收藏本站
《昆明医学院》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

骨髓间充质干细胞创面治疗的初步研究

王海兵  
【摘要】: 第一部分猪烧伤模型的建立 目的:通过动物实验,探索一种简单易行猪烧伤创面动物模型的制作方法,摸索对猪皮肤的烧伤深度、烧伤面积的控制方法,为课题的实施奠定基础,为制作猪烧伤模型提供一种新的途径和方法。 方法:3-4月龄猪2头,将其自身背部两侧对应的烧伤创面分为组织学检验组及大体观察组。猪麻醉后用电动剃毛刀将其背部皮肤毛发剃除,以俯卧位固定于手术台上,将事先准备好开窗3cm×3cm的石棉置于猪背部皮肤剃毛处,外覆有同样大小开口的铁皮,助手压紧铁皮,汽油喷灯口在距创面10cm处垂直喷烧。第一头猪按喷烧持续时间分为2秒、4秒、6秒、8秒、10秒、12秒、14秒七个创面组,每组各4个创面。烧伤后30min后观察创面皮肤变化,并于烧伤后12小时将每组的4个创面取材行组织学检查。根据第一头猪组织学检查结果,确定出浅Ⅱ度、深Ⅱ度、Ⅲ度烧伤各烧伤深度所需烧伤持续时间,第二头猪按喷烧持续时间分为2秒、6秒、14秒三个创面组,每组各4个创面,再次验证各度烧伤持续时间。烧伤后30min后观察创面皮肤改变,隔日创面换药观察创面愈合情况,并分别于1周、2周、3周、4周观察记录大体观察组创面愈合情况,烧伤后12小时将对应两侧组织学检查组的烧伤创面行交叉取材、每组各2个创面行组织学检查。 结果:烧伤后30min大体观察创面见:2秒时表皮存在、干燥、皮肤呈紫色略带白色,创面在2周内愈合;6秒时表皮存在,碳化、呈焦黄色,创面在3周内愈合;14秒时部分表皮碳化脱失,基底呈蜡白色,4周时创面仍有坏死痂皮覆盖。烧伤后12小时后病理结果示:2秒时表皮大部分细胞胞核变长,层次紊乱,生发层细胞胞核大部分排列整齐.可见表皮内液体积聚及表皮外渗出物;6秒时基底细胞胞核大部分变长,部分真皮浅层细胞胞核固缩,排列紊乱,基底层与真皮浅层间液体聚集;14秒时表皮部分脱落,真皮细胞胞核固缩,层次紊乱,皮肤附属器坏死,脂肪细胞胞核正常。而4秒时创面大体观察及病理结果接近于2秒时创面;8秒、10秒、12秒时创面大体观察及病理结果接近于6秒时创面。2秒为浅Ⅱ度;6秒-14秒为深Ⅱ度;14秒及以上为Ⅲ度。 结论:使用汽油喷灯制作猪烧伤模型方法操作简单、结果可靠、经济实惠,是一设备简单,操作便捷、安全的猪烧伤模型制作方法。 第二部分骨髓间充质干细胞创面治疗的初步研究 目的:通过动物实验,探索骨髓间充质干细胞(B-MSCs)用于烧伤创面治疗的可行性、安全性和有效性问题。摸索出使用方法、细胞数量、监测手段,为临床应用提供理论依据和实践经验,进而为临床治疗大面积Ⅲ度烧伤所致的皮肤缺损提供新的途径和方法。 方法:雄性滇南小耳猪1头,将其自身背部对应部位创面分为实验组和对照组,各两组,每组共分A.微粒皮、B.小皮片、C.大张皮、D.异体脱细胞猪皮四个创面,创面切至深筋膜浅层,面积5cm×5cm。取雌性滇南小耳猪骨髓间充质干细胞5ml放入10%α-MEM培养基,10%胎牛血清和1%双抗(青霉素和链霉素)的无菌培养瓶中,放入95%饱和湿度,37摄氏度的CO2培养箱培养至第三代,镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测干细胞标记物CD29-抗、CD44-抗、CD45-抗及电镜检测超微结构。实验组各创面滴加骨髓间充质干细胞密度为2×106./ml,0.5ml,对照组各创面滴加等量的生理盐水。移植后创面隔日换药,并记录各组创面愈合时间及创面大体变化、于植皮后第30天后取材行HE染色组织学检查观察表皮厚度及分层及DNA比对检测。 结果:就本次实验而言(1).流式细胞仪检测发现我们培养的间充质干细胞不表达造血细胞系特有的CD45,而表达基质细胞和间质细胞特有的CD44、CD29。电镜结果显示细胞核呈椭圆形,胞质丰富,有大量微丝,单细胞核,较大,常染色体较少,异染色体较多。细胞器丰富,有微绒毛结构,核浆比较大,说明细胞蛋白合成和分泌能力旺盛,能够大量摄取营养物质,功能活跃,显示了干细胞的幼稚特性。(2)HE染色结果实验组表皮较对照组明显增厚,分层明显。(3)创面愈合时间在实验组和对照组间无明显差别,实验组创面在愈合过程中基底肉芽明显较对照组新鲜,愈合后实验组创面较对照组创面更接近于正常肤色。(4)DNA比对结果受体猪移植干细胞处皮肤未见供体猪DNA成份。 结论:(1)骨髓间充质干细胞可能通过对局部创面刺激,分泌刺激生长因子,催进局部血管化,进而改善创面基底环境,使皮片更易于成活,因而对创面修复过程可能有一定的促进作用。(2)骨髓间充质干细胞在创面修复过程中对皮肤结构调整,疤痕形成大小及厚度可能有一定影响。(3)完全依靠移植骨髓间充质干细胞于创面使其直接转化成表皮细胞进而修复创面,还难以实现。
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R641

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王忠;高毅;汪艳;潘明新;;人骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定[J];中华神经医学杂志;2006年10期
2 都义日,付小兵,李存保,孙同柱,方利君;表皮细胞生长因子在体诱导猪骨髓间充质干细胞向皮肤组织分化作用的研究[J];创伤外科杂志;2005年02期
3 樊建玲;黄河;;骨髓间充质干细胞的免疫学特性及其在造血干细胞移植中的应用[J];国际输血及血液学杂志;2006年01期
4 姚庆君,胡大海,陈璧,徐明达,董茂龙,贾赤宇,王树森;一种大鼠烫伤后皮肤移植模型的建立[J];华南国防医学杂志;2005年02期
5 张超纪,任华,杜振宗,马国涛,刘洪生;成人骨髓间充质干细胞定向诱导为血管内皮样细胞[J];基础医学与临床;2005年10期
6 王海彬;刘焕奇;王洪斌;刘云;高利;;安定和氯胺酮对猪复合麻醉的研究[J];现代畜牧兽医;2007年04期
7 耿献辉;余春艳;邓志宏;张勇杰;陆伟;温宁;薛洁;张锐红;康晓军;金岩;;骨髓间充质干细胞复合组织工程化脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤[J];中国美容医学;2007年04期
8 张奇,白晓东,杨洋,李凌云,宋燚,王均强,付小兵;法舒地尔对人骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的影响[J];武警医学;2005年09期
9 孙同柱,付小兵,李海红,吴志谷,方利君,陈伟,屈振亮;小型猪小面积深Ⅱ度烫伤面积与损伤程度一致的模型制备观察[J];中国临床康复;2004年29期
10 褚锋;刘建国;唐帆;褚建新;;小鼠Ⅲ度烧伤模型的复制及皮肤病理形态改变的动态观察[J];中国实验动物学报;2009年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王进江;张剑;庞天津;周文中;毕可东;;猪回肠末端瘘管手术试验[J];现代农业科技;2009年01期
2 李景辉;张方明;张振庭;;人恒牙牙髓干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究[J];北京口腔医学;2011年03期
3 梁文杰;谢肇;吴雪晖;许建中;罗飞;何清义;代飞;;同种异体组织工程骨猪皮下植入后IL-2及TNF-α的表达[J];重庆医学;2007年09期
4 胡帅;王嫣;陈小菊;周兰;陈文直;;在海藻酸钠凝胶上诱导骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的研究[J];重庆医学;2010年16期
5 付小兵;软组织创伤修复与再生研究的发展方向[J];创伤外科杂志;2004年03期
6 都义日,付小兵,李存保,孙同柱,方利君;表皮细胞生长因子在体诱导猪骨髓间充质干细胞向皮肤组织分化作用的研究[J];创伤外科杂志;2005年02期
7 李海红,付小兵,周岗,白晓东,陈伟,朱国俊,蔡存良,孙同柱;人骨髓间充质干细胞体外分离培养、鉴定及标记[J];创伤外科杂志;2005年04期
8 谢江;李廷玉;曾丽玲;钟耀华;郭川;向德兵;陈小章;;骨髓间充质干细胞促进大鼠皮肤创面愈合的作用及机制研究[J];第三军医大学学报;2006年23期
9 陈涛;付小兵;伍津津;韩冰;孙同柱;;bFGF与MSCs自体移植对猪皮肤创面PCNA和Ⅷ-R Ag表达的影响[J];第三军医大学学报;2007年02期
10 常红星;杨柳;李忠;陈光兴;刘军;文亚名;戴刚;;人关节软骨来源CD105~+/CD166~+间充质干细胞的分选及其多向分化特性的鉴定[J];第三军医大学学报;2009年21期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 钟志勇;周薇;谢超敏;赵士海;刘盛来;邝少松;;比较烫伤和烧伤致小型猪皮肤深二度损伤的异同[A];第九届中国实验动物科学年会(2010新疆)论文集[C];2010年
2 袁进;顾为望;;小型猪作为人类疾病动物模型在生物医学研究中的应用前景[A];第九届中国实验动物科学年会(2010新疆)论文集[C];2010年
3 刘德伍;李国辉;邹萍;刘德明;;骨髓间充质干细胞复合胶原凝胶构建活性皮肤替代物修复皮肤缺损[A];中国康复医学会修复重建外科专业委员会第十四次全国学术交流会论文集[C];2004年
4 葛胜洁;沈飞霞;吴文俊;陈雷;汪大望;;自体外周血干细胞移植治疗顽固性糖尿病足[A];浙江省中西医结合学会糖尿病专业委员会第一次学术会议材料汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张铭杰;成人MSCs体外定向成骨分化及激素性股骨头坏死MSCs活性研究[D];广州中医药大学;2011年
2 王锋;重症急性胰腺炎肺毛细血管渗漏机制及同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗效果评价的实验研究[D];福建医科大学;2011年
3 李勇;骨髓间充质干细胞优化移植治疗缺血性疾病的基础研究[D];南京医科大学;2011年
4 李海芳;β-肾上腺素受体在小鼠MSCs成骨、成脂分化中的作用[D];清华大学;2010年
5 王皓;丙烯酰胺对雄性动物生殖及成体干细胞的毒理学研究[D];南京农业大学;2010年
6 胡克苏;人脐带间充质干细胞移植对大鼠烧伤治疗作用及其机制[D];苏州大学;2011年
7 李洪伟;硅酸二钙涂层离子溶液促进人骨髓间充质干细胞成骨分化及其机制的实验研究[D];苏州大学;2011年
8 赵自平;小鼠卵黄囊间质干细胞多向分化潜能及其体外复合胶原表面改性CPC的实验研究[D];中南大学;2003年
9 方利君;骨髓间充质干细胞转化为皮肤组织的实验研究[D];中国医科大学;2004年
10 王启伟;恒河猴骨髓间充质干细胞的定向分化及其机制[D];第一军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 党智杰;脐带间充质干细胞治疗急性肾小管坏死的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 石云;TGF-β1表达载体的构建及其在小鼠骨髓间充质干细胞的表达研究[D];山西医科大学;2011年
3 徐义虎;骨髓间充质干细胞促进皮肤创面上皮化的实验研究[D];昆明医学院;2011年
4 李世元;猪骨髓间充质干细胞治疗猪全层皮损的促血管化研究[D];昆明医学院;2011年
5 杨敬辉;羟乙基淀粉经骨髓通路复苏失血性休克兔的效果观察[D];南京大学;2011年
6 赖建明;胶原—壳聚糖/胶原—纳米羟基磷灰石仿生支架复合BMSCs体外构建组织工程骨软骨的前期实验研究[D];福建医科大学;2011年
7 张林林;骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗急性放射性皮肤损伤的实验研究[D];福建医科大学;2011年
8 田少囡;北京油鸡肺脏间充质干细胞的分离、培养与诱导分化研究[D];中国农业科学院;2011年
9 张同方;Galectin-3促进骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞增殖和血管生成的研究[D];安徽医科大学;2011年
10 王之学;腹腔复苏治疗未控制创伤失血性休克大鼠的实验研究[D];石河子大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 艾国平,粟永萍,闫国和,冉新泽,刘晓宏,罗成基,程天民;骨髓间充质干细胞的分离与培养[J];第三军医大学学报;2001年05期
2 陈文明;血管内皮生长因子的生物学及其在临床的初步应用[J];基础医学与临床;2003年05期
3 王一镗;美国急诊医师学会1999年学术年会简介[J];中华急诊医学杂志;2000年01期
4 付小兵,程飚,盛志勇;创面愈合与瘢痕形成的分子学研究[J];中国临床康复;2002年04期
5 艾国平,粟永萍,闫国和,王蒙,刘晓宏,罗成基,程天民;诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞和成软骨细胞分化[J];中国临床康复;2002年18期
6 吴志谷,耿淼,付小兵,孙同柱;小面积标准烫伤仪的实验应用[J];中国临床康复;2002年20期
7 孙同柱,付小兵,陈伟,孙晓庆,杨银辉,赵志力,盛志勇;防疤烧伤膏与京万红促进烫伤创面愈合作用的比较研究[J];中国临床康复;2002年20期
8 冯正权,吴宝明;骨髓输液技术的发展及应用[J];医疗卫生装备;2003年02期
9 方利君,付小兵,孙同柱,李建福,程飚,杨银辉,王玉新,王通;在体诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮细胞的初步观察[J];中华创伤杂志;2003年04期
10 苏波,孙家玲,王文正,葛绳德;自体表皮细胞培养与异体真皮组合应用研究[J];中华创伤杂志;1995年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张志民,黄崇本,石崇荣,吴纯洁,张代录,唐时森;蔗糖促进烧伤残余创面的愈合[J];重庆医科大学学报;1987年04期
2 金莲姬,徐春华;先锋霉素与糜蛋白在感染创面换药中的应用[J];黑龙江医药科学;2001年03期
3 岑斌,黄胜英,赵小红,刘亚荣,张益寿;788例烧伤患者的临床治疗体会[J];现代中西医结合杂志;2004年14期
4 江滨;局部皮瓣治疗小片状深度烧伤创面[J];现代诊断与治疗;2000年S1期
5 王波涛,李新华,陈璧,董茂龙,贾赤宇,朱雄翔,胡大海,徐明达;烧伤后假上皮瘤肉芽肿样病变内毒素测量及其致病机制[J];第四军医大学学报;2003年14期
6 荣新洲,吴永恒,任加良;大面积烧伤早期创面应用利福平致肝功能严重损害2例报告[J];第一军医大学学报;1999年04期
7 王强,刘拱喜,韩兴海,胡福兴;6例染液烫伤患者的临床特点[J];实用医药杂志;2002年03期
8 于勇,付小兵,孙同柱,赵志力;糖尿病大鼠背部创面愈合过程中细菌量变化的动态观察[J];中国危重病急救医学;2002年06期
9 张健明;血栓闭塞性脉管炎创面辨证施治235例分析[J];中医药学刊;2003年10期
10 彭湃,鲁开化,艾玉峰,郭树忠;透明质酸刺激因子局部外用对兔耳缺血创面愈合的影响[J];第四军医大学学报;1999年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 龙笑;白明;赵茹;乔群;王晓军;宋可新;俞楠泽;王阳;;臀部创面手术治疗策略[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
2 叶祥柏;夏来启;陈忠勇;王锡华;沈运彪;李金玺;高彩虹;;严重烧创伤创面的修复探讨[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
3 夏来启;叶祥柏;王锡华;沈运彪;陈忠勇;李金玺;;头皮巨大肿物切除后的创面修复[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
4 叶祥柏;夏来启;陈忠勇;王锡华;沈运彪;李金玺;高彩虹;;严重烧创伤创面的修复探讨[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
5 夏淑琴;;阴部烧伤的健康教育[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
6 解伟光;;爱可欣抗菌凝胶在烧伤和褥疮创面的应用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 姜会庆;洪志坚;解伟光;汪军;胡心宝;周济宏;袁斯明;;复杂难治性创面的修复[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
8 姜会庆;洪志坚;解伟光;汪军;胡心宝;周济宏;袁斯明;;复杂难治性创面的修复[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
9 江华;朱晓海;赵耀忠;张盈帆;章建林;孙美庆;刘安堂;张文俊;陈刚;林子豪;;大面积皮肤软组织缺损伴严重感染创面的修复[A];第七届中国医师协会美容与整形医师大会论文集[C];2010年
10 ;银离子敷料在烫伤创面的应用效果及对肝肾功能的影响[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王小龙;可直接用于创面的皮肤“打印机”问世[N];科技日报;2010年
2 第二军医大学长征医院整形外科 朱晓海张文俊 王根华整理;头部取皮瓣 为创面“穿新衣”[N];健康报;2010年
3 广东省开平市中心医院 方万强 方子文 阮玲玲;皮肤原位再生医疗技术和美宝疮疡贴 治疗电击伤创面的临床体会[N];健康报;2011年
4 河南省许昌市烧伤医院 陈全喜;对烟花爆竹烧伤的急救与治疗[N];健康报;2011年
5 本报记者 吴红月;无限风光在征程[N];科技日报;2011年
6 山东省青州市中医院外科 徐钊;治疗各类皮肤损伤的临床观察[N];健康报;2011年
7 欧飒;400多年前,医生就会给鼻子整形[N];新华每日电讯;2010年
8 四川省西昌市力平医院 陈书恒 冯映东 刘光洪;皮肤原位再生医疗技术和美宝湿润烧伤膏 治疗各类烧伤的疗效分析[N];健康报;2011年
9 北京积水潭医院烧伤科主任 张国安;高楼起火如何在逃生中避免烧伤?[N];北京日报;2010年
10 记者 陈青;为患者找回“丢失”的皮肤[N];文汇报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨帆;物理负压促进创面愈合机制的研究[D];华中科技大学;2010年
2 赵琳;木醋杆菌纤维素敷料的实验研究[D];第二军医大学;2010年
3 李力;生物电场促进皮肤创面修复的细胞机制[D];第三军医大学;2012年
4 夏平光;几丁糖预防手术后组织粘连的机理及其水凝胶促进大鼠皮肤创面愈合的实验研究[D];第二军医大学;2007年
5 陈朝晖;复方紫归膏在大鼠创口皮肤愈合中的作用及机理研究[D];成都中医药大学;2010年
6 胡克苏;人脐带间充质干细胞移植对大鼠烧伤治疗作用及其机制[D];苏州大学;2011年
7 李建福;汗腺发生的基础及诱导表皮干细胞直接分化为汗腺细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
8 何德才;复方芪竭膏对大鼠创伤模型愈合影响的实验研究[D];成都中医药大学;2011年
9 刘贤华;HA1077促进骨髓间充质干细胞修复皮肤创面的研究[D];第三军医大学;2009年
10 孙士锦;BMSCs在皮肤创伤修复中的作用[D];第三军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王海兵;骨髓间充质干细胞创面治疗的初步研究[D];昆明医学院;2010年
2 徐义虎;骨髓间充质干细胞促进皮肤创面上皮化的实验研究[D];昆明医学院;2011年
3 刘晓夏;生肌玉红明胶海绵改善创面微循环与促创愈合的实验与临床研究[D];南京中医药大学;2010年
4 高恒清;硝苦汤促进兔背部人粪污染创面愈合及其预防创面过度瘢痕化的实验研究[D];泸州医学院;2011年
5 王琦;骨髓间充质干细胞改善猪全层皮肤缺损创面修复质量的实验研究[D];昆明医科大学;2012年
6 马富廉;创面酸碱度对细菌生长及创面愈合作用的研究[D];郑州大学;2012年
7 史煜华;利多卡因及泊罗沙姆188防止深二度烫伤创面早期加深的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
8 刘恒平;应用苯扎氯铵与碘伏清创换药治疗感染创面的临床观察[D];山东中医药大学;2011年
9 罗仲流;伤科黄水对下肢创伤后感染创面的临床疗效观察[D];广州中医药大学;2012年
10 韩喜莉;血管紧张素Ⅱ对创伤愈合中成纤维细胞增殖的研究[D];山西医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026