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《昆明医学院》 2010年
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C6胶质瘤细胞对神经干细胞迁移和向胶质细胞分化的初步研究

曹雨  
【摘要】: 目的 探讨在脑胶质瘤模型中,外源性神经干细胞的迁移与分化,进一步为应用神经干细胞作为载体治疗脑胶质瘤提供理论依据。 方法 1.体外分离培养绿色荧光蛋白(GFP)神经干细胞和C6胶质瘤细胞。 2.应用立体定向方法建立24只大鼠C6胶质瘤模型,随机分为实验组与对照组,(n=12)。实验组,将C6胶质瘤细胞植入于SD大鼠的额叶皮层下区:对照组则为额叶皮层下区注入细胞培养液。磁共振成像、免疫荧光组织化学判定大鼠载瘤模型的建立是否成功。 3.在实验组和对照组SD大鼠的侧脑室室下区(SVZ)移植GFP神经干细胞。倒置荧光显微镜、流式细胞学观察和分析外源性神经干细胞在体内的存活、迁移和分化。 结果 1.分离培养的GFP神经干细胞呈神经球样生长,原代细胞生长3d~4d后传代为宜。第三次传代后4d时可获得大量nestin抗体表达阳性细胞。 2.取脑行MRI扫描和免疫组织化学检测,可证实C6胶质瘤细胞在大鼠脑内形成实体瘤,模型建立成功。 3.荧光显微镜下观察实验组肿瘤组织内部和周边区域可见GFP神经干细胞分布。 4.利用流式细胞学检测结果示:实验组大鼠颅内细胞移植区和肿瘤区均可检测到GFP(+)细胞,对照组大鼠颅内细胞移植区可检测到GFP(+)细胞,而假手术区只见偶个GFP(+)细胞;实验组大鼠肿瘤区细胞GFAP(+)/GFP(+)双阳性率高于移植区(P<0.05);随着时间的延长,实验组大鼠移植区和肿瘤区细胞GFAP(+)/GFP(+)双阳性率均升高,但肿瘤组升高更为明显(P<0.05)。 结论 1.分离培养的GFP细胞具有自我更新增殖的能力,流式细胞学鉴定GFP细胞nestin抗体表达阳性,为中枢神经系统干细胞。 2.立体定向法是建立大鼠脑胶质瘤模型的有效方法,此模型肿瘤的生长具有一定规律,其生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似,可作为脑胶质瘤的基础和临床研究的理想模型。 3.在脑胶质瘤模型中,移植的神经干细胞具有向肿瘤迁移的趋向。 4.流式细胞学结果说明,相对于干细胞移植区域,迁移到肿瘤周边的神经干细胞明显趋向于向神经胶质细胞分化(P<0.05),且在7d-14d范围内,随着时间的进展,向胶质细胞分化的能力加强(P<0.05)。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R739.41

【参考文献】
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