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《昆明医学院》 2007年
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实时定量PCR检测淋巴瘤Bcl-2/IgH融合基因及其临床应用研究

徐明  
【摘要】: 目的:建立实时定量PCR检测淋巴瘤患者Bcl-2/IgH融合基因的方法;探讨Bcl-2/IgH融合基因表达水平与疾病进程的关系,从而为淋巴瘤疗效及预后判断提供依据。 方法:以纯化的Bcl-2/IgH阳性的病变淋巴结细胞DNA作为标准品,建立SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR,RQ-PCR),对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行测定,并检测了21例滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)及弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)患者的骨髓和/或外周血和5例对照组的外周血,并对其中的6例患者进行了2-5个疗程的动态监测,探讨该融合基因表达水平的高低与疾病状态,疗效及疾病转归的关系。 结果: 1.以10~(-2)~10~(-8)不同稀释度的标准品DNA模板进行荧光定量PCR扩增后,在10~(-7)仍可得到阳性扩增曲线,说明本研究构建的实时定量PCR方法检测Bcl-2/IgH融合基因的敏感性达10~(-7)水平。 2.以10~(-2)~10~(-7)不同稀释度的标准品DNA模板进行荧光定量PCR扩增,CT值分别为11.35,14.48,17.61,20.74,23.87和27,统计学分析显示每个标准品的CT值与该标准品模板起始浓度的对数存在线性关系,起始浓度越高,CT值越小,相关系数r=0.99,线性关系好。 3.对10~(-4),10~(-5),10~(-6)稀释度的阳性标准模板DNA模板Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ分别做3个反应管检测。比较同一次反应不同反应管间的管间变异及重复3次检测比较不同时间反应结果的批间变异。其管间变异和批间变异分别为6.54%,6.73%,1.90%和3.59%,6.30%,5.49%。 4.样本组骨髓和外周血Bcl-2/IgH融合基因的阳性检测率分别是80%,6596,统计学分析差异无显著性(P=0.64)。滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤Bcl-2/IgH融合基因的阳性率分别为63.64%和60%。 5.阳性病例骨髓和外周血Bcl-2/Igtt融合基因相对拷贝数均数分别是4.22和2.73,统计学分析差异无显著性(P=0.109)。 6.13例阳性病例25例次治疗前后Bcl-2/IgH融合基因的相对拷贝数均数分别是3.61和2.69,统计学分析差异有显著性(P=0.000)。 7.两组(初诊复发患者作为一组,缓解患者作为另一组)不同疾病状态融合基因相对拷贝数均数分别为5.54和2.52,统计学分析差异有显著性(P=0.008)。 8.动态监测6例患者Bcl-2/IgH融合基因的相对拷贝数变化,完全缓解者处于相对较低的水平,复发患者在临床复发前2-3个月Bcl-2/IgH融合基因相对拷贝数有明显上升。 结论: 1.建立的SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR方法灵敏,稳定性和重复性好。 2.Bcl-2/IgH融合基因表达水平与患者的疾病状态有关,初诊复发患者融合基因表达水平高,缓解患者融合基因表达水平低。 3.骨髓和外周血Bcl-2/IgH融合基因的阳性率比较,经统计学分析差异无显著性,两者融合基因表达水平的比较,经统计学分析差异也无显著性。与骨髓相比,外周血取材方便,患者痛苦少,可以随时检测。 4.治疗后Bcl-2/IgH融合基因的表达水平较治疗前明显下降,复发时融合基因表达水平上升尚需增加样本例数进一步研究。其融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系一致,有助于监测淋巴瘤的疾病状态,评价疗效及判断预后。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R733.1

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【同被引文献】
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【二级参考文献】
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