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《昆明医学院》 2011年
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多发性骨髓瘤U266细胞株中肿瘤干细胞的分离及生物学特性的初步研究

保秋萍  
【摘要】:【目的】比较免疫磁珠分选与流式SP细胞分选U266细胞株中MM干细胞方法的差异,进一步从细胞周期、耐药蛋白、CD138抗原表达、体外克隆培养试验以及相关融合基因的表达情况等方面,来分析分选后的肿瘤干细胞样SP细胞和CD138-细胞的生物学特性及其耐药性。 【方法】采用流式细胞仪检测U266细胞株中的SP细胞比例和CD138抗原表达率,并利用流式SP细胞分选和免疫磁珠分选方法分离得到SP细胞、NSP细胞、CD138阳性细胞和CD138阴性细胞,并采用流式检测这四个细胞亚群的细胞周期、耐药蛋白、CD138抗原表达、甲基纤维素克隆培养生长的情况,RQ-PCR检测融合基因ABCG2、MDR1、SMO、BCL-2、BAX的表达情况等分析其生物学特性。 【结果】U266细胞株中分选前SP细胞比例为2.46±0.35%,CD138抗原表达率为77.68±2.14%。分选后SP细胞中CD138抗原表达率位2.74±0.32%,明显低于NSP细胞(98.08±0.48%),CD138-细胞中CD138抗原表达率为4.08±1.89%,明显低于CD138+细胞(88.36±8.08%),分选后的绝大多数SP细胞和CD138-细胞都处于GO期,G0/G1比例分别达81.50±5.42%,57.85±3.16%,且分别高于NSP细胞和CD138+细胞。SP细胞中P-gp阳性表达率为77.74±0.70%,高于NSP细胞(53.0±1.09%),CD138-细胞中P-gp阳性表达率为43.76±1.24%,高于CD138+细胞(12.66±0.75%);SP细胞中ABCG2阳性表达率为88.72±0.79%,显著高于NSP细胞(36.28±0.75%),CD138-细胞中ABCG2阳性表达率为63.02±2.28%,显著高于CD138+细胞(23.05±1.55%)。SP细胞和CD138-细胞的体外克隆形成能力较强,集落形成率分别为39.45±4.02%,31.05±6.82%,显著高于NSP细胞(8.21±3.85%)和CD138+细胞(6.82±2.90%)。融合基因ABCG2, MDR1, SMO, BCL-2在SP细胞中的表达显著高于NSP细胞,CD138-细胞中的表达显著高于CD138+细胞,而BAX基因的表达则与之相反。经统计学分析显示,以上差异均有统计学意义。 [结论]U266细胞株中存在比例较少的SP细胞和CD138-细胞亚群,SP细胞和CD138-细胞大多数处于静止期、高表达ABC转运蛋白、体外克隆形成能力较强,上述生物学特点证明了它们具有肿瘤干细胞特性。SP细胞和CD138-细胞中大多数细胞处G0期的特点,以及ABCG2、MDR1、SMO、Bcl-2基因表达均明显增强,BAX表达减弱的特点,共同参与MM干细胞具有的多重复杂的耐药性及机制的形成。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R733.3

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