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《西北大学》 2011年
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铁棍山药有效成分提取分离及其活性研究

陈佳希  
【摘要】:铁棍山药为山药中的上品,现代中医认为其具有预防心血管疾病和提高免疫作用。为了明确其活性物质的化学成分和作用原理,我们进行了如下研究: 首先,采用系统预试验法对铁棍山药中可能含有的化学物质进行了系统检测研究;其次,采用极性分级试验法对其尿囊素的提取分离进行研究;再次,采用醇回流、柱层析、化学检测与紫外光谱检测,对其黄酮提取分离及检定进行研究,提取实验的安排和数据处理采用响应面法;还采用膜过滤法及柱层析法对其多糖分离及纯化进行研究;还采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对其蛋白的分子量进行测定;最后,采用水杨酸法、邻苯三酚自氧化法等对其多糖及黄酮清除自由基活性进行了评价。 实验得出:铁棍山药提取液中尿囊素、酚性成分、黄酮醇、黄酮、蛋白质、多糖、皂苷及脂类化学物质的鉴别反应为正反应;有机酸及生物碱为阴性反应。其正丁醇饱和水溶液中得到的白色结晶,IRvmaxcm-1为:3440、3445、1783、1712、1657、1603、1520、1184、1011、817、780、760、710。其黄酮的紫外吸收为:带Ⅰ362nm,带Ⅱ259nm;10项黄酮化学诊断反应现象明确。其蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳Rf值为0.31,其多糖成分Ⅰ的TLC分析,Rf值为0.47,0.57。多糖成分Ⅱ的TLC分析,Rf值为0.47,0.53,0.57。其总黄酮及总多糖在浓度为1mg/ml时,对·OH清除率依次为74.55%,29.45%;对NO2-清除率依次为29.41%,39.79%:对DPPH-自由基清除率依次为30.2%,41.65%;对超氧阴离子O-清除率依次为18.31%,27.2%。 实验得出:在实验条件下,铁棍山药的总黄酮提取率在0.31%-0.88%范围内,其总多糖的提取率为0.74%-2.28%。D101树脂对其总黄酮,静态饱和吸附量为15.3mg/g,动态饱和吸附量为12.6mg/g,静态洗脱率为94.7%,动态洗脱率为91.2%;上柱溶液与树脂比5:1时,回收率95.2%,10:1时,回收率87.43%;树脂脱色率D101为70.19%,AB-8为67.17%,NKA-9为62.63%。陶瓷膜纯化多糖,回收率为92.2%。超滤膜2000纯化多糖,透过率为51.3%,纯度为42.7%。超滤膜20000纯化多糖,透过率为89.6%。纯度为33.8%。 研究表明,铁棍山药含有尿囊素、黄酮醇、黄酮、蛋白质、多糖、皂苷及脂类化学物质。其中薯蓣皂苷含量很低;尿囊素含量较高,达0.53%以上;黄酮类物质中3,5,7,3′-四羟基黄酮含量较高的;蛋白为单纯蛋白,分子量约为22KD;多糖中分子量小于2000D的占21.9%,分子量大于2000D小于20000D占30.3%,分离得到的两个纯多糖,多糖Ⅰ由葡萄糖及山梨糖组成;多糖Ⅱ由葡萄糖、山梨糖及果糖组成;铁棍山药中的黄酮和多糖类物质具有良好的自由基有清除作用是其预防心血管疾病和提高免疫作用的物质基础。 研究还表明,在试验范围内铁棍山药中黄酮类物质最佳提取条件为:料液比为1:10、80%乙醇、82℃、4h,提取方程为Y=0.67+0.092A+0.082C+0.074A2-0.15B2+0.056C2+0.069D2,理论最大提取率为0.88%,实测值与预测值误差为3.3%;D101树脂纯化黄酮的最佳工艺条件为:水溶液上样,上样速度为1BV/h,动态饱和吸附量为12.6mg/g,70%乙醇洗脱,洗脱速度为1BV/h,洗脱液量为3BV,多糖脱色率可达70.19%。总多糖提取条件为:浸提2次,料液比1:15、60℃、1.5h,总提取率可达2.28%;陶瓷膜纯化多糖工艺条件为:压力2.4bar,温度30℃,膜通量3.69,多糖回收率可达92.2%。薯蓣皂苷提取条件为:10倍量95%乙醇回流提取3次,每次2小时。尿囊素采用双醇法提取可获得化学单体。 通过本研究,基本明确了铁棍山药的合理应用的方向,并为其化学成分的提取分离提供可靠的实验依据。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S567.239

【引证文献】
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