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《西北大学》 2005年
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苏云金杆菌NU-1、NU-2的混合发酵及毒力保护的研究

王丽红  
【摘要】:通过对苏云金杆菌NU-1、NU-2的3种配比(接种比例NU-1:NU-2分别为1:1,1:3,3:1)混合发酵结果得出:E配比(NU-1:NU-2接种比例为3:1)发酵同步率83%,在发酵终止(41h)菌数可达到68×10~8个/mL,晶体蛋白含量达到7.334mg/mL,比纯培养晶体蛋白含量分别增加了16.2%和16.8%。因此采用3:1为NU-1、NU-2混合发酵的最佳配比。 探讨了NU-2原生质体形成条件,得出最佳形成条件为:将菌体培养10h后再经活化5h,酶解缓冲液pH7.0,溶菌酶浓度1.5mg/mL,42℃处理60min。 采用紫外线和氯化锂为复合诱变剂,对NU-2原生质体进行诱变,筛选出发酵周期和NU-1菌株相同步的NU-2-16菌株,其晶体蛋白含量比出发菌株提高了10.03% 诱变菌株NU-1、NU-2-16混合培养,发酵同步率达到98%,在发酵终止(40h)菌数可达到72.4×10~8个/mL,晶体蛋白含量达到7.896mg/mL,与出发菌株混合发酵相比晶体蛋白含量提高了7.7%。 对NU-1、NU-2-16混合发酵的混合氮源和C/N的研究得出:豆饼粉和酵母粉作为混合氮源时,发酵周期提前到38h;C/N为1:2.5时,发酵液中的菌数和晶体蛋白含量较高。并通过L_(16)(4~5)正交试验,确定了混合发酵的优化培养基为(%):豆饼粉2.5,酵母粉2.5,淀粉2.0,CaCO_3 0.15,K_2HPO_40.5,MgSO_40.035。在此条件下,发酵终止(38h)菌数达到了83.6×10~8个/mL,晶体蛋白含量达到8.351mg/mL。 研究了不同浓度腐殖酸,刚果红,甲基绿及蚕蛹干粉作为紫外防护剂对芽孢的保护作用,得出0.05%刚果红防护效果最好,其次是0.1%甲基绿、0.5%蚕蛹干粉和0.5%腐殖酸。SDS-PAGE电泳图谱得出:添加0.05%刚果红的伴孢晶体经裂解后产生的135和65道尔顿两种毒素蛋白区带,在紫外线照射4h还存在,说明刚果红对苏云金杆菌的伴孢晶体有明显的保护作用。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S482.39

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