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《西北大学》 2006年
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重组类人胶原蛋白(Ⅱ)分离纯化的工艺研究

侯文洁  
【摘要】:蛋白质的分离纯化是生化分离工程的一个重要组成部分,本文主要研究重组类人胶原蛋白Ⅱ纯化工艺。基因工程菌E·coli BL 21经细胞破碎、沉淀、超滤分离后,再通过离子交换层析纯化,得到较高纯度类人胶原蛋白Ⅱ。 在细胞破碎阶段,通过对细胞破碎方法的选择,系统研究了高压匀浆过程物理和化学因素的影响。包括操作方式、匀浆次数、操作压力、料液悬浮浓度的影响。从而选择采用高压匀浆法批式循环,经2次破碎,操作压力为70MPa、菌体悬浮液浓度为:菌体质量:水体积=1:10。建立破碎率随操作压力变化的方程S=1-(e~(0.058*2~(-0.005)p~(0.906))~(-1)。 在沉淀阶段,通过单因素实验逐个确定沉淀各条件的范围,采用L_(16)(4~5)正交表,经方差分析确定沉淀条件为pH2.8,NaCl浓度5%、温度18℃,蛋白浓度5g/L。沉淀后,重组类人胶原蛋白Ⅱ的纯度达到37.68%,回收率达到88.73%。 在超滤阶段,采用截留分子量为30kD的膜包对沉淀后的上清液进行超滤,选择的超滤条件为:压力:0.2MPa、pH=7,料液浓度:0.3%、料液温度:25℃、料液的体积流量:2L/min。并建立了超滤模型:J=ΔP/(0.006871+2.411*v~(-4.15)*w~~(0.78)*ΔP~(3.848)+1.424*v~(-1.601)*W~(0.928)*ΔP~(3.849)。超滤后,重组类人胶原蛋白Ⅱ的纯度达到47.62%,回收率达到91.04%。 在层析阶段,对阴离子(DE52)、阳离子(CM52)交换树脂的分离效果进行比较,采用阳离子(CM52)进行层析分离,NaCl梯度洗脱,得到类人胶原蛋白Ⅱ的纯度为96.43%,总回收率为71.69%。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分子量为97KD,经考马斯亮蓝染色显红色。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:TQ464.7

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【参考文献】
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1 陈淑莲,游静,王国俊;超临界流体萃取-硅胶柱收集联用提取蓬莪术中有效成分[J];分析化学;2001年06期
2 虞骥,甘宏宇,何奕,袁骏,陈欢林;聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜分离γ-球蛋白的研究(Ⅰ)——聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜的制备及其吸附性能[J];高等学校化学学报;2003年05期
3 余海,廖小宜,周志瑜;鼠尾肌腱胶原蛋白的提取及凝胶的制备[J];海南医学;2000年03期
4 朱自强,关怡新,李勉;双水相系统在抗生素提取和合成中的应用[J];化工学报;2001年12期
5 范代娣,段明瑞,米钰,宋纪蓉,惠俊峰,王德伟,王国柱;重组E.coli工程菌高密度培养生产人源型胶原蛋白[J];化工学报;2002年07期
6 朱建航,魏东芝,曹学君,袁中一;酶法合成头孢氨苄的反应-双水相萃取耦合过程[J];化工学报;2003年01期
7 韩伟,高姗,邓修;微波辐射促进阔叶十大功劳叶萃取过程的研究[J];华东理工大学学报;2002年04期
8 段明瑞,米钰,范代娣;重组人源型胶原蛋白基因工程菌补料分批发酵过程动力学研究[J];化学反应工程与工艺;2002年03期
9 文禹撷,林东强,陆瑾,姚善泾;一种双水相亲和分配配基的制备过程优化——亚氨基二乙酸-聚乙二醇[J];化学反应工程与工艺;2003年02期
10 刘建,闫英桃,邵海欣,陈长江;CL-TBP萃淋树脂吸附分离镓(Ga)研究[J];化学通报;2001年02期
【共引文献】
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1 游银伟,汪天虹,岳寿松;海洋青霉(Penicilliumsp.)FS010441的形态学观察和产纤维素酶性质初步研究[J];山东农业科学;2005年01期
2 李瑞国;朱秀敏;杨慧;;不同萌发期绿豆芽蛋白质含量的测定及营养价值分析[J];山东农业科学;2011年01期
3 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
4 孔小卫,李坤,江洪波;二甲亚砜对水稻浸种及苗期的后续效应研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2002年03期
5 刘晓颖,丁毅;鸡脑P物质的制取及分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2003年01期
6 朱华庆,陈飞,谢惠安,张萍;热击对水稻(O.sativaL.)叶绿素a,b及POR同功酶的效应[J];安徽大学学报(自然科学版);1998年04期
7 叶生梅;多菌联合固态发酵生产酒糟菌体蛋白饲料的实验研究[J];安徽机电学院学报;2001年04期
8 孔小卫;二甲亚砜(DMSO)对大豆萌发及幼苗期生理生化指标的影响[J];安徽机电学院学报;2002年04期
9 叶生梅,王岚岚,欧阳明;一株纤维素酶产生菌的固态发酵初步研究[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2003年01期
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1 王在贵;何瑞国;钱世钧;刘朝良;;特异腐质霉纤维素酶的酶谱分析[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 李红剑;曹义鸣;秦建军;袁权;;纤维素中空纤维超滤膜的抗油污染性能研究[A];第二届中国膜科学与技术报告会论文集[C];2005年
3 张新妙;马润宇;;用膜结晶技术制备蛋白质晶体的研究[A];第二届全国膜分离技术在食品工业中应用研讨会论文集[C];2006年
4 高娟;唐明森;王艳玲;蒋再学;竺薇;罗满林;;重组猪α干扰素发酵工艺的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 周亚军;康建波;刘妍菊;苏丹;马龙彪;;混合肉肌原纤维蛋白特性研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
6 陈丽清;陈清;韩佳冬;马良;张宇昊;;超声波辅助猪皮乳化脱脂工艺研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
7 邓利玲;胡小芳;卢明玥;钟耕;;冷榨南瓜子饼蛋白粉酶法水解工艺及其产物性质研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
8 李彦臻;杨利国;;奶牛Y精子膜蛋白的提取与分析[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
9 徐冬云;江仲文;;红曲霉谷氨酸脱羧酶的性质研究[A];2007年学术年会论文集[C];2007年
10 单彩云;刘春燕;姜振峰;邱红梅;单大鹏;张大伟;胡国华;陈庆山;;温度对黑龙江大豆主栽品种球蛋白的影响[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
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1 张冬梅;牙龈卟啉单胞菌侵入血管内皮细胞后粘附分子表达及信号调控的研究[D];中国医科大学;2008年
2 彭莹;土星拟威尔酵母WC91-2菌株嗜杀因子和β-1,3-葡聚糖酶的研究[D];中国海洋大学;2010年
3 刘伟;怀头鲇Silurus soldatovi早期发育生理生态学研究[D];中国海洋大学;2010年
4 隋建新;单增李斯特菌鸡卵黄抗体的抑菌性能及其机理研究[D];中国海洋大学;2010年
5 李彧娜;微孢根霉华根霉变种CICIM F0088生淀粉酶系的研究[D];江南大学;2010年
6 郭金玲;酵母全细胞不对称还原法合成光学纯α-羟基酸及其脱氢酶特性的研究[D];江南大学;2010年
7 孟永春;胶原与生物活性玻璃作用机理及其复合骨修复材料的研究[D];华南理工大学;2010年
8 徐军;富苯丙氨酸碱性短肽的发现及其对蛋白质等电点和免疫交叉反应的影响[D];华南理工大学;2010年
9 黄曼;电子束辐照在线杀虫/菌效果及对小麦品质影响的研究[D];华南理工大学;2010年
10 高云涛;丙醇—盐双水相和盐诱导浮选法分离贵金属的研究[D];昆明理工大学;2008年
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1 周艳华;可溶性鸡蛋壳膜蛋白与多肽的制备及其抗氧化活性的研究[D];华中农业大学;2010年
2 李浩丽;Bacillus pumilus CN8菌株高效降解猪血Hb酶的分离纯化与降解机制探讨[D];华中农业大学;2010年
3 荣保华;藕带多酚氧化酶性质及藕带保鲜初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 冷一非;嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育、培养及冻干发酵剂的研究[D];华中农业大学;2010年
5 申君;桃蚜的抗药性监测、杀虫剂的配方筛选及其增效生化机理的研究[D];华中农业大学;2010年
6 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
7 刘辉;红曲霉发酵提高γ-氨基丁酸含量的研究[D];安徽工程大学;2010年
8 洪伟;酪蛋白中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的研究[D];安徽工程大学;2010年
9 张星刚;双水相萃取光度法测定铬(Ⅵ)、镍(Ⅱ)、锌(Ⅱ)的研究与应用[D];山东科技大学;2010年
10 陈晓平;家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
【二级参考文献】
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1 李力,娄子洋,陈万生,张卫东,乔传卓;不同产地丹参中3种丹参酮含量变异[J];第二军医大学学报;2000年08期
2 林伟生,王国俊,俞惟乐;自制超临界流体萃取仪操作条件的优化及其应用[J];分析化学;1995年07期
3 商振华,周冬梅,郭为,于亿年,周良模,周康;去除内毒素的柱亲和介质与膜亲和介质的制备和特征[J];分析化学;1997年09期
4 黄业茹,欧庆瑜;GC-MIP与GC-FID的定量分析比较[J];分析仪器;1991年01期
5 郑宇,陈欢林,李静,柴红,刘茉娥;金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶的研究(Ⅰ)──低温氧等离子体改性条件对亲和膜结构与吸附性能的影响[J];高等学校化学学报;1999年08期
6 李静,陈欢林,柴红;金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶的研究(Ⅱ)──不同金属螯合亲和膜对溶菌酶的吸附性能[J];高等学校化学学报;1999年08期
7 余晓,赵睿,方梅,熊少祥,苏天升,刘国诠;以寡聚组氨酸为配基的高效亲和色谱研究[J];高等学校化学学报;2000年04期
8 虞骥,甘宏宇,何奕,袁骏,陈欢林;聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜分离γ-球蛋白的研究(Ⅰ)——聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜的制备及其吸附性能[J];高等学校化学学报;2003年05期
9 汤崇正,徐镰祥,汤立聪;聚合体改性微孔膜的制备及其在生化分离中的应用[J];高等学校化学学报;1996年02期
10 吴有庭,朱自强,林东强,梅乐和;多元渗透维里方程通式的表达双水相系统的液液平衡计算[J];高校化学工程学报;1997年04期
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5 李江;宋国强;陈靠山;李光友;;南极适冷菌Pseudoalteromonas sp. S-15-13胞外多糖的分离、纯化和结构分析[J];高等学校化学学报;2008年06期
6 张雷;曲和之;黄露;杜姗姗;郝东云;王晓平;;无花果叶超氧化物歧化酶的分离、纯化及性质研究[J];高等学校化学学报;2008年08期
7 樊金娟;罗霞;董智;;米糠抗氧化肽的提取和纯化工艺研究[J];食品科技;2008年12期
8 王克勤;严志慧;罗军武;陈亮;;聚酰胺树脂分离纯化芹菜黄酮的工艺研究[J];食品与机械;2009年03期
9 赵传峰;谢艳芳;吴敏;杨小弟;;纳米Al_(13)硫酸盐晶体的合成及表征[J];化工时刊;2010年03期
10 陈丛瑾;;大孔吸附树脂分离纯化黄酮类化合物的研究进展[J];化学与生物工程;2010年11期
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1 陈建华;黄少烈;朱宝璋;游鹏程;;分子蒸馏技术在天然产物分离纯化上的应用进展[A];全国中药标准研究学术研讨会论文集[C];2005年
2 王念跃;赵伟;端木浩;李勇;黄宇峰;;人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
3 王彩梅;蔡少丽;吴义真;林俊涵;章文贤;施巧琴;林琳;;Cryptococcus laurentii B40胞外脂肪酶的分离纯化及特性分析[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
4 刘卫平;;马铃薯病毒PVX的分离与纯化的研究[A];中国作物学会马铃薯专业委员会2000年年会论文集[C];2000年
5 姚育翠;李向荣;;大孔吸附树脂分离纯化玫瑰花中原花青素[A];第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集[C];2007年
6 李君珂;姜子涛;李荣;;树脂吸附法分离纯化首乌叶总黄酮[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
7 石闻华;陈贵林;;HSCCC法分离纯化锁阳乙酸乙酯萃取部分中的化合物[A];第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2009年
8 崔宏春;余继忠;黄海涛;周铁锋;郑旭霞;师大亮;郭敏明;江和源;江用文;;茶多糖的提取及分离纯化研究进展[A];第六届海峡两岸茶业学术研讨会论文集(摘要)[C];2010年
9 朱跃进;黄运红;张翼曼;龙中儿;;一株稀有放线菌产抗生素的离子交换法分离[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
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1 马浩剑李昕;王柯:五年做到国内第一[N];常州日报;2007年
2 林诚;卡那霉素分离纯化新技术通过鉴定[N];医药经济报;2002年
3 ;PCC分离纯化工艺进展速览[N];中国医药报;2006年
4 记者 王华锋;多数刺梨多糖组分具神经营养活性[N];中国医药报;2006年
5 王宏磊;中药苷类有效成分提取 辅料、工艺各不同[N];中国医药报;2006年
6 林喆罗艳 原忠;分子印迹技术用于中药分离有据可依[N];中国医药报;2007年
7 本报记者 何聪;丰原:经济环境求双赢[N];人民日报;2005年
8 金通证券 陈泳潮;科华生物 小盘成长 爆发填权[N];证券时报;2006年
9 本报记者 白毅;多种提取手段推动中药研发[N];中国医药报;2005年
10 曹建明;促红细胞生成素(EPO)[N];中国经营报;2000年
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1 陆志科;竹叶生物活性成分提取分离及其抗菌活性研究[D];中南林学院;2004年
2 徐金瑞;黑大豆种皮花色苷抗动脉粥样硬化及其抗氧化机制研究[D];西北农林科技大学;2006年
3 韩俊友;牛蛙皮肤抗菌肽分离纯化、基因克隆表达及生物学特性的研究[D];吉林大学;2007年
4 马春玲;海洋酵母普鲁兰类酵母碱性蛋白酶发酵生产、特性研究及基因克隆[D];中国海洋大学;2007年
5 陈杰;高密度培养盘基网柄菌及重组可溶性人Fas配体表达的研究[D];浙江大学;2008年
6 华颖;纤维蛋白溶解酶的发酵制备、分离纯化及酶学性质研究[D];江南大学;2008年
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1 刘春芬;纤维素酶高产菌株的选育及酶的分离纯化研究[D];西南农业大学;2005年
2 高秀蓉;人胰岛素固相酶促半合成及其工艺的研究[D];四川大学;2005年
3 张及禄;岩栖蝮蛇去整合蛋白的分离、纯化与抗肿瘤作用研究[D];吉林大学;2008年
4 李燕;新疆鲜蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质[D];新疆大学;2004年
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6 张峰;青稞β-葡聚糖的分离纯化及其理化性质研究[D];西南农业大学;2005年
7 俞志明;抗肿瘤植物的筛选及其有效成分的分离纯化[D];浙江工业大学;2005年
8 王瑞霞;枯草芽孢杆菌B-903菌株的发酵条件及所产抗生素的研究[D];河南农业大学;2005年
9 茅燕勇;微生物转化法制备11α-羟基化坎利酮[D];南京工业大学;2005年
10 王军华;芽孢杆菌Q-12的鉴定及其抗菌活性物质的研究[D];大连理工大学;2006年
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