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《西北大学》 2002年
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利用农杆菌转化葡萄细胞生产有用次生代谢产物——白藜芦醇

郭斌  
【摘要】: 本实验以葡萄愈伤组织为材料,以根癌农杆菌702菌株为感染菌株,进行植物基因转化,经过筛选获得转化细胞系M_o。用He-Ne激光对M_o进行诱变,经过筛选得突变细胞系T_12。最后研究了不同的诱导子对白藜芦醇合成的影响。 在农杆菌转化部分,实验结果表明,葡萄果皮愈伤组织预培养3天,其间用4.0mol/L的甘露醇处理6小时;浸染时间20钟;浸染温度24℃;共培养时间36小时;抑菌抗生素用500mg/L头孢塞圬钠;以B_5培养基为基本培养基,可使转化率提高到78%左右。经过高压纸电泳实验证明M_o能合成冠瘿碱,说明T-RNA已经整合到葡萄细胞核基因上并表达。对M_o进行测定,发现它生长迅速,生物量提高20-30%。用He-Ne激光器对M_o进行辐射,结果表明:对M_o辐照12分钟时,获突变细胞株T_12,对T_12进行测试,发现它的生长周期和生产周期比比照提前8天左右。同时白藜芦醇的合成量提高到对照的1.5-1.8倍。 在最后一部分,研究结果表明,不论是化学诱导子或是真菌诱导子都对白藜芦醇有促进作用。最佳的诱导子组合是:ALCL_3(7.5mg/L)+灰色葡萄孢(10mg/L),在加了这两种诱导子的培养基上,细胞合成藜芦醇的量提高到对照的3倍以上。通过对诱导加入时间的考察,结果表明,当在细胞生长的第30天左右加入子AlCl_3(7.5mg/L)+灰色葡萄孢(10mg/L)诱导子时,可使白藜芦醇的产量在细胞胞本身生长不受影响的条件下增加400-500%。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q943.2

【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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