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《西北大学》 2009年
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铜绿假单胞菌群体感应抑制物筛选系统的构建及其应用

孙玮洁  
【摘要】: 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种重要的医院获得性机会致病菌,可以引起多种急性或慢性感染,对于免疫力低下或患有其他病症的患者具有严重的危害性,是医院间发生感染的第三大致病菌。由于它对于多种抗生素都具有高效耐药性,使其产生的感染难以被治愈。因此,铜绿假单胞菌致病性和耐药性的研究具有非常重要意义。 铜绿假单胞菌的致病性受到其群体感应系统(quorum sensing,QS)的调节。该系统是以扩散性小分子为信号物质,依据菌群密度来调控个体基因表达的一种重要而全面的调控机制。其调控范围涵盖了细胞毒素、致病因子、生物被膜等一系列细菌特征性表型[Gonzalez Keshavan,2006]。PA的群体感应系统对其致病过程起着关键性作用,因此通过抑制QS系统来控制PA致病性的研究具有广阔的发展前景[Williams,2002]。 本研究利用铜绿假单胞菌群体感应系统中的lasI基因和一个受QS系统调节的致病相关基因rhlA的启动子域作为报道基因的启动子[Ochsner Reiser,1995],选取了果聚糖转移酶基因(sacB)作为报道子[Quenee,et al.,2005],通过PCR、DNA的酶切及连接等基因工程手段构建了针对铜绿假单胞菌群体感应系统的小分子抑制物筛选体系。并利用构建好的筛选体系,对几十种中药水粗提浓缩物进行筛选,发现了一种爵床科植物、一种败酱科植物和一种萝藦科植物的提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统具有抑制作用。 这三种抑制物的发现证明了该体系可以高灵敏度、低背景、高通量地进行检测,为进一步从中药及其他天然成分中寻找抗致病药物的先导化合物和研究开发新型抗致病药物,提供了一个可行性的技术平台。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R378

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