收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Cdh1基因在牛卵母细胞GVBD中的功能研究

井勇  
【摘要】:在哺乳动物卵母细胞减数分裂GV期阻滞和减数分裂恢复过程中,MPF(CDK1-Cyclin B1)活性的变化起着关键性作用。有报道表明Cdh1基因在小鼠卵母细胞GV期阻滞过程中发挥重要的作用,APCCdh1通过降解Cyclin B1,防止其在生发泡中积累,从而使CDK1处于失活状态,将卵母细胞阻滞在GV期。本研究对Cdh1基因在牛卵母细胞GVBD中的功能进行了研究。 本研究首先从牛颗粒细胞中克隆了Cdh1基因并构建了pVenus-Cdh1重组质粒;其次对Roscovitine(ROS)抑制后的牛卵母细胞GVBD进程的变化进行了研究;最后,通过向牛卵母细胞中显微注射Cdh1-Venus cRNA,对Cdh1蛋白在牛卵母细胞中的定位情况进行了观察,并研究了超表达Cdh1基因对牛卵母细胞GVBD的影响。 研究取得以下结果: 1.利用RT-PCR技术成功地从牛颗粒细胞中克隆得到Cdh1基因的CDS全长序列,经与NCBI上公布的Cdh1序列进行比对,同源性为100%。将其连接到pVenus真核表达载体上成功构建了pVenus-Cdh1重组质粒。 2.将牛卵母细胞在含有50μM ROS的成熟培养液中培养14h,然后移入不含ROS的成熟培养液中,分别在之后的0h、1h、2h、3h和4h将卵母细胞固定。对照组卵母细胞在不含ROS的成熟培养液中培养,分别在0h、2h、4h、6h和8h将卵母细胞固定。对卵母细胞进行染色,然后判定卵母细胞所处的时期,并统计GVBD发生率。结果发现与对照组相比,ROS抑制后的牛卵母细胞GVBD进程缩短了大约4h。 3.向ROS抑制的牛卵母细胞中显微注射Cdh1-Venus cRNA,对不同时期牛卵母细胞中Cdh1-Venus蛋白的定位情况进行了观察。结果显示,在GV期牛卵母细胞中,Cdh1-Venus蛋白主要分布于生发泡中,GVBD发生后,Cdh1-Venus蛋白主要分布在染色体和纺锤体所在的区域。 4.向对照组和实验组的牛卵母细胞中分别注射Venus cRNA和Cdh1-Venus cRNA,分别在移除ROS后的1h、2h和3h将卵母细胞固定并染色,后然判定卵母细胞所处的时期并统计GV期卵母细胞的比例。结果显示,实验组中GV期卵母细胞的比例均高于对照组,并且在2h和3h时分别存在显著性差异,说明在牛卵母细胞中超表达Cdh1基因延迟了GVBD的发生。 本研究得到如下结论:ROS抑制后的牛卵母细胞GVBD进程缩短了大约4h;在GV期牛卵母细胞中,Cdh1蛋白主要分布于生发泡中,GVBD发生后,Cdh1蛋白主要分布于染色体和纺锤体所在的区域;在牛卵母细胞中超表达Cdh1基因延迟了GVBD的发生。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 赵磊文;;卵母细胞体外成熟与体细胞核移植[J];上海畜牧兽医通讯;2006年05期
2 戎茜,刘树真;牛卵母细胞体外成熟和体外培养的研究进展[J];山东生物医学工程;2001年03期
3 万敏;马夜肥;王勇胜;彭新容;张东;杨鹭;张涌;;脱羰秋水仙碱诱导牛卵母细胞显核[J];农业生物技术学报;2008年04期
4 孙青原,秦鹏春;牛卵母细胞发育的超微结构研究[J];山东农业大学学报(自然科学版);1989年04期
5 戴玲;江胜芳;胡冬玲;张昌军;;人卵泡液对牛未成熟卵母细胞体外培养的影响[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2008年05期
6 孙青原;秦鹏春;;牛卵母细胞发育过程的细胞核变化[J];东北农业大学学报;1990年03期
7 林嘉鹏;王静;赵云程;陈童;汪立芹;陈博;黄俊成;;牛卵母细胞玻璃化冷冻对基因mRNA表达量的影响[J];中国实验动物学报;2011年02期
8 王雪红;董雅娟;柏学进;岳福杰;杨恕玲;董方圆;;山羊卵母细胞体外成熟过程中细胞核迁移的研究[J];生物技术通报;2006年S1期
9 沙伟;刘赫;刘娣;;卵母细胞去核方法在动物体细胞核移植中的应用研究[J];中国畜牧兽医;2008年01期
10 赵磊文;伏静;管鹏飞;李华;黄淑帧;曾溢滔;;胚胎移植时机对牛体细胞克隆胚胎妊娠率的影响[J];上海交通大学学报(农业科学版);2008年02期
11 董毅飞;张昌军;罗清炳;江胜芳;张征;;人颗粒细胞共培养对牛卵母细胞体外成熟及孤雌激活的影响[J];中国畜牧兽医;2011年01期
12 李雪峰,李煜,郭继彤,安志兴,张琇,张涌;不同激活方法对牛体细胞核移植胚胎体外发育的影响(简报)[J];实验生物学报;2002年03期
13 文国艺,阳年生,Chris.Polge;受精滴中精子不同平衡时间对牛卵母细胞体外受精的影响[J];广西科学院学报;1999年04期
14 李海军;仓明;王立民;刘东军;旭日干;;血管内皮生长因子对牛早期胚胎发育的影响[J];内蒙古大学学报(自然科学版);2006年06期
15 征月良;;牛卵核移植技术的应用[J];生物技术通报;2010年02期
16 石德顺,卢克焕;肝素及血小板激活因子对牛卵母细胞体外受精的影响[J];广西科学;1996年03期
17 王洪锋;王晓磊;于海生;雷安民;贾文文;黄伟伟;窦忠英;;尿嘧啶、三价因子和ATP对牛卵母细胞体外成熟的影响[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2006年06期
18 吴凯峰;刘东军;旭日干;;EGF、IGF-Ⅰ对牛卵母细胞体外成熟的影响[J];内蒙古大学学报(自然科学版);2006年05期
19 华松;张志鹏;张驰;张涌;;一种改进的牛体细胞核移植去核方法(英文)[J];遗传学报;2007年06期
20 李煜;梁琳;王振飞;旭日干;;小鼠-牛体细胞种间核移植[J];中国生物工程杂志;2006年07期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 卞江涛;倪明;胡高博;赵鑫;吕自力;卢全晟;薛利;宋彦军;张冰;张居农;;不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
2 雷安民;杨春荣;高志敏;窦忠英;;牛卵母细胞体外成熟的研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
3 雷安民;敬晓棋;严兴荣;胥涛;窦忠英;;牛卵母细胞体外成熟部分影响因素的研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
4 赵红卫;李青旺;陈学进;胡建宏;江中良;王立强;韩增胜;;HA对牛早期胚胎无血清培养影响的研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 卞江涛;倪明;胡高博;赵鑫;吕自力;卢全晟;薛利;宋彦军;王国旗;张冰;张居农;;不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响[A];《2009中国牛业进展》论文集[C];2009年
6 朱淑文;吉泽绿;今野博章;李培昌;;不同培养基对牛卵泡内罗丹母细胞体外成熟的影响[A];动物学专辑——上海市动物学会2001年年会论文集[C];2001年
7 滕维中;石德顺;吴文周;曲华;安美文;;动物卵母细胞透明带弹性系数的一种测定方法[A];第七届全国生物力学学术会议论文集[C];2003年
8 郭宪;阎萍;梁春年;包鹏甲;曾玉峰;;生物技术在牦牛繁育中的应用[A];2010中国牛业进展[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 华松;体细胞核移植及线粒体命运的研究[D];西北农林科技大学;2007年
2 李向臣;牛卵母细胞去核方法及体细胞核移植的研究[D];西北农林科技大学;2007年
3 易康乐;Figla和BDNF对猪和牛卵母细胞及早期胚胎生长发育的影响[D];吉林大学;2008年
4 张学明;人gdnf在牛胎儿成纤维细胞β-casein基因座的定位整合及基因打靶克隆囊胚的制备[D];内蒙古大学;2009年
5 李雪峰;牛卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植[D];西北农林科技大学;2001年
6 彭新荣;提高牛体细胞核移植效率的研究[D];西北农林科技大学;2008年
7 江明生;应用活体采卵—体外受精技术生产牛性控胚胎的研究[D];广西大学;2008年
8 李守军;热休克对牛卵母细胞和IVP胚胎影响的研究[D];东北农业大学;2001年
9 桑国俊;牛卵母细胞及体外胚培养技术研究[D];甘肃农业大学;2008年
10 李裕强;绵羊-牛种间体细胞核移植研究[D];西北农林科技大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李国浩;牛卵母细胞冷冻方法的研究[D];河南科技大学;2011年
2 史芸安;ARF1在牛卵母细胞第一次减数分裂中的作用研究[D];西北农林科技大学;2012年
3 李红义;玻璃化冷冻体外成熟牛卵母细胞的研究[D];内蒙古大学;2004年
4 井勇;Cdh1基因在牛卵母细胞GVBD中的功能研究[D];西北农林科技大学;2012年
5 杨文琳;CDC20对体外培养的牛卵母细胞第一极体排出和卵裂影响的研究[D];西北农林科技大学;2012年
6 蔡春花;牛卵母细胞的体外成熟以及活性化处理对孤雌发育的影响[D];延边大学;2002年
7 任久生;化学辅助去核方法对牛卵母细胞MAPK活性及母源基因c-mos表达水平的影响[D];吉林大学;2013年
8 乌云其其格;卵母细胞孤雌激活诱导的孤雌胚Ca~(2+)分布变化和EGFR的表达[D];内蒙古农业大学;2008年
9 韩雪花;影响牛卵母细胞体外受精及胚胎发育的几种因素的研究[D];延边大学;2002年
10 王珂;奶牛卵母细胞玻璃化冷冻方法及胚胎程序化冷冻研究[D];甘肃农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 记者 刘伟霖;黑龙江试管牛诞生[N];农民日报;2008年
2 于金枝;繁殖牛羊成本低 效益显著[N];农民日报;2003年
3 唐立新记者 李丽云;东三省首批试管牛在哈诞生[N];科技日报;2008年
4 本报特约撰稿人 陆志城 瑶薰;克隆人又要“来”了[N];医药经济报;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978