收藏本站
《昆明理工大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

as和chr基因表达载体构建及转化洋桔梗研究

周雨隆  
【摘要】:洋桔梗(Eustoma grandiflorum)为龙胆科(Gentianacea)草原龙胆属植物。洋桔梗植株轻盈滞洒,花色典雅明快,花形别致可爱。经过30多年的研究,洋桔梗最为一种国际市场上十分流行的盆花和切花种类,目前拥有深蓝、粉、玫瑰红、黄、白、蓝等颜色。但复色花的种类和颜色较少,为丰富和提高洋桔梗复色花的种类,本研究尝试通过遗传操作在洋桔梗品种(Eustoma grandiflorum,Prairie gentian 315P)中过量表达as和chr,期望改变这种洋桔梗的花色,产生紫色花边黄色底的花瓣,为花卉的分子育种提供理论依据。本研究主要获得了以下结果: 1.提取黄色金鱼草花瓣的RNA反转录合成cDNA。通过PCR将as基因扩增出来,利用TA克隆技术亚克隆到pMD19-T载体中获得pMD19-as.用限制性内切酶切割pMD19-as质粒和含有光诱导型启动子PrbcS的Gateway入门载体pENTR*-PrbcS-*T-gfp(马莉,硕士论文)纯化质粒,回收所需要的载体和目的基因片断,用连接酶对目的基因片断和载体片断进行连接,获得含有PrbcS启动子的入门载体pENTR*-PrbcS-as.通过gateway技术的LR反应把PrbcS-as片段亚克隆到植物表达载体pK2WG7中,产生诱导型的植物表达载体pK2-35S-PrbcS-as 2.用限制性内切酶切割纯化的pMD19-as质粒和Gateway的入门载体pENTR*-2B纯化质粒,回收所需要的载体和目的基因片断,用连接酶对目的基因片断和载体片断进行连接,获得as的入门载体pENTR*-as.通过gateway技术的LR反应把as片段亚克隆到植物表达载体pK2WG7中,产生组成型的植物表达载体pK2-35S-as. 3.提取黄色苜蓿花瓣的RNA反转录合成cDNA.通过PCR将chr基因扩增出来,利用TA克隆技术亚克隆到pMD19-T载体中获得pMD19-chr.用限制性内切酶切割pMD19-chr质粒和含有光诱导型启动子PrbcS的Gateway入门载体pENTR*-PrbcS-adh(宋中邦,硕士论文)纯化质粒,回收所需要的载体和目的基因片断,用连接酶对目的基因片断和载体片断进行连接,获得含有PrbcS启动子的入门载体pENTR*-PrbcS-chr.通过gateway技术的LR反应把PrbcS-chr片段亚克隆到植物表达载体pH2WG7中,产生光诱导型的pH2-35S-PrbcS-chr植物表达载体。 4.用限制性内切酶切割纯化的pMD19-chr和质粒和Gateway入门载体pENTR*-2B纯化质粒,回收所需要的载体和基因目的片断,用连接酶对目的基因片断和载体片断进行连接,获得含有chr的入门载体pENTR*-chr。通过gateway技术的LR反应把chr片段亚克隆到植物表达载体pK2WG7中,形成组成型的pK2-35S-chr植物表达载体。 5.因为洋桔梗(Prairie gentian 315P)的组培和转化方法不够成熟,因此本研究通过试验确定这种洋桔梗叶片不定芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L。通过洋桔梗叶片抗生素敏感性实验,确定了这种洋桔梗转化不定芽筛选抗生素(卡那霉素,Km)的最适浓度为15mg/L,有效抑制农杆菌的头孢噻肟钠(Cef)的浓度为300mg/L。 6.对构建好的植物载体采用电转化法导入到农杆菌C58C1(pPMP90)中,再利用农杆菌介导法转化洋桔梗。获得了3种转基因洋桔梗株系,获得转pK2-35S-as基因株系4株,获得转pK2-35S-PrbcS-as基因株系3株和转pK2-35S-chr株系2株。基因组PCR检测实验结果表明as和chr基因已转入的洋桔梗基因组中。as和chr基因表达水平的检测和花瓣颜色变化的观察将在以后的研究计划中进行。
【学位授予单位】:昆明理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S682.19

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 詹革胜,黄新,傅玉兰;植物激素在洋桔梗组培快繁中的应用效果[J];安徽农学通报;2004年06期
2 张子学,丁为群,乔华伟,崔广荣;洋桔梗的快速繁殖研究[J];中国林副特产;2005年04期
3 梁美霞,刘守伟,李景富;农杆菌介导的番茄遗传转化研究进展[J];东北农业大学学报;2004年02期
4 徐清燏,戴思兰;蓝色花卉分子育种[J];分子植物育种;2004年01期
5 毛元荣,汤敏,路群,周根余;洋桔梗组织培养生根的初步研究[J];广西农业科学;2004年02期
6 李群,刘光勇,王丽;激素对洋桔梗植株再生的影响及生根培养的研究[J];广西植物;2004年01期
7 刘石泉,余庆波,李小军,路群,周根余;观赏植物花色基因工程的研究进展[J];贵州林业科技;2004年02期
8 刘志祥,洪亚辉,莫爱华,蒋泓;观赏植物花色分子遗传学及基因工程研究进展[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2002年06期
9 李艳,惠有为,张仲凯,黄兴奇,李毅;转查耳酮合酶基因矮牵牛共抑制的研究[J];中国科学(C辑:生命科学);2001年05期
10 杨燕燕;陈崇顺;瞿大枞;王轶;曹伟杰;;洋桔梗高频再生系统的建立及其卡那霉素敏感性测定[J];江苏农业科学;2007年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 郑阳霞;枸杞类胡萝卜素合成酶基因(PSY、LycB)的克隆及其转化洋桔梗的研究[D];四川农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 毛元荣;洋桔梗叶片再生体系的建立及农杆菌介导的NPRI基因转化洋桔梗的初步研究[D];上海师范大学;2004年
2 刘佳;花色调节基因Lc转化洋桔梗的研究[D];上海师范大学;2005年
3 聂小容;石斛兰花期和花色的转基因研究[D];四川农业大学;2005年
4 杨燕燕;洋桔梗高频再生系统的建立及几丁质酶基因的转化[D];南京师范大学;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 叶重阳;;生物技术在花卉产业中的应用[J];安徽教育学院学报;2006年03期
2 陈孝玉龙;胡小京;刘进平;崔远远;;赤霉素对不同光温条件下洋桔梗幼苗生长的影响[J];山东农业科学;2009年11期
3 汪爱田,刘艳;土耳其桔梗组织培养与快速繁殖[J];安徽农学通报;1999年04期
4 狄曙玲;刘列钊;柴友荣;杨光伟;;类黄酮物质及查尔酮合酶在油菜性状改良中的作用[J];安徽农学通报;2007年18期
5 王桂梅;贺美忠;杨富;;桔梗组织培养技术的研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2012年07期
6 傅玉兰,杨海燕,姚萍;植物激素在洋桔梗组培快繁中的应用研究[J];安徽农业科学;2005年10期
7 高志勇;;番茄的应用价值及其转基因工程研究进展[J];安徽农业科学;2006年09期
8 孙明;吕晋慧;张启翔;;花香基因工程研究进展[J];安徽农业科学;2007年11期
9 朱美霞;王兰明;;仙客来分子育种研究进展[J];安徽农业科学;2007年26期
10 毕玉霞;董红霞;方磊涵;孙学领;;不同炮制方法对黄芪中糖含量的影响[J];安徽农业科学;2007年29期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈晓丽;刘凤栾;郗琳;杨会芳;阿布都热扎克·依沙克;李俊香;马男;赵梁军;;观赏植物生物技术研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
2 彭镇华;汪政科;;观赏植物基因工程研究进展[A];中国花卉科技进展——第二届全国花卉科技信息交流会论文集[C];2001年
3 刘厚诚;黄琴;刘晴;陈日远;;园艺植物中花色苷调节因子及影响因素的研究进展[A];中国园艺学会第五届青年学术讨论会论文集[C];2002年
4 管清美;马锋旺;程顺昌;;反义RNA技术在园艺植物基因工程中的应用[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
5 赵强;李颖;李庆典;;药食与观赏兼用植物——百合的研究进展[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
6 许锋;程水源;;植物查尔酮合成酶分子生物学研究进展及展望[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
7 钟淮钦;吴建设;黄敏玲;钟海丰;黄双龙;叶秀仙;;观赏向日葵花瓣发育过程中花色素苷及其相关生理物质积累的初步研究[A];中国观赏园艺研究进展 2009[C];2009年
8 周琳;王雁;彭镇华;;黄色花形成机制及基因工程研究进展[A];中国观赏园艺研究进展 2009[C];2009年
9 Jean Leonard Seburanga;;Flowers and Ornamentals of Rwanda:From Symbols to Cash Crops[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
10 熊华斌;程在全;王玲仙;鄢波;郑丽屏;黄兴奇;;国内外转基因花卉的研究进展[A];云南省作物学会2000—2003年优秀论文选集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王延玲;新疆红肉苹果红色发育机理的初步研究[D];山东农业大学;2011年
2 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
3 陈柯羽;岩黄连中小檗碱型生物碱生物合成途径相关基因的研究及藜芦中甾体生物碱的微生物转化[D];第二军医大学;2011年
4 孙翊;瓜叶菊PCFH基因对花青素苷合成及花色的影响[D];北京林业大学;2011年
5 王秋红;草原龙胆生殖生物学及其差异蛋白质组学的研究[D];东北林业大学;2011年
6 田露申;甘蓝型油菜异源白花性状的遗传及相关基因的克隆与分析[D];四川农业大学;2011年
7 姜清彬;细枝木麻黄再生体系及农杆菌介导遗传转化研究[D];中国林业科学研究院;2011年
8 崔健;箬竹属植物黄酮类物质与挥发性成分的研究[D];中国林业科学研究院;2011年
9 苏德泳;天然喹喏里西丁和吲哚里西丁生物碱化合物的全合成研究[D];清华大学;2010年
10 高建杰;苹果两个MYB转录因子基因的克隆与功能分析[D];南京农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 詹菁;百合AGAMOUS同源基因的克隆、载体构建及遗传转化[D];华中农业大学;2010年
2 曹玉江;黄瓜显微结构及类黄酮和类胡萝卜素关键酶基因表达差异的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 曹磊;四种真菌多糖抗氧化和抗肿瘤及免疫调节活性的研究[D];郑州大学;2010年
4 霍凤梅;洋葱种质资源遗传多样性的SRAP分析与查尔酮合成酶基因的分子克隆与表达研究[D];山东农业大学;2010年
5 许鑫科;两种彩叶植物叶色表达相关机理研究[D];山东农业大学;2010年
6 杨科家;元宝枫叶色、叶形与翅果的变异研究[D];山东农业大学;2010年
7 孙美莲;茶儿茶素生物合成相关基因表达的实时荧光定量PCR分析[D];安徽农业大学;2010年
8 赵鑫;特异性启动子调控ACC氧化酶反义基因载体构建及对甜瓜‘玉金香’的转化[D];甘肃农业大学;2010年
9 王继磊;两种Bt基因(cry1C~*和cry2A~*)抗虫花卉的培育[D];昆明理工大学;2010年
10 何毅敏;海藻糖基因表达载体构建及转化洋桔梗研究[D];昆明理工大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 詹革胜,黄新,傅玉兰;植物激素在洋桔梗组培快繁中的应用效果[J];安徽农学通报;2004年06期
2 郑志亮;花卉作物的花色基因工程[J];北方园艺;1994年03期
3 苏焕然,张丹,汪清胤,黄永芬;花卉基因工程研究进展[J];北方园艺;1996年04期
4 郝立新,王贤,周涤;花卉植物洋桔梗和火鹤的组培快繁技术[J];北京农业科学;2000年01期
5 张子学,丁为群,乔华伟,崔广荣;洋桔梗的快速繁殖研究[J];中国林副特产;2005年04期
6 师校欣,陈四维,马宝焜,高仪;苹果砧木离体培养中玻璃化问题的研究[J];河北农业大学学报;1990年03期
7 吴关庭;陈锦清;;高羊茅遗传转化研究进展[J];草业科学;2006年12期
8 梁美霞,刘守伟,李景富;农杆菌介导的番茄遗传转化研究进展[J];东北农业大学学报;2004年02期
9 张敩方,张喜春,刘宏伟,么清雅,李奇石;仙客来离体叶培养与植株再生[J];东北林业大学学报;1992年04期
10 张建民;利用农杆菌介导将外源基因导入番茄的研究[J];东北林业大学学报;1999年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 熊玉兰;橘红心白菜和普通大白菜类胡萝卜素代谢途径主要酶基因的表达分析[D];首都师范大学;2002年
2 毛元荣;洋桔梗叶片再生体系的建立及农杆菌介导的NPRI基因转化洋桔梗的初步研究[D];上海师范大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 詹革胜,黄新,傅玉兰;植物激素在洋桔梗组培快繁中的应用效果[J];安徽农学通报;2004年06期
2 乔学义;赵群;;洋桔梗的栽培管理[J];中国花卉园艺;2007年02期
3 夏忠强;吴艳华;王再鹏;;洋桔梗切花设施栽培技术[J];北方园艺;2008年07期
4 曾宋君;;幽秀华美洋桔梗[J];花木盆景(花卉园艺);2001年06期
5 王成业;王素芝;朱冬梅;;洋桔梗的栽培管理[J];四川农业科技;2006年03期
6 陆继亮;;洋桔梗需求旺盛,发展潜力巨大[J];南方农业(园林花卉版);2009年02期
7 陆继亮;;云南洋桔梗切花生产技术关键[J];中国花卉园艺;2011年06期
8 李永红;切花洋桔梗育苗三法[J];中国花卉园艺;2003年01期
9 陆继亮;柏斌;;坂田公司在云南举办洋桔梗展示会[J];中国花卉园艺;2010年14期
10 达克东,张松,臧运祥,张志国,吴禄平;洋桔梗叶片培养不定芽发生和微繁研究[J];山东农业大学学报(自然科学版);2003年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春台;;一个新的烟草糖基转移酶的初步研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
2 田爱梅;曹家树;;白菜雄性不育相关基因BcMF15启动子的克隆、序列分析及植物表达载体的构建[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
3 郝建江;刘望夷;谢伟军;黄骏麒;龚蓁蓁;;抗真菌蛋白(AFP)基因转化棉花和烟草的研究[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
4 林炳英;李梅;;乙肝表面抗原基因植物表达载体的构建[A];2006中国植物细胞发育与分子生物学学术研讨会论文集[C];2006年
5 陈红漫;祝令香;董志扬;;酿酒酵母海藻糖-6-磷酸合成酶基因克隆及植物表达载体的构建[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
6 高水平;范丙友;刘改秀;史国安;李嘉珏;孔祥生;;牡丹ACS反义基因植物表达载体的构建[A];中国观赏园艺研究进展(2010)[C];2010年
7 罗齐军;朱昌叁;周鹏;曾富华;;Rs-AFP2基因植物表达载体的构建及其转化辣椒的研究[A];2005年全国植物逆境生理与分子生物学研讨会论文摘要汇编[C];2005年
8 胡根海;喻树迅;范述丽;宋美珍;王清连;付远志;;陆地棉叶绿体超氧化物歧化酶基因的克隆与植物表达载体的构建[A];中国棉花学会2007年年会论文汇编[C];2007年
9 周庆丰;曹永长;毕英佐;;传染性法氏囊病病毒VP2基因植物表达载体的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
10 谢会;张春荣;陈云凤;黄霞;黄学林;;苜蓿TPP基因cDNA全长序列的克隆及植物表达载体的构建[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陆继亮;“瑞园模式”开创洋桔梗推广新格局[N];中国绿色时报;2011年
2 本报特约记者 陆继亮;“瑞园模式”助洋桔梗推广[N];中国花卉报;2011年
3 柳原   ;昆明立深新园一心一意种植洋桔梗 [N];中国花卉报;2003年
4 沈敏东;洋桔梗的栽培[N];中国花卉报;2003年
5 记者 普琼;首个洋桔梗专业服务队在通海成立[N];玉溪日报;2008年
6 记者 潘绍斌 邢定生;通海瑞园洋桔梗艳惊农博会[N];玉溪日报;2009年
7 本报特约记者 柏斌;洋桔梗怒放通海[N];中国花卉报;2010年
8 本报特约记者 陆继亮;洋桔梗生产田间管理是关键[N];中国花卉报;2010年
9 昆明缤纷园艺有限公司项目经理 黄仲恩;洋桔梗育苗技术要点[N];中国花卉报;2010年
10 柏斌;洋桔梗富了通海花农[N];中国绿色时报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨小玲;SeNHX1耐盐分子机制与耐盐洋桔梗培育[D];天津大学;2010年
2 冷华妮;植物栓塞修复机制与质膜内在水通道蛋白基因的克隆、表达和转基因研究[D];中国林业科学研究院;2012年
3 Shahjahan Shabbir Ahmed Rana;辣椒多聚半乳糖醛酸酶基因(CaPG)在茄科植物上的表达与功能分析[D];西北农林科技大学;2012年
4 周晓红;弓形虫MAG和tSAG1在转基因番茄中的表达研究[D];第一军医大学;2004年
5 郑阳霞;枸杞类胡萝卜素合成酶基因(PSY、LycB)的克隆及其转化洋桔梗的研究[D];四川农业大学;2006年
6 唐前君;双生病毒外壳蛋白和传毒相关蛋白基因介导的病毒抗性研究[D];湖南农业大学;2010年
7 李丽娅;铁(Ⅲ)螯合物还原酶在植物铁代谢中的作用研究[D];哈尔滨师范大学;2011年
8 韩小娇;杨树木质部细胞程序化死亡的类Caspase、PtVPE与PtCDD作用研究[D];中国林业科学研究院;2011年
9 唐宏琨;激发子基因peaT1转化棉花和烟草体系的建立及功能分析[D];中国农业科学院;2010年
10 刘学奋;银杏黄酮相关基因的克隆及转化[D];复旦大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周雨隆;as和chr基因表达载体构建及转化洋桔梗研究[D];昆明理工大学;2009年
2 陈红梅;skti和p-lec表达载体构建及转化洋桔梗研究[D];昆明理工大学;2009年
3 郁萌萌;光叶楮再生体系的建立及农杆菌介导的AtNHX1基因转化光叶楮的初步研究[D];南京师范大学;2005年
4 蔺晓忠;密码子优化的O型口蹄疫病毒VPI基因转化饲草玉米的高效表达载体构建[D];甘肃农业大学;2007年
5 王心宇;番茄DR8基因启动子转化烟草及其定性研究[D];重庆大学;2009年
6 芮志佩;金属硫蛋白(MT)基因植物表达载体的构建及其在水生美人蕉中表达的初步研究[D];扬州大学;2009年
7 于丹丹;番茄转录因子SlMYB12介导的类黄酮合成过程中的功能研究以及水稻抗病相关基因OsDRxoc5的功能分析[D];山东农业大学;2011年
8 马鑫;柚柠檬苦素葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及植物表达载体的构建[D];西南大学;2011年
9 苏月焱;多基因植物表达载体的构建及转化分析[D];中国农业科学院;2013年
10 刘娜;无核荔枝中果胶乙酯酶基因转化番茄的研究[D];海南大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026