收藏本站
《西北大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于电喷雾质谱(ESI-MS)的稳定同位素标记对糖类物质进行相对定量和定性分析方法的研究

薛向东  
【摘要】:蛋白质糖基化是真核细胞中最常见的翻译后修饰过程,对蛋白质生物学功能的正确发挥起着至关重要的作用。研究表明,许多疾病的发生都伴随着细胞内糖蛋白糖链结构和表达量的异常变化。可以通过检测某些糖链是否异常表达来作为细胞是否病变的标志。因此糖类物质可作为诊断某些疾病的生物标志物。 本研究通过同位素标记与现代生物质谱技术结合的研究方法,对多种不同来源的糖类样品进行了相对定量和定性分析,以研究糖链在不同样品中是否表达以及表达量的差异。 本研究采用两种方法对还原性糖链以及N-糖链进行了相对定量和定性的研究: 1.基于电喷雾质谱(ESI-MS)和苯胺稳定同位素标记对还原性糖链进行相对定量和定性方法的研究。建立了一种基于生物质谱的苯胺稳定同位素标记,对还原性糖链进行相对定量和定性的研究方法。先用d0苯胺标记乳糖标准品,优化了影响标记效率的各种反应条件。在弱酸环境下,糖链:苯胺:硼氢氰化钠摩尔比为1:1.2:10,70℃反应15 min即可标记完全;对4对d0/d5苯胺标记的麦芽糊精糖链在电喷雾质谱中的线性、动态范围以及重现性进行了考察。结果表明,在15倍动态范围内,此相对定量方法有着很好的线性关系R=0.9986和重现性CV=10.20%。为验证所建方法的可行性,将该相对定量方法应用于人奶游离糖(HMOs)和牛奶游离糖(BMOs)分析中,发现人奶中乳糖的含量明显多于牛奶,人奶中的游离糖比牛奶中的游离糖种类复杂。 2.基于电喷雾质谱和丙酮稳定同位素标记对N-糖链进行相对定量分析方法的研究。建立了一种基于电喷雾电离质谱的丙酮稳定同位素标记对N-糖链进行相对定量的研究方法。用非特异性的蛋白酶Pronase E代替传统的PNGase F酶解糖蛋白样品,使N-糖蛋白样品被酶解为带有一个氨基酸的糖氨酸(Glycans-Asn),这样就给糖链引入了一个氨基活性基团,然后用丙酮对氨基进行标记。用d0/d6丙酮对Ribo B标准品的PronaseE酶解产物M5-M8-Asn进行标记,考察了4对d0/d6丙酮标记的Glycans-Asn(M5-M8-Asn)在电喷雾电离质谱中的线性、动态范围以及重现性。结果表明,在10倍动态范围内,相对定量方法有良好的线性关系R0.995和重现性CV8.7%。并将建立的方法应用于不同含量鸡卵清白蛋白的N-糖链定量中,进一步验证了该方法的可行性。 综上所述,本研究是基于生物质谱和稳定同位素标记建立起的相对定量和定性方法。该方法成本低,操作简单,检测灵敏,可高通量的研究生物样品中微量糖链表达量的变化,为进一步研究糖类生物标志物奠定了基础。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:Q53

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 刘新;应万涛;周春喜;蔡耘;钱小红;;基于生物质谱的乙酸酐稳定同位素标记定量蛋白质组学方法的建立与优化[J];分析化学;2007年12期
2 徐莎;张萍;黄琳娟;王仲孚;;Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析[J];高等学校化学学报;2010年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周大炜;胡波;刘斌;吴俊丽;韩艳芳;;大肠杆菌O152中wfgD基因编码的β-1,3-葡萄糖基转移酶产物结构的质谱表征[J];分析化学;2010年02期
2 韩欢欢;马岩;王璐;张万军;卫军营;张养军;钱小红;;寡糖衍生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析方法研究[J];分析化学;2010年03期
3 周大炜;刘斌;吴俊丽;胡波;齐源远;;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法区分大肠杆菌糖基转移酶基因[J];分析化学;2011年01期
4 郭明全,宋凤瑞,陈貌连,白玉,刘志强,刘淑莹;刺五加寡糖的电喷雾多级串联质谱研究[J];高等学校化学学报;2003年09期
5 吴巍,宋凤瑞,刘志强,刘淑莹;利用HPLC-ESI-MS/MS区分黄芩中黄酮C-苷异构体的研究[J];高等学校化学学报;2005年01期
6 徐莎;张萍;黄琳娟;王仲孚;;Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析[J];高等学校化学学报;2010年10期
7 薛向东;张萍;王仲孚;黄琳娟;;基于电喷雾电离质谱(ESI-MS)的苯胺稳定同位素标记对还原性寡糖(链)的定性定量分析方法[J];高等学校化学学报;2010年11期
8 王培培;于广利;焦广玲;赵峡;李静;柴文刚;;基于MALDI-TOF质谱技术分析人宫颈癌HeLa细胞N-糖链结构轮廓[J];高等学校化学学报;2012年06期
9 ;Mass spectrometry analysis of melanoma related O-glycans in sera[J];Science China(Chemistry);2010年04期
10 白晨;吴刚;赵亮;;基于质谱技术研究黑色素瘤血清特异性O-糖链[J];中国科学:化学;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 郑杰;赵先恩;史俊友;索有瑞;;HPLC-DAD-MS~n快速分析黄酮类物质的研究进展[A];西北地区第六届色谱学术报告会甘肃省第十一届色谱年会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈娟娟;液质联用技术在药用植物活性物质分析研究中的应用[D];浙江大学;2009年
2 张萍;1,3取代吡唑啉酮类试剂的合成及其用于糖类物质的衍生化和分析研究[D];西北大学;2011年
3 赵云鹏;N-糖组在消化系统恶性肿瘤中的研究[D];第二军医大学;2011年
4 陈艳;蒲葵子活性成分及质量控制研究[D];福建医科大学;2011年
5 陈瑶函;基于生物质谱的糖蛋白组学新技术新方法研究[D];复旦大学;2011年
6 韩培培;剪切力作用下红豆杉细胞机械信号转导和代谢适应机制研究[D];天津大学;2011年
7 解春艳;茶薪菇发酵制备麦麸膳食纤维与阿魏酰低聚糖及其生物活性研究[D];南京农业大学;2010年
8 司端运;藤黄灰链霉菌发酵液中次生代谢产物的研究[D];沈阳药科大学;2001年
9 周慧;电喷雾质谱及其联用技术在药物分析中的应用[D];浙江大学;2005年
10 刘悦;大理白前化学成分及其生物活性研究大理白前中甾体苷类化学成分ESI-MS裂解行为研究[D];中国协和医科大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王博;枸杞糖复合物LbGp4的降解及其活性寡糖片断的初步探究[D];西北大学;2011年
2 逄鑫;2-氨基蒽醌柱前衍生化糖类物质的分析[D];西北大学;2011年
3 徐莎;糖蛋白N-糖链释放及荧光标记衍生物的电喷雾质谱研究[D];西北大学;2011年
4 黄琳娜;超高效液相色谱—质谱联用技术在药物分析中的应用研究[D];浙江工业大学;2010年
5 陈刚;蛋白质组学中的多维液相色谱—质谱技术研究及其在胰腺癌标志物筛选中的应用[D];西北大学;2006年
6 刘嘉蓉;蛋白质组学质谱数据预处理新策略研究及应用[D];同济大学;2008年
7 吴刚;基于质谱技术的肿瘤血清O-糖组学研究[D];复旦大学;2009年
8 刘影;微量复杂生物样品糖蛋白N-糖链电喷雾电离质谱分析前处理方法的建立[D];西北大学;2010年
9 牛春燕;酸枣仁中黄酮类化学成分及质量分析方法研究[D];中国协和医科大学;2010年
10 吴智宇;基于稳定同位素标记吉拉德试剂P的还原性寡糖相对定量分析法[D];西北大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 钱林艺;应万涛;刘新;卢庄;蔡耘;何建勇;钱小红;;~(18)O稳定同位素标记定量蛋白质组研究技术的建立与优化[J];分析化学;2007年02期
2 熊少祥,韩慧婉,赵睿,王光辉,马会民,陈义,刘国诠;高效液相色谱-激光诱导荧光-增强型电荷耦合器件检测氨基酸的研究[J];高等学校化学学报;2000年08期
3 严钦;俞慧清;成国祥;;蛋白糖基化与免疫研究进展[J];现代免疫学;2008年02期
4 刘丽敏;王海敏;虞海霞;赵晶;郑毅男;;柱前衍生反相高效液相色谱法测定西洋参中游离氨基酸[J];中成药;2009年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邹大鹏,康建勋,刘宏民,许卫超,张慧君,张碧;新型C10高碳糖的NMR和ESI-MS/MS研究[J];波谱学杂志;2004年04期
2 柳伟强,李晓霞,赵晓瑜,牛建章;稳定同位素标记核酸法在非培养微生物代谢功能研究中的应用[J];生命的化学;2005年02期
3 孟丽丽;齐孟文;;稳定同位素标记方法在蛋白质组学定量分析中的应用[J];同位素;2005年04期
4 刘新;应万涛;钱小红;;比较蛋白质组学研究中的稳定同位素标记技术[J];化学通报;2007年02期
5 刘慧玲;张养军;钱小红;;稳定同位素化学标记结合质谱技术在定量蛋白质组学中的应用[J];生物技术通讯;2006年03期
6 刘慧杰;田蕴;郑天凌;;稳定同位素技术在污染环境生物修复研究中的应用[J];应用与环境生物学报;2007年03期
7 仇晓燕;崔勐;刘志强;刘淑莹;;蛋白质中二硫键的定位及其质谱分析[J];化学进展;2008年06期
8 张天幕;电喷雾电离质谱及其在蛋白质化学研究中的应用[J];生命科学仪器;2004年05期
9 刘慧杰;田蕴;熊小京;郑天凌;;未培养微生物研究的两种新技术及其寻找功能基因的应用[J];华侨大学学报(自然科学版);2008年02期
10 钱林艺;应万涛;刘新;卢庄;蔡耘;何建勇;钱小红;;~(18)O稳定同位素标记定量蛋白质组研究技术的建立与优化[J];分析化学;2007年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 隋少卉;王京兰;贾伟;卢庄;刘金风;宋丽娜;蔡耘;钱小红;;基于~(18)O稳定同位素标记的磷酸化蛋白质组学定量方法的研究[A];中国有机质谱学第十四届全国学术大会会议论文集[C];2007年
2 李刚;杨艳;刘艳;刘钟栋;赵玉芬;;ESI-MSn技术在非衍生化糖类结构分析中的应用[A];中国化学会第26届学术年会化学生物分会场论文集[C];2008年
3 任海平;马丽;卢奎;李杰;;精氨酸二肽的正离子电喷雾质谱研究[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(下册)[C];2006年
4 王秋泉;赖莺;杨利民;黄本立;王小如;;叶绿素中镧的含量及其存在结构[A];中国稀土学会第四届学术年会论文集[C];2000年
5 韩凤梅;张玲;王世敏;蔡敏;陈勇;;丹参脂溶性成分的ESI-MS行为及其特征指纹图谱的研究[A];中国有机质谱学第十二届全国学术大会论文集[C];2003年
6 张菁;张立;周颖;郭寅龙;;新型同位素标记试剂的设计及其在比较分析中的应用[A];中国有机质谱学第十四届全国学术大会会议论文集[C];2007年
7 孙咏梅;张林;许志勤;高兰兴;;气质联用分离测定~(15)N-甘氨酸方法的研究[A];中国营养学会第七届全国营养学术会议论文摘要汇编[C];1996年
8 杨晓光;;能量与蛋白质需要量的研究[A];中国营养学会第十次全国营养学术会议暨第七届会员代表大会论文摘要汇编[C];2008年
9 赵文杰;李红;曹书霞;汤丽娜;卢奎;赵玉芬;;三氯化磷辅助下缬氨酸自组装成肽反应的ESI-MS研究[A];第三届全国有机化学学术会议论文集(上册)[C];2004年
10 刘银坤;;肝病相关疾病蛋白质组学研究进展和临床应用展望[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 张荔子;建立国家级分子核医学平台[N];健康报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 桑志红;建立SILAC定量技术并发现CD40受体激活后招募的复合物新组分[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
2 刘新;基于乙酰化稳定同位素标记—液相色谱—傅立叶变换离子回旋共振质谱联用的定量蛋白质组研究策略的建立、评价与应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
3 曾家伟;基于pulsed SILAC蛋白质组学定量方法的优化及其在microRNA靶基因筛选中的应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
4 王昕;金属元素标记结合质谱技术的蛋白质组多重定量新方法研究及应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年
5 林昕;基于活性探针分子对代谢型γ-氨基丁酸受体激活机制的研究[D];华中科技大学;2012年
6 李茂玉;~(18)O标记技术改良和分析工具开发及在鼻咽癌转移相关膜蛋白组研究中的应用[D];中南大学;2011年
7 林昕;基于活性探针分子对代谢型γ-氨基丁酸受体激活机制的研究[D];华中科技大学;2010年
8 周贵积;ESI-MS应用于三氯氧磷与氨基酸及四氢呋喃反应的研究[D];厦门大学;2005年
9 平灵艳;外源基因诱导表达引发细胞反应的大肠杆菌定量蛋白质组学研究[D];武汉大学;2012年
10 张蓉;电喷雾质谱在精细有机化学品研究中的应用[D];大连理工大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 薛向东;基于电喷雾质谱(ESI-MS)的稳定同位素标记对糖类物质进行相对定量和定性分析方法的研究[D];西北大学;2011年
2 汪波;富集过程及衍生化方法对N-糖链电喷雾电离质谱(ESI-MS)分析的影响研究[D];西北大学;2012年
3 张强;高速逆流色谱大规模纯化和厚朴酚及应用SILAC技术研究和厚朴酚治疗HepG2细胞作用机理[D];四川大学;2007年
4 杨星;基于稳定同位素标记与质谱分析的蛋白质定量数据处理方法研究[D];国防科学技术大学;2008年
5 赵建亮;壬基酚聚氧乙烯醚好氧生物降解的研究[D];中国日用化学工业研究院;2006年
6 金花;谷胱甘肽和硒的反应机理研究[D];延边大学;2006年
7 王国旗;电喷雾离子聚焦装置的优化与仿真[D];大连理工大学;2012年
8 蒋忠平;猴头菌子实体寡糖的提取、分离及结构研究[D];浙江工业大学;2009年
9 赵宗阁;血肽X及其衍生物的合成、纯化、活性测定及质量研究[D];中国药品生物制品检定所;2004年
10 吴智宇;基于稳定同位素标记吉拉德试剂P的还原性寡糖相对定量分析法[D];西北大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026