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《西北大学》 2004年
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药用真菌猪苓He-Ne激光及紫外线诱变育种的研究

刘瑛颖  
【摘要】:本文以药用真菌猪苓为研究对象,采用He-Ne激光及紫外线两种诱变处理对猪苓出发菌株菌丝体进行了单一诱变剂诱变和复合诱变。通过测量诱变菌落直径初步确定菌丝生长速率,从各单一诱变剂诱变和复合诱变中均获得的生长速率不同程度提高的变异菌株。 对于初步筛选的变异菌株L3-7、U1-7、LU-7,测量了液体培养条件下的菌丝干重生长曲线、胞外粗多糖的动态积累、三种与碳素营养相关的酶的活性变化情况,从而进一步筛选出了生长量和胞外粗多糖产量均比出发菌株有显著提高的优势变异菌株LU-7。该菌株经酯酶同工酶谱分析,酶带条数和Rf值均发生了显著变化,同时通过传代稳定性试验分析,都表明该菌株遗传物质发生了改变且遗传稳定性好。 对菌株LU-7的液体培养基进行了优化,包括碳源、氮源以及无机元素,还发现附加一定量的青冈木煮液,能明显提高菌丝生长速度和胞外多糖积累。同时优化了部分优势变异菌株的培养条件。菌株LU-7在经筛选的优化培养基上生长的最大菌丝体干重为165.5mg/30ml,比在基本培养基上生长的出发菌株高出了74.9%。LU-7在第11天达到产糖高峰期,为5.42mg/ml,比出发菌株的2.78mg/ml提高了95.0%。 LU-7菌丝发酵滤液经Sevag法除蛋白,减压浓缩,95%乙醇沉淀,丙酮、乙醚洗涤等步骤获得了粗品胞外多糖,再经葡聚糖凝胶柱层析获得纯品多糖。采用薄层层析和纸层析分析了该菌株与出发菌株纯品多糖酸水解的单糖组成,发现其单糖组分都是以甘露糖为主。同时还对比了两者的红外光图谱,两者具有相同的特征吸收峰。说明优势变异菌株的胞外多糖并未发生变异。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S567.3

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