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《昆明医学院》 2011年
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EGFR-mAb/GNRs靶向光热效应对喉癌细胞作用的实验研究

王苑伶  
【摘要】:[目的]检测表皮生长因子受体蛋白(EGFR)在喉癌组织中的表达,观察金纳米棒(GNRs)以及抗表皮生长因子受体功能化修饰金纳米棒(EGFR-mAb/GNRs)对细胞的增值抑制作用,探索金纳米棒功能化修饰前后光热效应对HEP-2喉癌细胞株及BEAS-2B肺正常上皮细胞株杀伤效应及凋亡现象。为进一步实验研究打下基础。 [方法] 1、采用蛋白质印迹(western Blot)方法检测EGFR蛋白在HEP-2喉癌细胞株、正常喉上皮组织和喉癌组织中的表达情况。 2、表征GNRs以及合成的EGFR-mAb/GNRs。体外培养HEP-2喉癌细胞株和BEAS-2B肺正常上皮细胞株,对数生长期细胞平铺到96孔板中,分别加入终浓度为(0.01-0.32 nM)的GNRs溶液和EGFR-mAb/GNRs溶液,观察GNRs进入细胞的情况,MTT法检测GNRs及EGFR-mAb/GNRs对HEP-2喉癌细胞及BEAS-2B肺正常上皮细胞的毒性作用。 3、上述细胞分为以下实验组:(1)阴性对照(NC)实验组(2)单纯光照组(Light) (3) 0.04 nM GNR组(4)0.04 nM EGFRmAb/GNR组,MTT法检测在808nm波长近红外线(near-infrared, NIR)照射(0.8-4w/cm2) 5min对HEP-2喉癌细胞及BEAS-2B肺支气管上皮细胞的光热杀伤效应,流式细胞仪(floweytometry , FCM)检测喉癌细胞的热效应细胞凋亡现象。 4、实验结果数据以均数±标准差(x±s)表示,采用spss17.0统计软件处理,两组数据采用t检验法进行统计学分析。多组数据用单因素方差分析进行两两组间比较,结果以P0.05作为差异有统计学意义。 [结果] 1、Western Blot半定量结果显示,EGFR在喉癌组织中高表达,其表达水平远高于正常对照粘膜组织(P0.05)。 2、GNRs大小一致,分布均匀、单分散性好,颗粒均呈棒状,平均长宽比为3.9,溶液稳定,长时间放置不会出现絮状沉淀。在540nm和822nm附近有两个等离子共振吸收峰,其808nm附近的吸收峰处于近红外区域(800-1200nm),是肌体组织的安全透射窗口,则其可用于近红外热疗。 3、MTT法检测细胞毒性时发现,GNRs和EGFRmAb/GNRs分别同喉癌细胞和肺正常上皮细胞共同孵育,其存活率随浓度增加而减少,半数抑制率即抑制率为50%的时候的药物浓度(IC50)分别为喉癌细胞:0.07nM和0.14nM,肺正常上皮细胞:0.14nM和0.18nM。HEP-2细胞和BEAS-2B细胞应用GNRs近红外激光照射后对细胞的增殖生长都有抑制作用;且抑制作用随着照射功率的增大,细胞的存活率也逐渐降低。HEP-2细胞2、3、4组间比较P值均0.01,为显著差异。相对于阴性对照组,各组均有有统计学意义,P0.05, BEAS-2B细胞的3、4组间比较P值均0.05,差异不具有统计学意义。同时HEP-2细胞和]BEAS-2B细胞经相同近红外激光照射热疗作用时,各实验组BEAS-2B的细胞抑制作用均远小于对HEP-2细胞抑制作用。 4、GNRs经NIR照射下才有诱导细胞的凋亡的作用,并有浓度依赖性。而单纯照光组和没有经过NIR照射的GNRs则没有明显诱导细胞凋亡或者促进细胞死亡的作用,只有在高浓度0.04nM才表现较弱的细胞凋亡作用,凋亡率是3.1±0.51%。与阴性对照组相比光照金纳米棒组凋亡细胞有明显差异。 [结论] 1、EGFR在喉癌组织中高表达,其表达水平远高于喉正常对照粘膜组织。 2、GNRs以纳米颗粒的形式大量进入HEP-2细胞内,进入细胞内的GNRs形状未发生改变。进入细胞后大量存在于细胞质和线粒体中。以安全浓度长时间与细胞共存不影响细胞增殖。 3、GNRs在EGFR-mAb功能化修饰后对HEP-2细胞具有较好的定向聚集作用,与GNRs相比应用其进行近红外激光热疗时所需功率低。近红外激光热疗后,HEP-2喉癌细胞比BEAS-2B正常肺上皮细胞对热更敏感。 4. GNRs近红外激光照射下才有诱导细胞的凋亡的作用,并有浓度依赖性。说明在合适的作用条件下(近红外激光2.4w/cm2), GNRs可诱导肿瘤细胞凋亡。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R739.65

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