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《昆明医学院》 2011年
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实时荧光定量PCR技术对结直肠癌患者肠道微生态的研究

郭世奎  
【摘要】:目的应用实时荧光定量PCR法研究结、直肠癌患者与健康人群肠道菌群的差异,以及手术前后肠道菌群的变化,探讨结、直肠癌患者具体的肠道微生态学背景,及手术处理与肠道相关分子微生态的密切关系,揭示手术处理及肠道微生态改变在结直肠癌发生、发展中的作用及意义。并通过肠道菌群量的变化,进行筛查,确定结、直肠癌高危人群,行饮食干预及相关检查,达到早期诊断,早期治疗的目的,为结、直肠癌的预防及诊治提供新视角。 方法收集手术前后结、直肠癌患者粪便标本及正常对照标本各50份,提取待测粪便标本细菌DNA,根据细菌的16S rRNA基因序列设计双歧杆菌属、乳酸杆菌属、大肠杆菌、多形拟杆菌及梭杆菌属的特异性引物;根据细菌的ddl基因序列设计粪肠球菌及屎肠球菌的特异性引物;根据细菌的cfxA基因序列设计拟杆菌属的特异性引物,cfiA基因序列设计脆弱拟杆菌的特异性引物,mob基因序列设计单形拟杆菌的特异性引物,rpoB基因序列设计卵形拟杆菌、吉氏拟杆菌、普通拟杆菌的特异性引物;根据细菌的gyrB基因序列设计坏死梭杆菌的特异性引物;根据细菌的rrnA-16S基因序列设计梭菌属的特异性引物,BoNT基因序列设计肉毒梭菌的特异性引物,swp84基因序列设计艰难梭菌的特异性引物,应用实时荧光定量PCR测定不同细菌的数量。 结果正常对照组、结直肠癌术前及术后组粪便中细菌数量分别为双歧杆菌属(9.15±0.73;4.32±0.45;1.47±0.28)、乳酸杆菌属(7.35±0.47;5.56±0.22;3.52±0.36),其手术前、后实验组数量较正常组明显减少(P0.05),以术后为甚。大肠杆菌(4.78±0.42;5.72±0.48;4.85±0.37),粪肠球菌(4.85±0.54;8.30±0.42;2.48±0.44),屎肠球菌(5.23±0.53;5.64±0.26;1.55±0.29),拟杆菌属(8.66±0.67;9.75±0.87;6.32±0.47),梭杆菌属(7.64±0.45;10.1±0.55;6.42±0.58),梭菌属(6.17±0.37;6.36±0.58;5.28±0.39),拟杆菌属中脆弱拟杆菌为(3.42±0.39;6.15±0.45;3.25±0.58)、单形拟杆菌为(5.69±0.95;8.70±2.18;5.11±1.49)、多形拟杆菌为(5.01±0.61;9.41±2.34;4.47±0.41)、卵形拟杆菌为(4.78±1.03;9.07±1.75;5.22±0.49)、吉氏拟杆菌为(4.21±0.71;9.53±2.46;4.58±0.39)、普通拟杆菌为(2.92±1.30;8.48±0.32;3.80±0.87),梭杆菌属中的坏死梭杆菌为(2.25±0.46;7.34±0.56;3.58±0.45),梭菌属中的肉毒梭菌为(2.64±0.56;5.39±0.43;1.47±1.02);艰难梭菌为(1.65±0.51;3.56±0.47;1.44±0.35),术前实验组数量较正常组明显增多(P0.05),术后实验组数量较术前明显减少(P0.05)。 结论 1、结、直肠癌的发生、发展与肠道菌群有明显关系,其手术处理可影响肠道菌群量的变化,阐明了手术处理及肠道菌群改变在结直肠癌发生、发展中有一定作用。 2、实时荧光定量PCR法成功克服了传统培养法细菌培养困难,培养耗时长,灵敏度低,定量不准确等缺陷。 3、实时荧光定量PCR法实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点广泛应用于结、直肠癌患者肠道相关分子微生态的研究。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R735.34

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