收藏本站
《西北大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

腺病毒介导ChM-I基因抑制BMSCs体内构建的软骨血管化的实验研究

魏菁  
【摘要】: 研究背景: 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是软骨组织工程中倍受关注的种子细胞,具有很高的研究意义和广泛的应用前景。但应用BMSCs构建的软骨组织经体内长期移植后,会发生一系列表型不稳定现象,比如丧失表达Ⅱ型胶原的能力,这些严重地影响利用BMSCs进行软骨缺损的长期修复效果。这一系列表型变化现象类似于软骨内骨化的发生过程,即软骨组织先出现肥大、钙化现象,并伴随有血管的侵入,随着体内移植时间的增长血管化程度逐渐增加,渐渐矿化形成骨组织。该过程中血管化的侵入是诱导软骨向骨转变的关键步骤。然而正常的软骨组织在促血管发生的微环境中,仍可持续保持无血管的状态及稳定的软骨表型,经研究发现,其中存在的一种特异性的生长因子——软骨调节素-1(Chondromodulin-I, ChM-I),具有强效的抑制血管发生的功能。我们推测BMSCs在分化为软骨的过程中ChM-I不表达或者表达很低,从而才会导致血管侵入、软骨表型丢失现象的发生。目前,对BMSCs及其分化形成的软骨中ChM-Ⅰ是否表达尚无文献报道。因此,我们从ChM-I基因在BMSCs和软骨细胞中是否存在表达差异出发,研究ChM-I对BMSCs体内构建的软骨血管化的抑制作用,分析其在软骨表型丢失过程的影响。 实验目的: 观察软骨细胞对BMSCs体内构建软骨的血管化的抑制作用,对比抗血管生成因子ChM-I的基因在两种细胞间的表达差异,并探讨ChM-I抑制BMSCs体内构建软骨血管化的作用,为改善和提高BMSCs来源的软骨组织的表型稳定性提供新的思路。 实验方法和结果: 1. BMSCs与软骨细胞以不同比例(3:1,1:1,1:3)混合,接种至珊瑚材料上,移植到裸鼠皮下,同时分别以单纯BMSCs和软骨细胞为阴性和阳性对照组,体内培养1-2个月后,观察构建的组织工程软骨的血管化程度,并分析抗血管生成因子ChM-I在不同组中的表达分布。大体观察和组织学结果可见,单纯BMSCs构成的组织中血管化程度很高,而且有少量成骨出现。相反,含有软骨细胞的各实验组均可形成血管化程度极低的软骨组织,在软骨细胞含量很少(25%)时也可保持很低的血管化水平。免疫荧光结果显示,ChM-I在阳性对照组及各个实验组都有不同程度的表达分布,而单纯BMSCs构成的组织中没有。 2.用RT-PCR的方法比较ChM-I基因在BMSCs和关节软骨细胞之间的表达差异。结果显示ChM-I在BMSCs中几乎不表达,此外,两种细胞之间Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达也存在显著的差异。 3.获得兔ChM-I基因克隆,构建重组腺病毒Ad5-ChM-I。用RT-PCR的方法从兔的关节软骨组织中获得了ChM-I基因克隆,通过测序验证了其正确性,并成功的构建了高滴度的重组腺病毒Ad5-ChM-I。 4.转染重组腺病毒Ad5-ChM-I的BMSCs与珊瑚材料复合物移植到裸鼠皮下1-2个月后,观察体内构建的软骨组织的血管化的程度,分析软骨表型的变化。大体观察和组织学结果可见,转染Ad5-ChM-I的BMSCs在体内形成的软骨组织的血管化程度很低,免疫荧光结果显示,ChM-I在转染后的BMSCs形成的组织中有一定的表达分布。 结论: 研究结果表明,ChM-I基因在BMSCs和软骨细胞中确实存在显著的表达差异,BMSCs中几乎不表达ChM-I,软骨细胞及其特异性表达的ChM-I均可以抑制BMSCs体内构建的软骨组织的血管化发生,阻止其向骨的表型发生转变,在一定程度上稳定了软骨表型。因此,我们可以将腺病毒介导的ChM-I基因修饰的BMSCs作为新型的种子细胞,用于构建稳定的无血管侵入的组织工程软骨,或者用于软骨缺损修复之中,达到长期的治疗效果。
【学位授予单位】:西北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R329

手机知网App
【共引文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 周炜;GIT1对骨折愈合中软骨细胞分化的影响[D];南京医科大学;2011年
2 周连仲;稳定表达软骨调节素Ⅰ的大鼠MSCs细胞株的建立[D];大连医科大学;2011年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡汝麒,潘功平,沈跃良,徐延德,周健生,陈晓东,刘振华,刘宗昭;血管化的自体骨移植术在骨科临床上应用(附208例报道)[J];蚌埠医学院学报;1992年04期
2 孙兆黎,孙秀兰,冯畹兰,张海玉,董春钰,赵福谭;UV-B照射的皮肤异种、同种、自体移植后存活及血管化研究[J];基础医学与临床;1997年03期
3 王健华,王玉兰;髂骨血管化带“窗口”移植修复下颌骨缺损的护理[J];护理学杂志;1999年01期
4 杨志明,樊征夫,解慧琪,秦廷武,彭文珍;组织工程化人工骨血管化研究[J];中华显微外科杂志;2002年02期
5 潘瑾,张益,毛驰,俞光岩;下颌骨缺损血管化腓骨瓣移植术后骨高度变化规律[J];中华口腔医学杂志;2004年06期
6 连青萍,归庆园;舌癌切除后血管化前臂皮瓣移植的手术配合[J];现代中西医结合杂志;2005年04期
7 张健;胡敏;韩志伟;张文怡;;成骨细胞与血管内皮细胞联合培养复合肌瓣预构血管化骨的初步研究[J];口腔医学研究;2006年06期
8 汪道新;张灵;范锟铻;杨维琦;李伟萍;张力勇;王峰;;人脐静脉血管内皮细胞移植对脱细胞猪真皮早期血管化的影响[J];临床和实验医学杂志;2007年04期
9 樊建中;孔祥泉;史河水;徐海波;刘定西;;羟基磷灰石眼眶植入物纤维血管化进程的MRI研究[J];临床放射学杂志;2007年06期
10 简月奎;田晓滨;李波;周焯家;赵伟峰;张一;杨震;王远政;;异种脱蛋白骨复合物修复大段骨缺损的血管化观察(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年23期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 樊建中;孔祥泉;史河水;徐海波;刘定西;;兔眼眶植入羟基磷灰石义眼台血管化的MRI研究[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编(下册)[C];2006年
2 乔亮;陆树良;王志勇;韦俊;原博;金曙雯;花兰女;廖镇江;史济湘;;糖尿病大鼠深二度烫伤创面血管化研究[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
3 郑杰;吴烨;黄文秀;牛刚;;血管化骨肌皮瓣修复上下颌骨缺损的临床研究[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年
4 任天斌;宋莹;曹春红;王安;冯玥;;复合结构血管化组织工程支架[A];2009年全国高分子学术论文报告会论文摘要集(下册)[C];2009年
5 简月奎;田晓滨;;不同方法显像骨组织微血管的对比研究[A];2009“泰山杯”全国骨科青年科技创新论坛暨优秀论文评选论文选集[C];2009年
6 简月奎;田晓滨;;不同方法显像骨组织微血管的对比研究[A];第18届中国康协肢残康复学术年会论文选集[C];2009年
7 余国荣;胡祥;陶圣祥;刘兴邦;;封闭负压引流对创面血管化的影响[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
8 林才;乔亮;张鹏;陈更新;徐建军;杨宁;陆树良;;糖尿病足溃疡创面血管化程度和促血管化生长因子表达变化及其机制探讨[A];第五届全国烧伤救治专题研讨会烧伤后脏器损害的临床救治论文汇编[C];2007年
9 尹英;;血管化腓骨肌皮瓣移植修复下颌骨缺损15例的护理[A];全国口腔科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2008年
10 韩春茂;石海飞;王新刚;毛峥伟;高长有;;复合血管生成素的人工真皮的构建及其血管化研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 夏;Visudyne可治隐蔽性AMD[N];医药经济报;2001年
2 潘锋;心肌组织工程研究日新月异[N];中国医药报;2006年
3 徐峰;肿瘤与血管生成息息相关[N];医药经济报;2001年
4 何烨;羊膜:新型生物医学材料[N];健康报;2007年
5 陈祖亮;修复颌骨缺损如正常人[N];健康报;2005年
6 张荔子 陈祖亮;高科技助推口腔医学发展[N];健康报;2005年
7 本报记者 张丽军 通讯员 孙理 李晓丽;为病人重塑生存信心[N];保健时报;2004年
8 张献怀;我国探明椎间盘源性下腰痛发病机制[N];中国医药报;2005年
9 春;Visudyne治疗典型性AMD[N];医药经济报;2001年
10 张献怀;亚甲蓝治椎间盘源性下腰痛有效[N];健康报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王翔;应用自体肋骨异位预构血管化下颌骨的实验研究[D];武汉大学;2013年
2 郑玉蓉;胶原/壳聚糖—明胶微球支架缓释三七皂甙Rg1促血管化研究[D];浙江大学;2014年
3 张蓉;基于细胞膜片技术构建血管化组织工程骨的实验研究[D];第四军医大学;2012年
4 刘新晖;纳米级细胞型组织工程骨的构建及其血管化的实验研究[D];苏州大学;2004年
5 孙自玲;多孔丝素蛋白膜材料的血管化进程研究[D];苏州大学;2010年
6 吴仕和;肝组织工程血管化基础研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
7 关国平;多孔丝素蛋白材料的血管化及其组织再生性能的研究[D];苏州大学;2009年
8 杨家骥;人脐静脉内皮细胞构建血管化组织工程真皮的研究[D];第四军医大学;2008年
9 董宝军;组织工程化心肌的构建及其相关基础研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
10 汪群力;成年恒河猴体内异位构建血管化组织工程骨的实验研究[D];第一军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 伍舟宏;一个血管化肿瘤化疗模型的分析[D];东华大学;2005年
2 冯玉霞;基于兔骨髓间充质干细胞构建预血管化细胞膜片的体外研究[D];兰州大学;2014年
3 桑力;多孔磷酸钙陶瓷支架血管植入复合体的血管化与生物力学性能的研究[D];西南交通大学;2013年
4 王文娟;兔眶内植入三种不同义眼座血管化的SPECT和组织病理学观察[D];江西医学院;2003年
5 曲哲;血管化人工骨的体外构建和应用基础研究[D];吉林大学;2004年
6 石海飞;血管生成素促进组织工程真皮支架血管化的研究[D];浙江大学;2005年
7 谢彧洋;微囊化稳定表达人血管内皮生长因子细胞株的构建[D];吉林大学;2006年
8 王炜;带蒂筋膜瓣包裹组织工程骨血管化的实验研究[D];新疆医科大学;2011年
9 李受益;双因子诱导骨组织工程支架快速血管化的动物实验研究[D];天津医科大学;2013年
10 胡学峰;生物陶瓷人工骨血管化的探索[D];第四军医大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026