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《西北农林科技大学》 2011年
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茉莉酸甲酯处理雷公藤悬浮细胞的基因差异表达分析

杨艳  
【摘要】:雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)作为一种具有很好应用和开发前景的农用资源植物,其市场需求日益加大。为利用现代生物技术调控雷公藤次生代谢产物生物碱的生物合成提供依据,本文以茉莉酸甲酯(MeJA)为诱导子,采用继代3周的雷公藤悬浮细胞为材料,通过cDNA-AFLP技术分析了MeJA诱导处理前后雷公藤悬浮细胞中差异基因的表达情况,主要得到了以下结论: 1 MeJA在50μM至400μM浓度范围内对雷公藤总生物碱含量的积累呈抑制作用。未用MeJA处理的悬浮细胞中总生物碱的含量达到了624.13μg·g~(-1) ,而不同浓度MeJA处理对总生物碱的积累影响不同,其中200μM浓度处理下总碱的含量略高于其他处理浓度,为478.76μg·g~(-1),仍然低于未用MeJA处理的。 2通过优化RNA的提取、酶切、连接、预扩增和选择性扩增等步骤,建立了适宜MeJA诱导下雷公藤悬浮细胞差异基因表达的cDNA-AFLP体系。 3利用64对AFLP扩增引物对处理和对照的cDNA进行AFLP分析和Blastn生物信息比对,共筛选到19条明显差异表达的cDNA片段。其中有7条找到同源序列,这些基因可能参与了细胞中的信号转导,转录调控和能量代谢等。12条未在数据库中找到同源信息,推测为未知基因,有待进一步验证。 4在比对出的7条TDFs中,A2T4C4片段与MYB蛋白基因同源(Blastn比对结果为100%)。MYB蛋白做为一类转录因子组成的一部分,对揭示次生代谢物转录调节机制有重要意义,推测MYB基因可能参与了茉莉酸甲酯调控的雷公藤悬浮细胞次生代谢物质的合成。对此,有待于获得A2T4C4片段其全长序列,并转入雷公藤悬浮细胞培养体系,在雷公藤悬浮细胞中做转化验证。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S567.19

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