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《昆明医学院》 2008年
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云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化、成纤维细胞活化过程中的相互作用及其机制

边莉  
【摘要】: 【目的】探讨云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化及成纤维细胞活化过程中的相互作用和相关机制。 【方法】(1)选用100μg/ml的云锡矿粉毒染永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B及人胚肺成纤维细胞WI-38,每次染毒72h,隔代染毒直至第9代。自第11代将上述细胞共培养,实验分组如下:B组,W组,B100组,W100组,B(W)组,B(W100)组,B100(W)组,B100(W100)组,W(B)组,W(B100)组,W100(B)组,W100(B100)组。(2)倒置显微镜行活细胞形态观察。(3)流式细胞仪分析细胞周期变化。(4)刀豆凝集素A凝集实验及锚着独立性生长实验检测上皮细胞转化。(5)免疫细胞化学染色检测成纤维细胞活化标志α-SMA表达、上皮细胞FHIT基因蛋白和Ki-67抗原的表达变化。(6)酶联免疫吸附实验检测上皮细胞培养上清液中TGF-β1的含量。(7)免疫印迹检测成纤维细胞FAP、TβRⅡ、HGF表达及Smad2/3磷酸化水平;同法检测上皮细胞TβRⅡ表达及c-Met磷酸化水平。 【结果】(1)云锡矿粉诱导支气管上皮细胞后,细胞形态改变,凝集实验及锚着独立性生长实验阳性,S期比例明显增高,发生恶性转化;与成纤维细胞共培养后恶性转化时间提前。(2)第16代各组成纤维细胞α-SMA为阴性表达;第26代经矿粉打击的成纤维细胞出现α-SMA表达,第36代其表达进一步增强;并以与上皮细胞共培养组明显。(3)未经矿粉打击的各组、各代上皮细胞FHIT蛋白表达相似。矿粉打击后上皮细胞FHIT蛋白表达水平逐渐降低直至表达缺失;转化晚期重现FHIT蛋白的表达,成纤维细胞能促进这一过程的发生。(4)未经矿粉打击的各组上皮细胞ki—67抗原表达相似,随培养代数的增加矿粉打击后的上皮细胞增殖指数逐渐递增,且各组问存在统计学差异(P<0.05)。(5)第16代各组成纤维细胞未检测到FAP蛋白表达。第26代矿粉打击的成纤维细胞检测到FAP蛋白表达,各组表达水平相似。第36代时FAP蛋白表达进一步增强,并以与上皮细胞共培养组明显;同时与受矿粉打击上皮细胞共培养的成纤维细胞也出现了FAP蛋白表达。(6)各组BEAS-2B细胞培养上清存在TGF-β1。各代未受矿粉打击上皮细胞TGF-β1分泌无明显差异。受矿粉打击的上皮细胞培养上清TGF-β1含量升高,并以转化早期明显,而后维持一相对平稳水平。(7)BEAS-2B细胞中存在TβRⅡ,第16代时各组细胞TβRⅡ无明显差异,第26代时受矿粉打击的各组上皮细胞TβRⅡ表达下降,至第36代TβRⅡ表达缺失。未受矿粉打击的各组上皮细胞第26、36代TβRⅡ表达无明显差异。(8)第36代各组各组成纤维细胞均存在TβRⅡ,各组间表达量相似,无表达缺失。(9)第26代与经矿粉打击的上皮细胞共培养的各组成纤维细胞出现Smad2/3蛋白磷酸化。(10)WI-38成纤维细胞中存在HGF表达,矿粉诱导后表达水平随培养代数增加而升高。其与经矿粉诱导的上皮细胞共培养后,表达水平明显提高。并且与受矿粉打击上皮细胞共培养的成纤维细胞培养至第26代时,HGF表达水平轻度升高,至36代时其表达水平进一步增强,与此一致,共培养后的相应上皮细胞组出现了HGF受体c-Met的磷酸化。 【结论】(1)云锡矿粉能诱导支气管上皮细胞发生恶性转化、成纤维细胞发生活化。(2)经矿粉打击的成纤维细胞能够促进经矿粉打击的上皮细胞增殖和转化,同样,经矿粉打击的上皮细胞能促进成纤维细胞活化。(3)单纯矿粉打击后的上皮细胞能使未经矿粉打击的成纤维细胞发生活化转变,而单纯矿粉打击后的成纤维细胞不足以使未经矿粉打击的上皮细胞发生转化。上皮细胞是矿粉诱癌的主要靶细胞。(4)矿粉诱导上皮细胞转化的早期存在FHIT蛋白的丢失,这一事件能被成纤维细胞所促进,提示FHIT可能是矿粉诱癌的一个作用靶点,其表达的减弱或缺失可作为预测肺癌发生危险的生物学标志。(5)活化的成纤维细胞表达α-SMA及FAP,且时间早于上皮转化特征的出现,其α-SMA及FAP的表达可能是肺癌进展的一个早期分子事件。(6)矿粉诱癌过程中,上皮细胞培养上清的TGF-β1含量升高,并以转化早期明显,而后维持—相对平稳水平;转化上皮细胞TβRⅡ表达降低直至缺失;活化成纤维细胞TβRⅡ无明显变化,Smad2/3磷酸化水平升高,提示TGF-β1在矿粉诱癌早期可能起抑制作用,后期通过旁分泌途径起促进作用。(7)矿粉诱癌过程中,活化成纤维细胞HGF表达升高,与之共培养相应上皮细胞c-Met磷酸化水平的升高提示活化的成纤维细胞可能通过HGF/c-Met信号通路促进上皮细胞的转化。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R734.2

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周莉;金克炜;张天宝;;云锡矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化[J];癌变.畸变.突变;2006年05期
2 阮永华;高倩;张林;华海蓉;程锦霖;金克炜;;云锡矿工肺癌中FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达[J];癌症;2007年06期
3 朱红梅,汤为学,周卫平,张晓艳,马静,郑维萍;肿瘤基质成纤维细胞模型的建立及生物学特性研究[J];第三军医大学学报;2005年01期
4 乌新林;施琳;董培德;;肿瘤相关成纤维细胞:抗肿瘤治疗的新靶点[J];国际外科学杂志;2006年02期
5 靳占峰;成纤维细胞激活蛋白与肿瘤[J];国外医学.遗传学分册;2003年02期
6 张晓艳,汤为学;成纤维细胞活化蛋白与肿瘤[J];国外医学(肿瘤学分册);2004年08期
7 蒋建利;周宏伟;陈志南;;成纤维细胞在肿瘤发生发展中的作用[J];国际肿瘤学杂志;2006年02期
8 王靖雯;程建新;;肝细胞生长因子及其受体在肿瘤发生发展中的研究进展[J];河北医科大学学报;2006年06期
9 李存孝;杨彤涛;范清宇;马保安;廖博;刘云燕;;骨肉瘤细胞与成纤维细胞共培养刺激基质金属蛋白酶-2的产生和激活[J];医学研究生学报;2006年02期
10 谢思明,殷操,沈丽佳;FHIT抑癌基因在头颈部鳞癌中的研究进展(综述)[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2003年04期
【共引文献】
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1 陈英;;辐射所致DNA损伤与肿瘤风险[J];癌变·畸变·突变;2011年06期
2 陈晶晶;陈柯;王晓秋;;FHIT及Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义[J];安徽医药;2008年10期
3 阮永华;高倩;张林;华海蓉;程锦霖;金克炜;;云锡矿工肺癌中FHIT基因外显子缺失及其蛋白表达[J];癌症;2007年06期
4 范良生;陈刚;马丁;;柯萨奇-腺病毒受体在肿瘤发生发展机制中的研究进展[J];癌症;2009年03期
5 游震宇;王俊杰;赵勇;;胰岛素样生长因子-1及其受体与前列腺癌[J];癌症进展;2008年03期
6 王李杰;白莉;;原发性肝癌与炎症关系的研究进展[J];癌症进展;2010年04期
7 胡静,张远强,刘新平,王瑞安,许若军;Smads蛋白在大鼠睾丸发育不同阶段的表达和定位[J];动物学报;2001年05期
8 陈华;项明洁;陈广洁;;胰岛素样生长因子-1及其受体和结合蛋白-3与前列腺癌关系的研究进展[J];标记免疫分析与临床;2011年01期
9 薛惠荣;王艳丽;戴智慧;张首杰;崔满华;;FHIT基因在子宫颈癌及上皮内瘤样病变中的表达[J];吉林大学学报(医学版);2006年06期
10 王智昊;吴扬;王英凯;;血管平滑肌细胞的增殖因素及机制[J];吉林大学学报(医学版);2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 孙岩松;吕雅歆;时彦胜;战大伟;张爱兰;杨晓;;Smad3基因剔除小鼠的基因型鉴定与遗传稳定性研究[A];中国实验动物学会第五届学术年会论文汇编[C];2000年
2 杨仕明;刘清明;郭维;胡吟燕;杨伟炎;杨晓;;TGF-β/Smad5基因敲除致聋之机制研究[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
3 姜昌丽;张英起;颜真;;重组人TGF-β1在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫原性测定[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
4 季宇彬;于淼;于蕾;杨文;杨瑛杰;;甲苯二异氰酸酯的研究进展[A];中国毒理学会环境与生态毒理学专业委员会成立大会会议论文集[C];2008年
5 谢永华;谭春燕;刘峰;蒋宇扬;;一种caspase蛋白新型荧光分析方法的建立[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
6 杨晓;孙彦洵;周江;黄培堂;黄翠芬;徐晓玲;李翠玲;J.Cotay;陈林;邓初夏;;Smad5双等位基因剔除ES细胞的建立及其初步研究[A];第六届动物遗传学讨论会论文集[C];2002年
7 叶新苗;唐峰;;消癥散对荷H_(22)肝癌小鼠抑瘤作用的实验研究[A];中华中医药学会方剂学分会2007年年会论文集[C];2007年
8 王桂敏;韩凤丽;;首乌延寿丹对家兔动脉粥样硬化血管PDGF-B、MMP-9表达的影响[A];第四届中医药继续教育高峰论坛暨中华中医药学会继续教育分会换届选举会议论文集[C];2011年
9 王东坤;黄云超;陈安宁;雷玉洁;陈小波;;树鼩肺癌模型与生物材料的关系研究[A];第十六届中国科协年会——分3环境污染及职业暴露与人类癌症学术研讨会论文集[C];2014年
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1 蒋蕾;大黄黄连泻心汤、理中丸(汤)对水浸应激型胃溃疡寒热证模型大鼠影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 朱伟;骨髓间质干细胞在肿瘤进展和肿瘤微环境中的作用及机制[D];江苏大学;2010年
3 孝梦甦;乳腺病变及其术后瘢痕的超声定位光散射断层成像研究[D];北京协和医学院;2010年
4 晏杰;Aurora B对Bacp/Nlp的磷酸化调控及其参与胞质分裂的机制研究[D];北京协和医学院;2009年
5 曲中原;青龙衣抗肿瘤活性成分及其作用机制研究[D];北京中医药大学;2010年
6 段恒;补肾中药对卵细胞体外成熟的影响[D];成都中医药大学;2010年
7 曹长姝;中药臭灵丹中HTMF体外抗肿瘤机制研究[D];暨南大学;2011年
8 方茅;DJ-1对人脑胶质瘤去分化与迁移侵袭的调控[D];暨南大学;2011年
9 李明;槟榔碱对上皮细胞周期、凋亡、恶性转化影响的初步研究[D];中南大学;2010年
10 尹建华;清胰化积方对人胰腺癌肝转移的实验研究[D];复旦大学;2010年
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1 李强;口腔癌中癌相关成纤维细胞体外生物学行为研究[D];南京医科大学;2009年
2 冯安宁;贲门癌中SIRT1、p300/CBP基因的表达及其临床病理学意义的研究[D];南京医科大学;2010年
3 陈建华;Runx3,Smad4及Ki-67蛋白在皮肤恶性黑色素瘤中的表达和意义[D];郑州大学;2010年
4 范造锋;c-Met及OPN在宫颈鳞癌组织中的表达及意义[D];郑州大学;2010年
5 朱莹;成纤维细胞激活蛋白,整合素β1在皮肤鳞状细胞癌中的表达[D];郑州大学;2010年
6 张小杰;抑瘤宁对荷人结肠癌HCT-8裸鼠的抑癌作用及对血管内皮生长因子及微血管密度的作用[D];郑州大学;2010年
7 张浩亮;FAP和TGFβ1在肺腺癌中的表达及临床意义[D];郑州大学;2010年
8 李静;Beclin1、Caspase3在宫颈鳞癌患者新辅助化疗前后癌组织中的表达及其意义[D];郑州大学;2010年
9 李锡清;鼻咽癌新生脉管及其临床病理意义[D];桂林医学院;2010年
10 裴蓓;乳腺癌各分子亚型的临床病理特点及预后因素分析[D];广西医科大学;2011年
【二级参考文献】
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1 朱丽琴,刁路明,陈德基,李红钢,刘绚,邹祖玉,李蓓芸,王敏,刘铭球;非小细胞肺癌中hMSH_2、FHIT基因表达的相关性及意义[J];癌症;2003年06期
2 仲任,黄瑞滨,宋善俊;组织因子途径抑制物2对卵巢癌细胞迁徙和浸润能力的影响[J];癌症;2003年10期
3 杨玲,李连弟,陈育德,Donald Maxwell Parkin;中国肺癌死亡趋势分析及发病、死亡的估计与预测[J];中国肺癌杂志;2005年04期
4 孙世荃,乔友林,姚树祥,张景源,尤占云,刘韵源,张辅铭,王燮华;云锡矿工肺癌的氡病因学研究[J];辐射防护;2001年05期
5 张辅铭,姚树祥,杨效欧,杨兰,王建波,吴燕芳;云南锡业公司职工肺癌流行病学研究[J];工业卫生与职业病;1985年06期
6 臧静,李桂圆,陈龙邦,王靖华,褚晓源,张群,耿怀成;血清MMP-2、MMP-9水平与非小细胞肺癌转移关系的研究[J];医学研究生学报;2003年03期
7 陈志伟,吴苏稼;骨肉瘤组织中HER2、P-糖蛋白的表达与预后的关系[J];医学研究生学报;2005年05期
8 张华,高福云,赵天德,魏育林,郭崇洁;人肝癌细胞与成纤维细胞共育时细胞增殖率的动态变化[J];解剖科学进展;1998年02期
9 阮永华,金克炜,高倩,华海蓉,周莉,梁锐;个旧矿工肺癌与其他地区非矿工肺癌中SP-B表达的比较研究[J];昆明医学院学报;2004年04期
10 费春艳;肺的纤维化与肺泡Ⅱ型上皮细胞[J];日本医学介绍;1999年12期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 贾赤宇;α-平滑肌肌动融合蛋白抑制成纤维细胞收缩的实验研究[J];中华烧伤杂志;2004年05期
2 宋玉娥;刘克俭;;染氟成纤维细胞在氟性骨损伤骨周化骨中作用的研究前景[J];职业与健康;2009年22期
3 黄英,张宗玉,童坦君;人衰老成纤维细胞凋亡的可诱导性[J];中华老年医学杂志;2000年03期
4 黄勤,张家庆,邹大进;人眼球后和其它部位成纤维细胞的差异[J];基础医学与临床;2001年01期
5 邓廉夫,冯伟,张玥,朱雅萍;肿瘤坏死因子-α和骨形态发生蛋白-2诱导成纤维细胞表达成骨表型的协同作用机制[J];国外医学(骨科学分册);2001年02期
6 韦颖,樊均明,潘丽萍,欧阳小森;碱性成纤维细胞因子对人肾成纤维细胞的影响[J];中华肾脏病杂志;2002年02期
7 魏子峰;碱性成纤维细胞生长因子在脑内的分布和作用[J];华北煤炭医学院学报;2002年03期
8 宋秀祖,夏济平,毕志刚;紫外线诱导成纤维细胞凋亡及防护机制的初步探讨[J];中华皮肤科杂志;2003年10期
9 刘强,柴家科;成纤维细胞与皮肤替代物的研究与应用[J];中华烧伤杂志;2004年04期
10 余艳;王玮蓁;;成纤维细胞与瘢痕的研究进展[J];湖北中医杂志;2006年02期
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1 李继坤;薛小平;杨秀竹;李东华;张艳萍;郭世铎;;中药调控成纤维细胞活性的实验研究[A];第七届全国中西医结合普通外科临床及基础研究学术会议论文汇编[C];2001年
2 刘杰峰;赵超莉;龙忠恒;许幼文;谢挺;;抑瘢檫剂对成纤维细胞的生物学的作用[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
3 陈若泽;甘小敏;梁莹;唐德思;莫肖敏;;成纤维细胞形态学变化的电镜观察[A];第五次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1988年
4 杨庆;王兴桂;李程;刘峰;陈波;;基本机械力学刺激对腧穴筋膜成纤维细胞力感受器分子整合素α1、α3亚基表达影响研究[A];中国针灸学会经络分会第十二届全国针灸经络学术研讨会论文集[C];2012年
5 刘定志;肖衡;杜成友;罗诗樵;;肿瘤上清液激活成纤维细胞后对血管内皮生长因子-A表达影响[A];2012中国器官移植大会论文汇编[C];2012年
6 辛国华;罗旭;张友来;万子杨;曾元临;;改良五黄油对成纤维细胞生长增殖的影响[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 李金玺;刘旭盛;唐辉;周新;黄跃生;;部分创面外用抗菌药物与碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、重组人生长激素对成纤维细胞生物学特性影响的实验研究[A];第五届全国烧伤救治专题研讨会烧伤后脏器损害的临床救治论文汇编[C];2007年
8 王春霞;曾煦欣;霍启录;侯连兵;;常通口服液对正常及粘连腹膜成纤维细胞周期的影响[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
9 王春霞;曾煦欣;霍启录;侯连兵;;常通口服液对正常及粘连腹膜成纤维细胞周期的影响[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
10 梁洋;杨莹;毛巍巍;安铁洙;;4℃下保存的小鼠胎儿成纤维细胞传代培养[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年
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1 本报记者 孟刚;帮你认识高机能水[N];中国消费者报;2009年
2 记者 刘海英;英发现成纤维细胞具有不同类型[N];科技日报;2013年
3 刘霞;美成功将成纤维细胞直接变为心肌细胞[N];科技日报;2010年
4 胡其峰;世界首例胎兔体细胞克隆实验获成功[N];光明日报;2007年
5 邹争春 朱广平;新型组织修复基因具有双重作用[N];中国医药报;2011年
6 暨南大学医药生物技术研究开发中心 李校堃 姚成灿;bFGF肌肤“装修”揭秘[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 屈纪富;合并全身放射损伤创伤局部成纤维细胞变化的机制与意义的研究[D];第三军医大学;2001年
2 孟国林;成纤维细胞成骨能力的系列研究[D];第四军医大学;2000年
3 黄迪;肾衰保肾胶囊对小鼠肾成纤维细胞影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2006年
4 陈波;模拟毫针机械刺激诱导成纤维细胞压力信号生物转化作用与针刺效应的研究[D];成都中医药大学;2005年
5 边莉;云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化、成纤维细胞活化过程中的相互作用及其机制[D];昆明医学院;2008年
6 熊丽霞;IL-13对成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其分子调控机制[D];南昌大学;2007年
7 方厂云;成纤维细胞胶原吞噬亚群功能分子标志物(uPARAP)的实验研究[D];中南大学;2008年
8 徐志彬;间质成纤维细胞在食管癌变进程中作用及机制的研究[D];河北医科大学;2014年
9 井玲;氟化物刺激成纤维细胞成骨表型表达及其在氟骨症骨周化骨发生机制中的作用[D];吉林大学;2006年
10 王会;铅、镉诱导东北虎成纤维细胞凋亡及其机制的研究[D];东北林业大学;2013年
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1 张春蕾;白细胞介素1β诱导衰老成纤维细胞促进角膜新生血管形成的实验研究[D];济南大学;2013年
2 李新路;成纤维细胞与明胶海绵支架三维共培养的实验研究[D];遵义医学院;2011年
3 张明月;叶黄素对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖及凋亡的影响[D];华中科技大学;2012年
4 韦艺;CsA和TNF-α对体外培养GFs增殖和胶原代谢的影响[D];中南大学;2008年
5 王代红;肥大细胞类胰蛋白酶对人肾成纤维细胞影响的实验研究[D];第三军医大学;2004年
6 陈晖娟;胶原模拟多肽及其对成纤维细胞粘附作用的研究[D];北京协和医学院;2012年
7 曹曼林;2450MHz微波辐射对原代培养的小鼠成纤维细胞增殖活性的影响及其分子机制研究[D];第二军医大学;2008年
8 郑秀丽;贲门腺上皮不同癌变阶段间质成纤维细胞的初步研究[D];河北医科大学;2013年
9 陈平忍;17-β雌二醇对体外培养的盆底功能障碍性疾病患者阴道壁成纤维细胞应力前后的影响[D];河北医科大学;2011年
10 李举;游离二氧化硅粉尘对大鼠循环成纤维细胞作用的体外实验[D];郑州大学;2011年
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