体外诱导脂肪干细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究

蒋威

【摘要】： 目的: 脂肪干细胞是否可以在特定的诱导环境下分化形成血管平滑肌细胞,为构建组织工程化血管的血管平滑肌细胞寻找新的种子细胞来源。方法: 应用酶消化法消化人脂肪组织获取原代脂肪干细胞,待原代细胞生长至融合后,采用免疫磁珠法分选CD34+的细胞以取得较高纯化的脂肪干细胞,分选的细胞生长24小时后采用酶消化法收获细胞用于实验。实验分实验组和对照组两组,对照组培养液为5%M199培养液,实验组培养液为5%M199培养液内添加生长因子PDGF-BB(50ng/ml)、TGF-β1(2.5ng/ml),诱导14天,每日观察诱导组细胞形态学的变化;14天后分别采用免疫荧光、RT-PCR的方法检测血管平滑肌细胞特异性标记α-SMA、Calponin、SM22α、SM-MHC的表达情况;流式细胞术检测实验组细胞在诱导14天前后α-SMA、Calponin、SM-MHC的阳性表达率。结果: 脂肪干细胞在特定的诱导环境下诱导14天后,细胞生长呈现血管平滑肌细胞所特有的峰-谷样生长;免疫荧光、RT-PCR检测细胞:α-SMA、Calponin、SM22α、SM-MHC呈阳性表达;实验组细胞诱导14天后,α-SMA、Calponin、SM-MHC的阳性表达率为50.58±2.71%,42.94±2.76%,49.31±0.67%,诱导前为5.11±0.44%,5.73±0.54%,8.42±0.47%;诱导后较诱导前阳性表达率明显增加,有非常显著性差异(P＜0.01)。结论: 脂肪干细胞在体外特定的诱导环境中培养一段时间后,呈现明显的血管平滑肌细胞的特性,有可能成为构建组织工程化血管新的种子细胞来源。

【关键词】：组织工程化血管 脂肪干细胞 血管平滑肌细胞 血小板衍生生长因子 转化生长因子β1
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R329
【目录】：

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