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《昆明医学院》 2004年
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兔骨髓基质细胞诱导成骨及与珊瑚联合培养实验研究

仲维广  
【摘要】:[目的] 研究骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)体外培养和诱导分化情况。并初步探讨以珊瑚为骨组织工程支架材料的可行性和细胞在材料上的生长情况,以寻求适宜的骨组织工程支架材料。 [方法] 抽取约2月龄兔骨髓,分离骨髓基质细胞进行体外培养,并向成骨细胞定向诱导分化。将诱导的BMSC消化离心收集细胞,取一定浓度接种于珊瑚材料上,进行联合培养,观察细胞在珊瑚上生长状况。 [结果] (1)提取的骨髓基质细胞呈贴壁生长,诱导后可向成骨细胞分化,细胞呈成骨细胞形态为梭形和多角形。细胞连续培养可以互相重叠呈复层生长,无接触抑制现象,并可形成钙化结节;(2)用改良钙钴染色法检测诱导细胞碱性磷酸活性呈强阳性。骨钙素分泌水平比常规对照组明显增高,电子探针分析提示诱导细胞基质钙离子、磷离子含量明显高于用完全DMEM培养基培养的细胞,扫描电镜观察细胞呈较典型的成骨细胞状态,并可见钙盐沉积。改良MTT法测定显示骨髓基质细胞于第7,8天左右可达到增殖高峰;(3)诱导细胞和未诱导细胞传代约12代时细胞形态有所改变,至16代左右细胞体积明显变大,看起来更加扁平,呈不规则形状贴附于瓶底。其活力明显下降,趋于衰老;(4)诱导细胞可以在珊瑚上继续黏附、生长、增殖和分化。扫描电镜检测可见细胞向珊瑚孔隙内生长,呈多角形,并有突起相互连接。有的细胞可覆盖孔隙表面,并可见钙结节形成。 [结论] (1)骨髓基质细胞具有来源充足,取材方便,创伤小无明显并发症。而且其分化增殖能力较强,成骨能力确定。所以采用骨髓基质细胞作为种子细胞构建组织工程骨有比较可靠的依据 (2)通过骨髓基质细胞与珊瑚支架材料的联合培养,珊瑚对于BMSC的生物相容性较好,未发现明显毒性反应。实验表明骨髓基质细胞可在珊瑚上生长、增殖、钙化。
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