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《西北农林科技大学》 2011年
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苹果APX和GLDH转化兰州百合及兰州百合抗旱性研究

师守国  
【摘要】:兰州百合(Lilium davidii var. unicolor)是百合科百合属川百合一个变种,是我国特有的一种百合,集食用、药用和观赏于一身,同时也是我国栽培面积最大的百合。目前关于兰州百合遗传转化方面的研究尚未见报道。本研究以兰州百合为材料,通过农杆菌介导法和基因枪介导法分别将苹果抗坏血酸合成和代谢关键酶基因抗坏血酸过氧化物酶(APX)和L-半乳糖-1,4-内酯脱氢酶(GLDH)转入兰州百合,通过分子筛选、PCR和Southern杂交检测,获得转苹果APX和GLDH基因兰州百合植株,并研究了转基因植株对盐胁迫抗性的影响,从而为提高兰州百合抗逆性,为兰州百合品种的抗性改良和营养价值的改良奠定基础。 主要研究结果如下: 1.分别构建了苹果APX基因植物表达载体pCAMBIA-APX和GLDH基因植物表达载体pCAMBIA-GLDH。该载体的目的基因启动子为CaMV35s启动子,终止子为胭脂碱合成酶,抗性选择标记为Hyg基因,同时含有GUS标记基因。 2.研究了APX基因转化中影响鳞片叶转化效率的多种因素,包括Hyg浓度、Cef浓度等,确立了10mg L-1 Hyg,500mg/LCef,2d的预培养,3d的共培养,OD600为0.4,侵染20min的高效兰州百合遗传转化体系,并获得了兰州百合抗性植株。 3.对GUS染色呈阳性的10个转苹果APX基因百合抗性株系进行PCR扩增,10个株系均扩增出900bp大小的特异条带,而对照无特异性条带出现,初步证明外源基因已转入兰州百合植株中。分别对PCR检测呈阳性的10个株系进行Southern杂交检测,有2个株系检测到一条杂交带,一个株系两条杂交带,证明不同拷贝的APX基因已经整合到兰州百合基因组中。 4.测定了转APX基因和对照兰州百合在200 mM盐胁迫下的生理反应,结果显示,转基因兰州百合的APX活性始终高于对照植株,细胞膜透性和MDA的含量上升的速度低于对照植株,表明转基因植株的耐盐性高于对照植株,而转基因植株的SOD活性和对照植株无明显差异。 5.通过研究GLDH基因转化中影响鳞片叶转化效率的多种因素,包括轰击压力和轰击距离等,建立了10 mg L~(-1) Hyg,500mg L~(-1)Cef,轰击距离为6 cm,轰击压力为1100 psi,每枪金粉用量为300μg的兰州百合基因枪转化体系,并获得了兰州百合抗性植株。 6.对GUS染色为阳性的35个转苹果GLDH基因百合抗性株系进行PCR扩增,结果35个株系均扩增出850bp大小的特异条带,而对照百合植株无特异性条带出现,初步证明外源基因已转入兰州百合植株中。分别对PCR检测呈阳性的35个兰州百合株系进行Southern杂交检测,有7个株系检测到一条杂交带,一个株系两条杂交带,证明GLDH基因已经整合到兰州百合基因组中。 7.测定了转基因和对照兰州百合GLDH酶活性和ASA含量,结果表明GLDH活性提高了5-6倍,ASA含量提高了2-7倍。 8.研究了兰州百合叶片抗氧化酶活性和抗氧化剂对干旱胁迫的反应,在干旱胁迫下,兰州百合叶片SOD、CAT表现为先升后降,干旱第4 d活性达到最大,POD也表达为相同的趋势,在干旱第5 d天达到最大;ASA相关的APX、DHAR、MDHAR和GR表现为先升后降,其中DHAR和MDHAR在第5 d达到最大,APX和GR在第4 d达到最大。抗氧化剂ASA和GSH的含量在第4 d达到最高。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S682.29;S644.1

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【同被引文献】
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9 记者 魏瑶 通讯员 王东初;兰州百合今年“身价”翻倍增长[N];兰州日报;2010年
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