收藏本站
《西北大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

匍匐翦股颖离体再生体系的建立与遗传转化研究;匍匐翦股颖Na~+/H~+反向转运蛋白基因的克隆

曾泉  
【摘要】: 随着人们对生活环境的日益关注,草坪业作为一种新兴产业已悄然兴起。草坪可以绿化环境,净化空气,保持水土,降低噪音污染,与人类文明有着非常重要的联系,已成为人们日常生活中不可或缺的部分。始于20世纪70年代的植物基因工程技术已被广泛用于包括草坪草在内的植物的品种改良研究,是当前最有效的育种方法之一。导入其他物种的基因能够拓展遗传改良的范围,有助于解决一些常规育种难以解决的特殊问题。将功能基因有目的、有针对性地导入草坪草胚性愈伤组织,可以经过再生获得改良的转基因植株,这是提高草坪草抗逆性的有效途径,已经成为目前研究的热点。 土地盐渍化是限制农作物生长、发育和产量最严重的非生物胁迫因素之一,培育耐盐的作物品种是克服这类因素的一条重要途径。国内外学者已就盐分对植物的伤害、植物的耐盐机理进行了长期研究,克隆了一些耐盐相关基因。通过基因工程技术转移这些抗盐基因,已经获得了一批盐胁迫耐受能力提高的转基因植物。 匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera L.)为多年生禾本科翦股颖属植物,原产于欧亚大陆,是最抗寒的冷季型草坪草之一。由于它具有较好的抗淹性,并有出苗均匀、叶片细密等优点,已被世界各国广泛用于建植高档观赏型草坪和运动型草坪,如城市中心广场、高尔夫球场和保龄球场等。但由于生态条件的差异,有些引进品种在我国许多地区表现出一些不尽人意的方面,因此有必要对匍匐翦股颖品种进行抗性改良。 1.再生体系和遗传转化研究 胚性愈伤组织是遗传工程最理想、最常用的受体之一,再生能力很强。目前已对许多禾本科草坪草的不同外植体进行了离体再生研究,但有关匍匐翦股颖蟒蛇(Viper)、潘娜4号(Penn-A-4)和普特(Putter)这3个品种的离体再生体系研究还未见有报道。本工作尝试从胚性愈伤组织诱导和植株再生两个方面对蟒蛇(Viper)、潘娜4号(Penn-A-4)和普特(Putter)3个匍匐翦股颖新品种进行胚性愈伤组织诱导、体细胞胚发生及植株再生研究,旨在为进一步利用现代遗传工程技术改良匍匐翦股颖品质、培育新品种提供实验基础。 本研究利用成熟种子作为外植体,分析了2,4-D对匍匐翦股颖胚性愈伤组织诱导与植株再生的影响,并对体细胞胚的发生过程进行了观察。实验结果表明,附加2.0mg/L 2,4-D、0.1mg/L 6-BA时胚性愈伤组织的诱导频率最高。随着2,4-D浓度的增加,愈伤组织的诱导和分化能力明显下降。在再生过程中采用1.0mg/L的6-BA达到了比较好的效果,大部分实验中愈伤组织的再生频率达到90%以上。同时发现适当提高肌醇浓度可以使苗长得较为粗壮。在实验中还对匍匐翦股颖的体细胞胚发生过程进行了观察,发现匍匐翦股颖的体细胞胚发生要经历球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚等不同阶段。 分别以0.6mol/L和0.4mol/L甘露醇高渗处理5小时和12个小时的匍匐翦股颖胚性愈伤组织为目标材料,利用PDS1000/He基因枪和根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404菌株进行遗传转化,目的基因为Na~+/H~+反向转运蛋白基因AtNHX1。所用质粒pHZX1由pBI121改造而来,克隆有拟南芥Na~+/H~+反向转运蛋白基因AtNHX1和选择标记基因nptⅡ,上游为CaMV35S启动子,下游为NOS终止子。将转化过的胚性愈伤组织转至附加100mg/L硫酸卡那霉素的培养基上进行分化,分别获得6株(基因枪法)和3株(农杆菌法)绿苗。对获得的绿苗进行PCR检测,发现分别有一株(基因枪法)和两株(农杆菌法)绿苗可以扩增出相应条带,初步鉴定为转基因植株。 2.Na~+/H~+反向转运蛋白基因序列的克隆与分析 Na~+/H~+反向转运蛋白与植物的耐盐性有密切的关系。在高等植物体内,液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白主要负责把Na~+区隔化至液泡中。植物的Na~+/H~+反向转运蛋白基因具有很高的保守性,根据已经报道的液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白基因的保守序列设计简并引物,可以从其它物种中分离同源基因。本工作首先提取翦股颖总RNA并反转录合成cDNA第一链,然后采用简并引物通过梯度PCR技术扩增出匍匐翦股颖液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白cDNA的中间序列,大小约300bp。中间序列经克隆、测序和Blast同源比对,发现与已知的液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白基因序列有很高的同源性,氨基酸序列的一致性最高达到88%,初步确定该序列为匍匐翦股颖液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白基因的中间片段。 进一步拟根据所获得的序列设计特异性引物,利用3′-RACE和5′-RACE得到cDNA全长序列,然后对其进行表达分析和功能验证。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S688.4

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 方智振;赖钟雄;赖呈纯;姜顺日;;龙眼体细胞胚发生中期的蛋白质组学研究[J];中国农业科学;2011年14期
2 由香玲;代金玲;谭啸;李永红;李忠良;王雪岩;刘培彬;王紫娟;孙正峰;詹亚光;;龙牙楤木体细胞胚发生及植株再生过程中主要药用成分的累积[J];中草药;2011年08期
3 王小治;王爱礼;王守红;赵海涛;单玉华;钱晓晴;封克;;污泥蚓粪对匍匐翦股颖草生长的影响[J];农业环境科学学报;2011年08期
4 孙爱花;黄天带;周权男;戴雪梅;李哲;;橡胶树内珠被培养[J];热带作物学报;2011年04期
5 韩乾;;小草也爱“健康”水[J];青少年科技博览;2011年Z2期
6 肖宇;张朝红;支玉玺;徐炎;李志谦;王跃进;;葡萄花器官体细胞胚的诱导和植株再生[J];果树学报;2011年05期
7 段瑞军;符少萍;王静;郭建春;胡新文;张鹏;李瑞梅;;木薯非胚性与胚性组织蛋白质双向电泳差异初步分析[J];热带作物学报;2011年04期
8 赖杭桂;李瑞梅;王静;符少萍;胡新文;张鹏;郭建春;;华南5号和华南6号木薯体胚发生过程中酯酶和淀粉酶同工酶分析[J];热带作物学报;2011年07期
9 李宁辉;徐鹏飞;范素杰;吴俊江;李文滨;王萍;王欣;姜良宇;王金生;张淑珍;;大豆品种合丰25体细胞胚发生条件的优化[J];作物杂志;2011年04期
10 王长粉;;园林植物在高尔夫球场不同区域的配置与选择[J];考试周刊;2011年56期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 关正君;尉亚辉;;樱桃番茄叶体细胞胚发生的组织细胞学观察[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
2 朱向涛;王雁;彭镇华;律春燕;郑宝强;;‘凤丹'体细胞胚发生技术研究[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 石雅丽;张锐;孙国清;孟志刚;周焘;郭三堆;;与棉花雄蕊发育相关的体细胞胚发生受体类激酶[A];中国棉花学会2010年年会论文汇编[C];2010年
4 何业华;马均;胡中沂;许文天;林顺权;曹莉;郭翠红;伍成厚;;菠萝体细胞胚发生相关类受体蛋白激酶基因的克隆[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
5 刘华英;萧浪涛;鲁旭东;胡家金;;柑橘体细胞胚发生中多胺水平的动态变化[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
6 葛晓霞;凡改恩;柴利军;郭文武;;伏令夏橙体细胞胚发生类受体蛋白激酶(SERK)基因克隆与表达分析(摘要)[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
7 王亚馥;崔凯荣;;小麦幼胚培养体细胞胚发生的超微结构研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
8 王江波;王毓美;贾敬芬;;海边香豌豆胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚发生[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
9 鲁旭东;萧浪涛;张雪芹;童建华;;内源激素与石刁柏体细胞胚发生的关系[A];2005年全国植物生长物质研讨会论文摘要汇编[C];2005年
10 李惠华;安娜;赖钟雄;;植物体细胞胚胎发生——Ⅱ.生理生化[A];第二届全国植物组织培养、脱毒快繁及工厂化生产学术研讨会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘永刚;匍匐翦股颖的特征及品种[N];中国绿色时报;2000年
2 重庆红鼎高尔夫球会 胡剑 田亚洲;重庆地区匍匐翦股颖越夏养护[N];中国花卉报;2009年
3 北京林业大学高尔夫教育与研究中心主任 韩烈保;不忍下杆的华彬高球场[N];中国花卉报;2008年
4 张稼;转基因草会不会破坏生物多样性[N];大众科技报;2006年
5 易楚;国际草坪生产者协会推选布瑞迪为年度创新人物[N];中国花卉报;2008年
6 北京林业大学高尔夫教育与研究中心主任 韩烈保;欧洲高球场“简单即美”[N];中国花卉报;2008年
7 北京林业大学高尔夫教育与研究中心主任 韩烈保;高球场植物的选择和配置[N];中国花卉报;2008年
8 厦门诚就高尔夫顾问管理有限公司 孙立举;我国南北方高球场建植与养护要点[N];中国花卉报;2009年
9 中国高尔夫协会场地管理委员会副主任 韩烈宝;植物选择与配置初探[N];中国花卉报;2007年
10 中国高尔夫协会场地管理委员会副主任 韩烈保;如诗如画的大连金石高球场[N];中国花卉报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 鲁旭东;石刁柏UC800体细胞胚发生系统的建立及其生理生化机理研究[D];湖南农业大学;2004年
2 刘华英;柑橘体细胞胚发生的细胞学及生理生化特性研究[D];湖南农业大学;2003年
3 王胜;不同草坪草及其根层土壤特性对盐胁迫的响应[D];北京林业大学;2012年
4 韩凝;植物螯合肽及植物螯合肽合成酶在植物镉耐性和积累中的作用机制研究[D];浙江大学;2005年
5 李海霞;匍匐翦股颖褐斑病预测模型的建立与评价[D];北京林业大学;2007年
6 杨玲;花楸种子生物学和体细胞胚发生体系研究[D];东北林业大学;2007年
7 王克臣;亚麻离体再生及早期体细胞胚胎发生机理的研究[D];东北农业大学;2008年
8 由翠荣;仙客来体细胞胚胎发生、发育及SERK基因在体细胞胚性转化过程的表达特性[D];中国海洋大学;2009年
9 石雅丽;棉花体细胞胚发生受体类激酶基因的克隆与功能分析[D];中国农业科学院;2011年
10 商海红;陆地棉体细胞胚胎发生的细胞学研究[D];中国农业科学院;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马祥;丁二醇对匍匐翦股颖抗病性的诱导及其作用机理的研究[D];甘肃农业大学;2011年
2 李晓东;茶树体细胞胚发生的影响因素及超微结构和几种内含物质变化的研究[D];山东农业大学;2010年
3 张荷芃;桃体细胞胚发生的观察和农杆菌介导法遗传转化体系的筛选[D];西北农林科技大学;2012年
4 房立翠;铺地竹中化感物质的分布及影响因素研究[D];安徽农业大学;2010年
5 曾泉;匍匐翦股颖离体再生体系的建立与遗传转化研究;匍匐翦股颖Na~+/H~+反向转运蛋白基因的克隆[D];西北大学;2007年
6 安惠惠;农杆菌介导的Lyz-GFP基因对匍匐翦股颖转化和表达的研究[D];甘肃农业大学;2011年
7 于得水;基于RAPD和SRAP标记的粤选系列匍匐翦股颖种质资源多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
8 张恒涛;无籽西瓜体细胞胚发生及其细胞学观察[D];河南农业大学;2004年
9 吕秀立;欧洲七叶树体细胞胚发生和植株再生研究[D];南京林业大学;2004年
10 敖清艳;新疆白鲜体细胞胚发生及其蛋白表达研究[D];石河子大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026