细胞模型,4)抗谷氨酸损伤PC12细胞模型。通过考察不同的细胞密度、损伤物质的浓度、及损伤物质的作用时间等方面对PC12细胞的影响,选择合适的实验条件。通过对模型条件的优化为开展大规模样品筛选提供简便有效的方法。筛选实验前先通过MTT法评价各样品在预设浓度下对PC12细胞生长的抑制程度,再通过过氧化氢、β-淀粉肽、谷氨酸致PC12细胞损伤模型评价样品对过氧化氢、β-淀粉肽、谷氨酸损伤的抑制作用,有利于对样品的活性作出全面、客观、准确的评价及筛选出有效低毒的活性物质。 结果:本工作成功复制促神经细胞分化小分子活性物质的筛选模型、抗过氧化氢损伤PC12细胞模型、抗β-淀粉肽损伤PC12细胞模型、抗谷氨酸损伤PC12细胞模型。通过对实验条件的优化确定了模型条件。利用所建模型对314个样品进行了促神经细胞分化活性筛选,筛选出37个活性样品;对205个样品进行了抗过氧化氢损伤PC12细胞活性筛选,筛选出149个活性样品;对35个样品进行了抗β-淀粉肽损伤PC12细胞活性筛选,筛选出17个活性样品;对34个样品进行了抗谷氨酸损伤PC12细胞活性筛选,筛选出27个活性样品。 结论:所构建模型稳定性较好,可操作性强,便捷有效。为筛选具有神经营养和神经损伤保护活性物质提供了模型,为下阶段在贵州中药和民族药中开展大规模的筛选具有神经营养和神经损伤保护活性物质提供可靠的方法和实践经验。
【学位授予单位】:贵阳中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R741

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【参考文献】
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