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六种食品致病菌的多重PCR检测

焦豫良  
【摘要】:食品安全是一个越来越引起人们重视的问题,不仅影响到人们的生活、工作和健康,更是是关系到国计民生的大事。在各种食物中毒中,细菌性食物中毒则是食物中毒的主要因素,常见的食源性致病菌包括沙门氏菌属、变形杆菌属、副溶血性弧菌、葡萄球菌及毒素、肉毒梭菌毒素、蜡样芽孢杆菌、韦氏梭菌、弯曲杆菌、李斯特菌、致病性大肠杆菌、酵米面椰毒假单胞杆菌、结肠炎耶尔森氏菌、链球菌及志贺氏菌属。本文针对在我国食物中毒中最常见的致病菌进行研究,寻求食物中毒诊断及食品检测的有效方法。本文涉及的食源性致病菌有肠毒性大肠埃希菌(E. coli-ETEC)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、沙门氏菌(Salmonella spp)、大肠埃希菌0157:H7(E. coli-0157:H7)、志贺氏菌(Shigella spp)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)等菌属或菌。通过大量的文献参考和实验,我们经过筛选挑取种或属间特异的序列及相应引物,然后用这些引物对各种细菌的基因组序列进行PCR扩增检测其特异性,最终决定出用于检测的最优的目的基因及引物。其中沙门菌和志贺菌的引物为属间通用引物,其余各菌的引物均检测到种的水平。各菌的目的基因分别为热不稳定肠毒素A亚基基因eltA(肠毒性大肠埃希菌)、溶血素hlyA基因(大肠埃希菌0157:H7)、侵袭质粒抗原pINV_F6_M1382 IpaH1.4(ipaH1.4)基因(志贺无菌)、侵袭力蛋白A(invA)基因(沙门氏菌)、肠毒素蛋白A和B基因(霍乱弧菌)、溶血素基因(蜡样芽孢杆菌)。这些目的基因的引物在一个混合的PCR体系中扩增出各自的目的基因,并且特异性和敏感度都和单独PCR扩增相同(灵敏度最低均为10.30fg)。多重体系扩增所用时间也和单独PCR相同,从样品处理开始仅需3-4个小时即可得到结果。用调整好的多重体系对随机组合的致病菌样品进行扩增,以验证扩增时在较高敏感度的条件下各目的基因及引物间没有干扰。最后将多重体系付诸实践,检测了21种食品样品,并对检测出有病原菌的食品进行微生物菌种分离培养鉴定实验,以验证PCR结果并发现二者检测结果一致。本文既证明了多重PCR检测的可行性,更为食物中毒诊断及食品检测提供了一种可靠有效方法。将它做成体外基因诊断试剂盒,将是食物中毒诊断及食品检测的有效工具。本文同时也分析了影响多重扩增的诸多因素及其相互关系。


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1 井 韦;把四天缩短为四小时[N];中国质量报;2005年
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