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《西北大学》 2011年
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菠菜中SOD的纯化及红景天滴丸中红景天苷的测定

苟迎娣  
【摘要】:在现代分离科学的应用研究中,由于高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)具有高效、快速、灵敏度和纯化倍数高等优势,已经成为天然活性成分分析和分离的强有力工具。尤其是从复杂样品中如中草药有效成分、功能蛋白质、酶等生物大分子的分析和分离越来越趋向于快速、环保、低成本的分析、分离方法的建立。因此,本研究利用HPLC法,建立了中药制剂红景天滴丸中红景天苷的含量测定方法,同时对对菠菜中的超氧化物歧化酶(SOD)进行了分离纯化。 本论文包括四个部分: 1.文献综述:本章节综述了不同机理HPLC法,从一维和二维在线/离线LC联用技术在一些复杂样品分析和分离提取方面的进展及其应用。 2.红景天滴丸中红景天苷的分离及其含量测定:利用HP-RPLC法对红景天滴丸中红景天苷进行定性和定量分析,包括色谱洗脱方式的选择、重复性、稳定性、加标回收率以及含量测定的考察,并定量测定不同溶剂中红景天滴丸中红景天苷的含量。结果显示,分别用水和甲醇作溶剂从红景天滴丸中提取红景天苷时,其提取率分别为9.25 mg/g和9.27 mg/g,因此,可用水取代甲醇做溶剂提取取红景天营,从而减少了有机溶剂使用造成的环境污染。 3.菠菜中超氧化物歧化酶的粗分离:优化了菠菜中SOD的提取条件,包括提取液的pH、料液比以及SOD粗酶液分离纯化中加热的温度和丙酮的用量,并对测活方法进行筛选,建立了从菠菜中超氧化物歧化酶的粗分离方法。结果在获得的最佳优化条件下,SOD比活力可达72.38 U/mg,纯化倍数为4.2。采用同功酶电泳对菠菜中的SOD进行同功酶鉴定,结果证明菠菜中的SOD主要为Cu,Zn-SOD;通过SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS测定菠菜中的Cu,Zn-SOD分子量为31.8 kDa,亚基分子量为19.8 kDa。 4. HPLC法分离纯化超氧化物歧化酶:分别利用HPHIC法和HPIEC法以及HPHIC-SEC法对SOD粗酶液进行精纯化,并对几种方法进行比较。结果用HPHIC分离后,比活力为119.82 U/mg,纯化倍数为7.8,活性回收率为34.3%; HPIEC法分离后比活力为159.92 U/mg,纯化倍数为10.7,活性回收率为43.6%;而采用HPHIC-SEC二维离线模式分离后比活力为284.65 U/mg,纯化倍数为19.0,活性回收率为60.5%。因此,离线HPHIC-SEC模式分离纯化SOD可获得最大的活性回收率和纯化倍数。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:TQ461

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【参考文献】
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