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《西北大学》 2011年
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模型蛋白与中药活性成分发光行为研究与应用

何西利  
【摘要】:药物在体内与蛋白质的作用不仅影响其在体内的分布、代谢和排泄,还和其药效息息相关。因此,在分子水平上研究蛋白质与药物的相互作用对阐明药物的药理活性和药代动力学具有重要意义。 大黄属于我国四大最常用的中药之一,具有多方面的药理活性。至今己阐明大黄的主要活性成分为蒽醌类物质,包括:大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素。芦丁、山萘酚和橙皮素是临床广泛使用的黄酮类药物,国内已生产口服的复方芦丁片。 本文以鲁米诺为化学发光探针,采用流动注射.化学发光法,研究肌红蛋白与大黄蒽醌类药物以及黄酮类药物的相互作用,研究工作的创新点为: 1.通过测定小分子鲁米诺的外源荧光,系统研究了牛血清白蛋白、肌红蛋白、溶菌酶和过氧化氢酶与鲁米诺的相互作用。建立了以小分子为荧光体,研究蛋白质与其相互作用的数学模型。在新建模型的基础上,计算出牛血清白蛋白、肌红蛋白、溶菌酶和过氧化氢酶与鲁米诺相互作用的结合常数和结合位点数。 2.以鲁米诺为化学发光探针,建立了研究肌红蛋白与药物相互作用的流动注射化学发光数学模型,并用该模型计算出肌红蛋白与大黄葸醌类药物以及黄酮类药物相互作用的结合常数和结合位点数。实验结果表明,用本文构建发光模型研究蛋白质与小分子相互作用,不仅操作简单、灵敏度高,还可获得蛋白质与小分子相互作用较多参考信息(包括:结合常数、结合位点数、作用力类型及热力学参数等),为阐明药物和蛋白质的作用原理提供新方法新技术。 论文主要内容包括: 1.引用文献180篇。概述了蛋白质的结构和功能以及研究蛋白质与小分子相互作用的实验方法;总结了大黄、大黄葸醌和黄酮类化合物的主要药理活性。 2.根据Stern-Volmer方程及相关理论,推断模型蛋白对鲁米诺荧光猝灭机制为静态猝灭。通过测定小分子外源荧光,构建了研究蛋白质与其相互作用的数学模型,计算公式为:并计算出模型蛋白对鲁米诺的结合常数和结合位点数。根据模型蛋白的结构探讨了可能的结合位点。 3.鲁米诺.模型蛋白发光体系的建立及其光谱行为的研究:详细研究了模型蛋白对鲁米诺化学发光性质的影响。结果表明,模型蛋白均能增强鲁米诺的化学发光,并缩短鲁米诺达到最大发光强度的时间,化学发光强度增大值与模型蛋白浓度成线性关系。根据模型蛋白对鲁米诺可能的结合位点,探讨了模型蛋白对鲁米诺化学发光增敏的可能机理。 4.以鲁米诺-肌红蛋白化学发光体系为基础,研究了大黄蒽醌类药物(大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素和大黄素甲醚)对鲁米诺-肌红蛋白化学发光体系的影响,发现它们对该体系的化学发光均产生抑制作用,并提出了可能的作用机理。以鲁米诺-肌红蛋白-大黄蒽醌类药物作用机理为基础,构建了研究蛋白质与药物相互作用的流动注射化学发光数学模型,计算方程为:计算出在298K和303K时,肌红蛋白与大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素和大黄素甲醚相互作用的结合常数Ka和结合位点数n。计算结果表明:肌红蛋白与大黄蒽醌类药物的结合常数肠值在103~107数量级,结合位点数n约为1。结合能力大小顺序为:芦荟大黄素大黄酚大黄素大黄素甲醚大黄酸。计算出热力学函数的变值,判断肌红蛋白与大黄蒽醌类药物之间的结合力应为疏水作用力,探讨了大黄蒽醌类药物的结构和药理活性与结合力大小的相关性。 5.以鲁米诺-肌红蛋白化学发光体系为基础,研究了芦丁、山萘酚、橙皮素对鲁米诺-肌红蛋白化学发光体系的影响,发现它们对该体系的化学发光均产生抑制作用。通过进一步研究,提出了可能的抑制机理。应用基于流动注射-化学发光法构建的数学模型,计算出在298K和303K时,肌红蛋白与芦丁、山萘酚、橙皮素相互作用的结合常数和结合位点数。结合常数在104~105数量级。结合力大小顺序是:山萘酚芦丁橙皮素。并计算出热力学函数的变值,以此判断结合力应为疏水作用力。探讨了结合常数的大小与黄酮类药物结构的相关性。 6.以鲁米诺-肌红蛋白化学发光体系为基础,发现克林霉素、氯雷他定、三聚氰胺和龙胆苦苷对该体系的发光有较强的猝灭作用。应用本文所构建的流动注射化学发光数学模型,分别给出肌红蛋白与克林霉素、氯雷他定和三聚氰胺相互作用的结合常数Ka和结合位点数n,得到非常满意的计算结果。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:O657.39

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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10 朱颖;安芳;董晋莉;;自制妇康方配合乳房、子宫按摩对产后康复的促进作用[J];中医药临床杂志;2005年06期
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4 马先雄;胡文雅;涂俊萍;;中西医结合治疗90例排卵功能障碍的临床观察[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年
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7 王燕;王惠聪;周志昆;陈厚彬;胡桂兵;黄旭明;;荔枝的功能及活性成分研究进展[A];海峡两岸荔枝龙眼产业发展研讨会论文集[C];2009年
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10 贺帅;姚育发;张忠义;;应用超高压技术提取元胡中延胡索乙素的研究[A];广东省药学会2009学术年会论文集[C];2010年
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6 王海萍;泛素连接酶Hrd1促进α1-抗胰蛋白酶Z突变体降解及细胞存活[D];安徽医科大学;2010年
7 李艺;小檗碱的生物代谢反应及代谢产物活性的研究[D];北京协和医学院;2010年
8 王俊峰;川西獐牙菜体细胞杂交及其环烯醚萜类化合物合成相关基因香叶醇-10羟化酶的克隆和功能验证[D];山东大学;2010年
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10 任红敏;大黄酚对黄瓜白粉病菌的抑制作用机制研究[D];河北农业大学;2011年
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4 陈晓英;喜树碱与生物大分子相互作用的光谱研究[D];郑州大学;2010年
5 王俊亮;超声波辅助Huisgen-Click反应在白杨素改造中应用及其与蛋白的相互作用研究[D];郑州大学;2010年
6 蔡军;基于树状高分子复合材料构建DNA电化学生物传感器的研究[D];山东农业大学;2010年
7 曲丽丽;大蒜脱臭方法及机理探讨[D];山东农业大学;2010年
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9 龙玉堂;瑞兴腰痛微丸制备工艺与质量标准的研究[D];湖南中医药大学;2010年
10 吴琪;鼻敏片对变应性鼻炎治疗的临床研究[D];湖南中医药大学;2010年
【同被引文献】
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1 马志科;昝林森;;血红素的应用与提取方法[J];动物医学进展;2010年09期
2 杜黎明,曹玺珉,吴红艳;胶束增敏-同步荧光光谱法直接测定血浆中的依诺沙星[J];分析化学;2003年11期
3 纪竹生,刘买利,胡继明;药物配体与生物大分子受体相互作用核磁共振的研究进展[J];分析化学;2004年11期
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9 张梦娟;郭艳丽;阎宏涛;张昆;;金纳米微粒修饰毛细管电泳分离蛋白质的研究[J];分析科学学报;2011年01期
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7 王华栋;四种大环内酯类抗生素和盐酸托莫西汀的化学发光分析研究[D];郑州大学;2007年
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10 慕丽晓;抗生素类药物和人血清白蛋白相互作用的研究[D];山西大学;2012年
【二级参考文献】
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10 李国豪,徐邦牢,雷秀霞,潘锦瑶,王蓉,叶惠芬;芦荟大黄素对人肺Ⅱ型上皮细胞F-actin细胞骨架的保护作用[J];广州医药;2004年06期
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9 李永新,赵丹华,卓淑娟,朱昌青,王伦;鲁米诺-四磺基锰酞菁-过氧化氢化学发光体系在蛋白质测定中的应用[J];分析化学;2003年05期
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4 徐杨;中性介质鲁米诺 电化学发光体系测定生物活性物质的研究[D];苏州大学;2003年
5 卢刚;阴离子交换膜固相化学发光法测定痕量金[D];吉林大学;2006年
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7 李建军;电生还原剂的化学发光分析研究[D];陕西师范大学;2001年
8 林斯;氯霉素酶促化学发光免疫分析方法的建立[D];中国原子能科学研究院;2005年
9 齐莹莹;不同介质体系鲁米诺电化学发光测定生物活性物质的研究[D];苏州大学;2004年
10 田丙正;新型流动注射微型电化学发光池的研制及其性能研究[D];苏州大学;2009年
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