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《昆明医学院》 2008年 硕士论文
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人胶质瘤细胞株U-251体外诱导肿瘤干细胞及其基因表达差异分析研究

肖宗宇  
【摘要】: 目的:观察U-251人胶质瘤干细胞在体外的生长特征;分析U-251胶质瘤细胞与胶质瘤干细胞之间的相关基因表达差异,为胶质瘤干细胞的进一步研究提供基因信息。 方法: 1.U-251胶质瘤细胞株中脑肿瘤干细胞的分离培养和鉴定:选择U-251人胶质瘤细胞株,分别应用含血清培养基(DMEM/F12+10%FBS)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF和EGF)培养。通过无血清悬浮培养方法,从人胶质瘤细胞株U-251中分离培养脑肿瘤干细胞,观察其增殖、分化,用免疫荧光法鉴定其特异性标志物CD133和Nestin。 2.将从U-251胶质瘤干细胞中抽取的mRNA作为实验组,将U-251胶质瘤细胞的mRNA作为对照组,将所抽取的mRNA制成cRNA探针。采用美国Superarray公司提供的含263个基因的人神经生长及神经干细胞基因芯片(OHS-404),对U-251人胶质瘤细胞及其肿瘤干细胞进行基因芯片杂交,进行基因表达差异分析检测。 结果:从人脑胶质瘤细胞株U-251中成功培养分离出了人脑胶质瘤干细胞,在无血清培养状态下呈悬浮生长,形成脑肿瘤球,经免疫荧光鉴定这些肿瘤球细胞呈CD133和Nestin阳性。运用基因芯片技术分析,我们发现U-251脑肿瘤干细胞与U-251胶质瘤细胞之间存在大量差异表达基因,表达差异在2倍以上者有70条基因,其中U-251胶质瘤干细胞较U-251胶质瘤细胞有53条基因表达上调,17条表达下调。经生物信息数据库分析,我们初步筛选出GDF-11和FABP-7这两条可能与U-251胶质瘤干细胞的增殖、分化密切相关的基因。 结论:通过无血清培养法可使U-251人脑胶质瘤细胞株中的脑肿瘤干细胞得以扩增,U-251人脑胶质瘤细胞株中含有一部分具无限增殖、自我更新及多分化潜能的脑肿瘤干细胞。大量差异基因存在于U-251胶质瘤细胞及其肿瘤干细胞之间,通过人神经生长及神经干细胞基因芯片(OHS-404)检测和生物信息数据库分析,我们筛查出GDF-11和FABP-7两条可能与U-251胶质瘤干细胞的增殖、分化密切相关的基因,这为胶质瘤干细胞的进一步研究提供了基因信息。


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