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《昆明医学院》 2010年
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17-β雌二醇在同型半胱氨酸诱导成骨细胞氧化损伤的保护作用及其信号机制研究

陈学秋  
【摘要】: [目的]通过构建同型半胱氨酸(homocysteine,Hey)诱导的人成骨肉瘤MG63细胞氧化损伤模型,从细胞、分子和蛋白层面探讨17-β雌二醇(17(3-Estradiol,17β-E_2)对成骨细胞氧化损伤的保护作用及其信号机制。 [方法]体外培养的人成骨肉瘤MG63细胞随机分成空白对照组、Hcy处理组、17β-E_2处理组和磷脂酶C-γl(Phospholipase C-γl,PLC-γ1)特异性性抑制剂U73122 处理组,处理不同时间。采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸盐(2',7'-dichloro-fluorescin diacetate,H2DCFDA)探针在荧光分光光度计下检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;通过Hoechst33342/碘化丙啶(PI)核荧光双染用荧光显微镜观察计数凋亡和坏死细胞;Western Blotting检测磷脂酶C-γ1(Phospholipase C-γl,PLC-γ1),促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)家族的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38促分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38 MAPK)和c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK),以及促凋亡相关蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cysteine-aspartic acid protease 3,Caspase-3)和bcl-2相关X蛋白(bcl-2-associated x protein,Bax)等细胞信号通路蛋白的表达及其变化规律。 [结果]1μmol/L17β-E_2以剂量和时间依赖关系抑制1~5mmol/LHcy诱导人成骨肉瘤MG63细胞内ROS的增加。1μmol/L17β-E_2抑制3mmol/LHcy诱导人成骨肉瘤MG63细胞的凋亡和坏死。1μmol/L17β-E2可上调3mmol/L Hey诱导人成骨肉瘤MG63细胞PLC-γ1和ERK磷酸化,下调P38和JNK磷酸化,以及下调Caspase-3和Bax的表达。用7μmol/LU73122和lμmol/L17p-E2共同预处理人成骨肉瘤MG63细胞可下调PLC-γ1和ERK磷酸化,上调p38磷酸化、Caspase-3和Bax表达,JNK磷酸化则无明显变化。 [结论]1、高浓度Hcy可通过增加细胞内ROS的含量诱导人成骨肉瘤MG63细胞死亡;17β-E_2具有明显的保护作用,抑制Hcy诱导MG63细胞死亡。2、高浓度Hcy通过调控ERK磷酸化、p38MAPK和JNK磷酸化,凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达诱导MG63细胞的死亡。17β-E_2依赖PLC-γ1信号抑制高浓度Hcy诱导上述信号通路相关蛋白的变化,从而发挥其保护作用。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R738.1

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