黑果枸杞内生真菌R43的次生代谢产物的研究

【摘要】：内生真菌是指那些在其生活史的部分或全部时期生活在健康植物的组织或器官内,对宿主植物没有引起明显病害的一类真菌。近几年的研究表明,内生真菌种类丰富,其次生代谢产物多种多样。目前内生真菌被认为是产生天然抗菌剂、抗肿瘤药物、抗氧化剂等活性物质的重要来源。本文以分离自生长在极端条件下的藏药黑果枸杞根部的内生真菌R43为研究对象。对R43菌株进行ITS序列测定并结合形态学特征的鉴定方法,最终确定R43菌株为塔宾曲霉Aspergillus tubingensis。对R43菌株采用大米固体培养基进行发酵,其阴干后的发酵物分别用乙酸乙酯和甲醇进行提取,得到其代谢产物粗浸膏。采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等色谱技术,结合重结晶等纯化方法,共分离得到10个化合物。对所得的化合物进行理化性质分析,借助核磁共振以及高分辨质谱等光谱分析手段,确定了化合物的分子结构,10个化合物分别是:二十六烷酸(1),麦角甾醇(2),6-异戊酰基-4-甲氧基-2-吡喃酮(3),rubrofusarin B(4),asperpyrones A(5),2,5-二羟基-苯乙酸(6),campyrone A(7),丁二酸(8),胡萝卜苷(9),甘露醇(10),其中化合物3为新化合物,化合物6为首次从真菌发酵产物中分离得到。用4株细菌和4株植物病原真菌作为测试菌,对10个化合物分别进行了抑菌活性测试,其中化合物4对大肠杆菌有强的抑制活性,其最小抑菌浓度(MIC)为1.95μg/m L,可作为大肠杆菌抑制剂被进一步开发研究。对10个化合物进行抗氧化活性实验研究,结果表明:化合物6具有强的抗氧化性,对DPPH自由基清除能力比维生素C的清除能力强,其IC50为2.64μg/m L。本课题丰富和完善了黑果枸杞内生真菌的研究,为进一步开发和利用黑果枸杞内生真菌这一资源提供了理论支持。