收藏本站
《西北农林科技大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1转录因子基因(WRKY)表达与功能研究

李慧娥  
【摘要】:植物抗病反应被多种信号途径所调控,抗病基因激活表达是植物对多种病原菌产生响应至关重要的部分。WRKY转录因子是主要参与免疫反应转录调控大基因家族。世界葡萄生产中主栽品种欧洲葡萄(Vitis vinifera)大多不抗病,中国原产野生葡萄抗病性好,但其果实品质不及欧洲葡萄。为有效利用中国野生葡萄抗病相关基因改良欧洲葡萄抗病性,本研究从中国野生华东葡萄高抗白粉病株系白河-35-1中分离获得两个WRKY转录因子基因,并对其表达及功能进行了研究,主要取得以下结果: 1、采用RACE技术对中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1叶片文库两个推定WRKY ESTs进行全长克隆,并命名为中国野生华东葡萄高抗白粉病株系白河-35-1转录因子基因VpWRKY1和VpWRKY2。其中,VpWRKY1 mRNA全长1157bp,开放阅读框969bp,编码322个AA,GenBank登录号为:GQ884198。VpWRKY2 mRNA全长1607bp,开放阅读框为1500bp,编码499个AA,GenBank登录号为GU565706。氨基酸序列同源性分析结果表明,VpWRKY1、VpWRKY2分属于WRKY大家族第III、I类。 2、采用实时荧光定量PCR技术分析VpWRKY1和VpWRKY2在11个葡萄种质(中国野生华东葡萄抗白粉病株系抗病株系‘白河-35-1’、‘白河-13’、‘白河-13-1’、‘广西-1’与感病株系‘白河-35-2’、‘广西-2’、‘商南-2’、‘湖南-1’,感病的欧洲葡萄品种佳利酿及其中国野葡萄华东葡萄抗白粉病株系‘白河-35-1’和感病的欧洲葡萄品种佳利酿杂交F1代抗病和感病代表植株‘6-12-6’和‘6-12-2’)叶片中受白粉菌诱导的表达。结果表明,VpWRKY1和VpWRKY2在这11个葡萄种质叶片中都受白粉菌诱导先上调表达,再回到原始水平,上调表达最大值出现在接种后12h。此外,VpWRKY1表达在白河-35-1中被抗病信号分子SA诱导,而VpWRKY2则被三种抗病信号分子SA、JA和Eth诱导。半定量PCR分析VpWRKY1和VpWRKY2在中国野葡萄华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1组织特异性表达结果表明,VpWRKY1在根中几乎不表达,在茎中表达最强,叶片和卷须次之。VpWRKY2在茎中表达最强,叶片中表达次之,在根和卷须中表达最弱。 3、采用基因枪介导的瞬时转化技术检测VpWRKY1和VpWRKY2在洋葱表皮细胞内定位。结果表明,这两个转录因子都定位在核内。此外,酵母单杂交和瞬时共表达研究结果证实,VpWRKY1在酵母菌株AH109及中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1叶片中都具有转录激活活性,而VpWRKY2仅在白河-35-1叶片中有转录激活活性。 4、采用农杆菌介导的花序浸沾法获得转化VpWRKY1和VpWRKY2基因拟南芥株系,进一步分析结果表明,转基因株系对白粉病抵抗力增强。此外,转化VpWRKY2基因拟南芥幼苗对烟草疫霉菌抵抗提高,但转化VpWRKY1基因拟南芥幼苗对烟草疫霉病抗性未发生变化。 5、实时荧光定量PCR检测转基因拟南芥株系中抗病相关基因AtPR1、AtPR10、AtNPR1、AtCOR1和AtPDF1.2表达结果表明,多数抗病相关基因在转基因株系中的表达发生变化。同时,葡萄抗病相关基因VpPR1、VpPR10及VvNPR1的表达在瞬时转化VpWRKY1和VpWRKY2的中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1组培苗叶片中也显著发生变化。说明抗病基因表达可能受VpWRKY1和VpWRKY2调控。 6、采用同源序列法设计引物克隆获得VpWRKY1和VpWRKY2基因启动子PvpWRKY1和PvpWRKY2。PvpWRKY1长694bp,GenBank登录号为GU565705。PvpWRKY2长643bp,GenBank登录号为HQ174899。在瞬时转化的中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1组培苗叶片中,PvpWRKY1::GUS和PvpWRKY2::GUS融合蛋白的表达被葡萄白粉菌诱导上调,属病原菌诱导型启动子。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S663.1

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈霞;罗世巧;段翠芳;曾日中;;高等植物转录因子研究进展[J];安徽农学通报;2008年09期
2 张艳艳;张剑侠;王跃进;;中国野生葡萄抗霜霉病基因RAPD标记的筛选[J];果树学报;2008年06期
3 朱自果;王跃进;史江莉;王沛雅;张朝红;;华东葡萄抗白粉病杂种后代cDNA文库的构建及EST序列分析[J];果树学报;2009年02期
4 张剑侠;王跃进;张艳艳;周邦军;;中国野生葡萄抗黑痘病基因RAPD标记的克隆、序列分析及辅助育种应用[J];果树学报;2009年04期
5 罗国光;;中国葡萄产业面临的历史任务:加快由数量型向质量型转变[J];果树学报;2010年03期
6 陈清;汤浩茹;董晓莉;侯艳霞;罗娅;蒋艳;黄琼瑶;;植物Myb转录因子的研究进展[J];基因组学与应用生物学;2009年02期
7 黄吉祥;任丽平;曹明富;;植物抗胁迫类转录因子研究进展[J];杭州师范学院学报(自然科学版);2008年01期
8 ;Cloning and analysis of expression profile of 13 WRKY genes in rice[J];Chinese Science Bulletin;2004年20期
9 ;Overexpression of the stress-induced OsWRKY08 improves osmotic stress tolerance in Arabidopsis[J];Chinese Science Bulletin;2009年24期
10 刘强,张贵友,陈受宜;植物转录因子的结构与调控作用[J];科学通报;2000年14期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 万怡震;中国葡萄属野生种抗病性及抗病基因RAPD标记作图研究[D];西北农林科技大学;2003年
2 张剑侠;中国野生葡萄抗病基因标记及辅助育种应用研究[D];西北农林科技大学;2006年
3 徐炎;中国原产华东葡萄抗白粉病基因cDNA文库构建及其EST序列分析[D];西北农林科技大学;2006年
4 邱德运;水稻WRKY转录因子OsWRKY13的功能鉴定和调控机理研究[D];华中农业大学;2007年
5 王育娜;辣椒WRKY转录因子cDNA的分离与功能鉴定[D];福建农林大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 闫清华;杨理;邵强;;抗冻蛋白及其在食品领域中的应用[J];山东农业科学;2010年11期
2 葛宝宇;林轶;侯和胜;;ERF类转录因子的结构与功能[J];安徽农学通报;2007年20期
3 陈霞;罗世巧;段翠芳;曾日中;;高等植物转录因子研究进展[J];安徽农学通报;2008年09期
4 陈哲;孔祥翔;张斐斐;龚明;;植物抗逆性基因工程研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
5 张毅,汪秀峰,李莉,倪大虎,陈亚琳;农杆菌介导水稻幼胚转化体系的建立[J];安徽农业科学;2004年04期
6 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
7 许本波;殷家明;谢伶俐;李加纳;柴友荣;;共培养基对甘蓝型油菜下胚轴GUS瞬间表达及转化效率的影响[J];安徽农业科学;2007年25期
8 张新杰;王记侠;任玉华;何维华;;葡萄砧木特性及其对嫁接品种的影响[J];安徽农业科学;2007年31期
9 王登瞻;季勤;陈莱鹏;陈敏;;甘薯贮藏蛋白A基因5′端序列的克隆与分析[J];安徽农业科学;2008年18期
10 徐岩;肖艳双;杜金霞;汪洪;郑伟;李营;庞实锋;;农杆菌介导油菜油体基因与碱性成纤维细胞生长因子融合基因转化油菜研究[J];安徽农业科学;2009年27期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨星星;曾建国;熊兴耀;;葡萄属植物中芪类化合物的研究进展[A];园艺学文集5[C];2010年
2 李利斌;李化银;刘立峰;高建伟;;两个大白菜DREB2A基因的基因组解析[A];山东园艺学会第七次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2011年
3 翟红;刘庆昌;;甘薯及其近缘野生种遗传转化的研究[A];作物科学研究理论与实践——'2000作物科学学术研讨会文集[C];2001年
4 ;Heat-inducible Expression of β-glucuronidase Gene in Tobacco[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
5 王巧燕;陈明;邱志刚;程宪国;徐兆师;李连城;马有志;;一个新的编码大豆DREB转录因子基因的克隆及鉴定[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(二)[C];2005年
6 张凤兰;;白菜根癌农杆菌介导法基因转化体系的建立[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
7 徐丽;张胜利;张建;陈颖;王兴智;朱筱娟;梁秀梅;;番茄抗黄瓜花叶病毒病基因转移的研究[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
8 石雪晖;熊兴耀;王先荣;刘昆玉;钟晓红;杨国顺;;我省红地球葡萄无花序的原因与预防措施[A];园艺学文集——湖南省园艺学会第八次会员代表大会暨学术年会论文集[C];2005年
9 张文娥;潘学军;王飞;王跃进;;DNA分子标记技术在葡萄遗传育种中的应用[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
10 田义;丛佩华;康国栋;杨振英;张利义;;苹果果实着色的研究进展[A];2008园艺学进展(第八辑)——中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高轩;小麦抗冻蛋白基因的分离与遗传转化研究[D];华中科技大学;2010年
2 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
3 李望丰;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[D];东北师范大学;2010年
4 吕建;小麦渐渗系山融3号MYB基因家族对非生物胁迫的响应及Tamyb31基因功能研究[D];山东大学;2010年
5 韩莹琰;白菜花粉发育相关的C2H2型锌指蛋白新基因BcMF20的克隆与功能验证[D];浙江大学;2011年
6 牛姗姗;MYB对杨梅果实花青素苷合成的调控及其机制[D];浙江大学;2011年
7 王猛;马尾松抑制消减文库的构建及抗病性相关基因的克隆[D];中南林业科技大学;2010年
8 杨艳丽;外源茉莉酸影响马铃薯对晚疫病抗性的初步研究[D];湖南农业大学;2010年
9 陈少瑜;丽江云杉体胚发生体系优化及体胚发育过程蛋白质组分析[D];云南大学;2010年
10 曾兴权;小麦抗条锈病种质的鉴定及其抗性相关基因的差异表达和克隆[D];西北农林科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张月兴;利用基因芯片解析金柑和纽荷尔应答溃疡病的转录差异[D];华中农业大学;2010年
2 曹银川;柑橘NAC转录因子的克隆与表达分析[D];华中农业大学;2010年
3 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
4 闫恒超;棉花纤维发育伸长期和次生壁加厚期数字表达谱分析[D];华中农业大学;2010年
5 朱冬梅;盐碱胁迫下星星草(Puccinellia tenuiflora)根部转录应答的初步分析[D];哈尔滨师范大学;2010年
6 黄聪;花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
7 柴凌燕;植物角质膜蜡质转录因子基因SHN1/WIN1的表达载体构建[D];郑州大学;2010年
8 郭若玉;棉花GhWRKY3基因的分离及其表达特性分析[D];山东农业大学;2010年
9 李清清;苹果中六个胁迫相关的转录因子表达特性及与醇酰基转移酶基因表达相关性分析[D];山东农业大学;2010年
10 柳宾;棉花早熟性、产量和纤维品质性状的遗传分析和QTL定位[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘会宁;葡萄白粉病的发生及防治[J];北方果树;1999年02期
2 刘戈宇;胡鸢雷;赵锋;祝建波;林忠平;;厚叶悬蒴苣苔BcWRKY1转录因子基因的克隆及初步的功能分析[J];北京大学学报(自然科学版);2007年04期
3 刘会宁,李华;欧亚种葡萄对白粉病与霜霉病的抗性研究[J];东北农业大学学报;2004年03期
4 张玉秀,张延红,高华,柴团耀;菜豆泛肽基因在生物和非生物胁迫下的表达[J];西北植物学报;2002年03期
5 徐伟荣,王跃进,王西平,郝炜,孙马;中国葡萄属野生种抗白粉病抗逆基因植物表达载体的构建[J];西北植物学报;2005年05期
6 郭海江;王跃进;张剑侠;潘学军;唐冬梅;田莉莉;;葡萄抗病无核胚挽救育种及分子标记辅助选择[J];西北植物学报;2005年12期
7 李华,张振文;欧亚种葡萄白粉病微效抗病基因原取代积累[J];西北植物学报;1995年02期
8 胡宗利;陈国平;王中康;彭国雄;殷幼平;蔡绍皙;夏玉先;;绿僵菌NTL基因上游调控序列的克隆及分析[J];重庆大学学报(自然科学版);2006年04期
9 雷志华;陈军营;陈新建;;钙依赖蛋白激酶(CDPKs)在植物钙信号转导中的生理功能[J];福建林业科技;2007年03期
10 陈桂信,潘东明,吕柳新,王凤华,赖钟雄;果树核DNA提取、目的基因分离与克隆技术研究进展[J];福建农林大学学报(自然科学版);2002年01期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 王跃进;潘学军;张剑侠;骆强伟;唐冬梅;;抗病无核葡萄胚挽救育种研究[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 万怡震;中国葡萄属野生种抗病性及抗病基因RAPD标记作图研究[D];西北农林科技大学;2003年
2 张今今;中国葡萄属野生种抗白粉病基因cDNA克隆及序列分析[D];西北农林科技大学;2003年
3 任茂智;棉花nodulin-like和arf1基因及其启动子的分离和功能分析[D];中国农业科学院;2004年
4 王西平;中国葡萄属野生种抗白粉病基因克隆与序列分析[D];西北农林科技大学;2004年
5 潘学军;无核抗病葡萄胚挽救技术体系优化及新品系培育[D];西北农林科技大学;2005年
6 张剑侠;中国野生葡萄抗病基因标记及辅助育种应用研究[D];西北农林科技大学;2006年
7 徐炎;中国原产华东葡萄抗白粉病基因cDNA文库构建及其EST序列分析[D];西北农林科技大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 熊敏;水稻抗病相关基因的遗传定位和分离克隆[D];华中农业大学;2002年
2 杨进孝;中国葡萄属野生种抗白粉病相关基因克隆及生物信息学分析[D];西北农林科技大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;西安市葡萄研究所[J];中国新技术新产品;2007年12期
2 巩其耀;;我省初步选出了十个葡萄新品种——苹果、葡萄品种评比会议侧记[J];山西农业科学;1962年09期
3 吴柏娇;介绍几种葡萄品种及其栽培[J];福建农业科技;1985年01期
4 T、SANO;I、UYEDA;E、SHIKATA;T、MESHI;T、OHNO;Y、OKADA;曲存英;;由葡萄分离出的一种类似病毒(Viroid-Like)RNA与酒麻花矮化类病毒(HSV)具有高度的同源关联[J];中外葡萄与葡萄酒;1987年03期
5 董启风;;磷脂在葡萄品种抗寒性上的作用[J];中国果树;1988年04期
6 赵凤坡;丁国民;;几个葡萄品种生物学零度与花期预报的研究[J];中外葡萄与葡萄酒;1993年02期
7 翟衡;法国葡萄主产区葡萄品种酒种区域化特性研究之八:罗纳河地区的葡萄品种与酒种[J];酿酒科技;1995年01期
8 饶璐;;葡萄生物消籽技术[J];农家之友;1995年03期
9 蒋飞荣;晚熟耐贮运葡萄品种——红地球[J];中外葡萄与葡萄酒;1998年02期
10 孙绍宾;极品葡萄品种——红贵族[J];农技服务;1999年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 石雪晖;杨国顺;钟晓红;刘昆玉;熊兴耀;倪建军;王先荣;;湖南省葡萄产业发展历程与趋势[A];园艺学文集5[C];2010年
2 蔡建波;张夏兰;李兴红;刘正坪;尚巧霞;魏艳敏;;葡萄酸腐菌sf-19菌株致病性及其相关酶活性的测定[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
3 卓娜;王国平;邓从良;王琳;洪霓;;引起葡萄斑点病的病毒及类病毒分子检测[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
4 徐小菊;陈青英;;葡萄双层覆膜大棚栽培研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
5 李兴明;;葡萄大棚保护地栽培[A];云南省作物学会2000—2003年优秀论文选集[C];2004年
6 王同坤;于凤鸣;郭紫娟;张海斌;李红星;;葡萄品种过氧化物酶同工酶分析[A];中国科学技术协会第二届青年学术年会园艺学论文集[C];1995年
7 夏琼;单传伦;邵和益;蔡宏凌;朱华丽;;5个早熟葡萄品种筛选试验[A];首届长三角园艺论坛论文集[C];2007年
8 郭磊;上官凌飞;于华平;李晓颖;宋长年;房经贵;;葡萄EST-SSRs标记的开发及其在品种遗传多样性分析中的应用[A];中国园艺学会2010年学术年会论文摘要集[C];2010年
9 施安华;;保加利亚葡萄品种在河北省各地的适应情况[A];河北省果树学会论文选编(1962)[C];1962年
10 杨国慧;高庆玉;张延文;;葡萄的无籽化处理[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴子新;“葡萄代表”周传能[N];农民日报;2010年
2 撰稿 杨颖慧;小小葡萄成为武原农户“致富果”[N];嘉兴日报;2010年
3 章文;美国王牌葡萄品种“克伦生”落户中国[N];国际商报;2004年
4 袁志云;葡萄品种改良嫁接快[N];山西科技报;2003年
5 ;同大镇全力打造“安徽葡萄第一镇”[N];巢湖日报;2010年
6 本报记者 冯革才 刘凯;老产业焕发新活力[N];运城日报;2011年
7 本报记者 张会斌;更新葡萄品种应慎重[N];辽宁日报;2001年
8 杨文涛;葡萄品种多 引种要辨别[N];河南科技报;2009年
9 吉宣;小葡萄大产业[N];江西日报;2010年
10 徐淑霞 毕京梅;葡萄亩产到万元[N];东营日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李坤;葡萄连作障碍机理及调控途径的研究[D];沈阳农业大学;2010年
2 李慧娥;中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1转录因子基因(WRKY)表达与功能研究[D];西北农林科技大学;2010年
3 桑春果;人工接种白粉菌诱导的葡萄抗白粉病相关基因的表达研究[D];西北农林科技大学;2010年
4 吕秀兰;葡萄品种遗传多样性和霜霉病抗性鉴定的生化与分子生物学研究[D];四川农业大学;2005年
5 刘怀锋;葡萄果实糖酸构成特点、遗传规律及庶糖与相关代谢酶关系的研究[D];中国农业大学;2005年
6 邵小杰;葡萄根系和叶片对氯化镉处理的生理学与细胞学响应[D];山东农业大学;2009年
7 贺明阳;中国野生葡萄芪合成酶和病程相关蛋白PR10基因克隆与功能分析[D];西北农林科技大学;2012年
8 周会玲;葡萄果实耐贮性的比较生物学研究[D];西北农林科技大学;2006年
9 金燕;基于神经网络和机器视觉的南方葡萄专家系统研究[D];湖南农业大学;2009年
10 谭伟;乙羧氟草醚和乙草胺对葡萄的危害原因探究[D];山东农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 关心;中国野生华东葡萄新基因乙二醛氧化酶基因遗传转化部分葡萄的研究[D];西北农林科技大学;2010年
2 赵莘;中国野生华东葡萄抗白粉病基因(VpUSP)克隆及表达分析[D];西北农林科技大学;2010年
3 党伟;葡萄枝条营养水平及内源激素变化对越冬抗寒性的影响[D];河北农业大学;2011年
4 周丽娜;张宣葡萄产区硒元素生物地球化学特征研究[D];河北农业大学;2010年
5 郑秋玲;温度胁迫对葡萄生长的影响及叶面肥喷布效应[D];山东农业大学;2010年
6 王探魁;河北葡萄主产区土壤与树体养分特征研究[D];河北农业大学;2011年
7 池致超;气体ClO_2对葡萄致腐菌的杀菌及保鲜效果研究[D];中北大学;2010年
8 焦奎宝;葡萄根系抗寒性的研究[D];东北农业大学;2010年
9 魏华;缓释杀菌保鲜包装薄膜的研究[D];北京印刷学院;2010年
10 吴曼颖;腺枝葡萄EST-SSR标记及亲缘关系研究[D];湖南农业大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026