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《西北农林科技大学》 2012年
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矮壮素对小鼠生殖毒性的研究

李春梅  
【摘要】:本论文比较系统地研究了矮壮素对亲代小鼠生殖机能的影响以及对胚胎、仔鼠的毒性作用,并建立了小鼠肌肉组织中矮壮素的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,从而研究其在小鼠体内的组织分布情况。 本研究以普通级ICR小鼠为研究对象,将144只成年无生育史小鼠按体重随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和低(20mg/kg)、中(60mg/kg)、高(180mg/kg)剂量矮壮素染毒组,每组36只,雌:雄比例为2:1。灌胃染毒,每天1次,染毒容量0.02mL/g;雄鼠从交配前4周连续染毒至交配结束,雌鼠从交配前2周连续染毒,1/2雌鼠于妊娠第17d剖腹取胎,1/2雌鼠连续染毒至仔鼠断乳,仔鼠观察至断乳。(1)测定F_0小鼠体重;心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、睾丸、附睾、子宫脏器重量及脏器系数;精子运动参数;生化指标和病理变化等。(2)检查胎鼠生长发育情况、内脏和骨骼畸形。测定断乳后F_1小鼠体重;心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、脑、睾丸脏器重量及脏器系数;出生数;外观畸形数和病理变化等。(3)以小鼠肌肉组织为研究对象,通过优化液相参数及前处理方法,建立了小鼠肌肉组织中矮壮素的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。(4)在方法建立的基础上,高剂量组雄鼠分别于最后染毒后1d、3d、24d三个时间点进行各组织器官矮壮素的测定,高剂量组雌鼠于染毒结束后亦进行各组织器官的测定。结果如下: (1)在F_0小鼠中,与对照组比较,各剂量矮壮素染毒组雄鼠的体重显著下降(P<0.05),而雌性小鼠的体重差异不显著;各剂量组雄鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、胃、肾脏、附睾的脏器系数差异不显著,各剂量组雌鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、子宫、卵巢的脏器系数亦差异不显著,而高剂量组雄鼠的睾丸系数显著升高(P<0.05);中、高剂量组精子计数和高剂量组精子活动率显著降低(P<0.05);高剂量组雄鼠睾丸AKP、LDH活性和中、高剂量组SOD活性均显著升高(P<0.05),各剂量组雄鼠睾丸MDA含量均低于对照组,但差异不显著;各剂量组雄鼠血清中睾酮水平升高,雌鼠血清中雌二醇水平降低,但差异不显著;各剂量组雄鼠睾丸组织形态改变,主要表现为生精上皮不完整,变薄,生精细胞数量减少,间质细胞数目减少,排列紊乱,间质增宽,而雌、雄鼠肝脏、肺脏、肾脏组织亦都有不同程度的病理损伤,主要表现为肝小叶结构不清,中央静脉淤血、肝细胞坏死,肺泡壁增厚,肺毛细血管网淤血,肾小管壁增厚,管腔变窄,细胞质脱落与管腔中,肾小球肿胀,有一定的充血。 (2)各剂量矮壮素染毒组均未发现死胎、吸收胎及骨骼和内脏畸形,胎鼠的平均体重、体长差异不显著,每窝平均活胎数下降,但差异不显著;在F_1小鼠中,与对照组比较,高剂量组小鼠的出生数显著降低(P<0.05),中、高剂量组断乳后小鼠体重显著降低(P<0.05);各剂量组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃的脏器系数差异不显著;各剂量组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、脑、睾丸(卵巢)组织切片镜检未见形态学改变。 (3)建立了一种快速检测小鼠肌肉组织中矮壮素的LC-MS/MS检测方法。矮壮素在0.5-500.0μg/L的范围内,具有良好的线性,在2.0μg/kg、20.0μg/kg、200.0μg/kg三个添加浓度水平上平均回收率为86.4%-94.7%,相对标准偏差小于5.7%,方法定量限为2.0μg/kg,可用于动物组织中矮壮素的痕量检测。 (4)矮壮素染毒后分布于小鼠各组织器官中,肌肉组织浓度最高,肾脏、肝脏中亦有较高浓度,睾丸组织中亦有一定的蓄积。 以上结果表明,矮壮素对雄鼠有生殖毒性作用,对雌鼠的毒性作用较小,存在性别差异;矮壮素对胚胎、仔鼠亦有一定的毒性作用;矮壮素染毒后可分布于小鼠各组织器官中,主要经肝、肾代谢、排泄,长期染毒可造成矮壮素的蓄积性,在雄鼠体内消除较慢。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S852.3

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