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《西北农林科技大学》 2012年
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HIV-1中和性抗体在杆状病毒表达系统的表达

王瑞琴  
【摘要】:艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus,HIV)感染引起的疾病,是危害人类健康最严重的病毒性疾病之一。爱滋病被发现迄今31年时间里,尽管人们还没有研制出有效的疫苗来防治此病,但是已经发现了几种具有广谱中和性的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),B12、VRC01、2G12、2F5、4E10等。其中,B12和VRC01分别能够抑制大约40%和90%的全球流行的艾滋病毒毒株,具有广谱、强效的中和HIV的活性。单独或联合使用这些单克隆抗体,能有效地阻断病毒的感染。因此本研究运用基因从头合成和重叠PCR的方法获得HIV-1中和性抗体B12和VRC01的全基因序列,并在杆状病毒表达系统中进行表达。 本研究根据GenBank已公布的VRC01抗体可变区的氨基酸序列,结合本实验室保存的B12抗体基因序列设计引物,合成、克隆了B12和VRC01抗体轻链和重链全长基因B12L、B12H、VRC01L和VRC01H,大小分别为710bp、1452bp、709bp和1434bp,所克隆基因根据昆虫细胞密码子偏爱性均进行了优化。然后运用双酶切连接的方法成功地构建了四个重组质粒B12L-pTriEx1.1、B12H-pTriEx1.1、VRC01L-pTriEx1.1和VRC01H-pTriEx1.1,并分别与Bacmid DNA共转染sf9昆虫细胞,获得了携带抗体基因的重组病毒。Western blot结果显示重链基因和轻链基因在昆虫细胞中都正确表达,分子质量分别为约55kDa和约25kDa。用抗体轻链重组病毒和重链重组病毒(rAC-B12L/rAC-B12H和rAC-VRC01L/rAC-VRC01H,“/”表示共同感染)混合感染Sf9昆虫细胞,非还原性Western blot结果显示表达的蛋白分子量约为160kDa,表明用两种重组病毒共感染后所表达的抗体重链、轻链可通过分子间二硫键结合,组装成与天然抗体类似结构的VRC01和B12全抗体。将重组抗体用DTT还原后,Western blot结果显示,在55kDa和约25kDa处出现了两条特异性条带,说明DTT打开了重链和轻链之间的二硫键,进一步验证了以上推测的正确性。ELISA结果显示,重组抗体B12和VRC01均具有结合病毒抗原gp120的活性。 本研究在体外合成了编码B12和VRC01全抗体的基因,用杆状病毒/昆虫细胞表达系统高效表达了这两个抗体,并对其特异性和抗原结合活性进行了鉴定,建立起了在昆虫细胞内表达单克隆抗体的平台体系,并为这两个抗体在HIV诊断和HIV治疗性疫苗的设计方面奠定了基础。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R512.91

【参考文献】
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1 杨雪盈;周枫;乌正赉;;暴露前使用抗病毒药预防艾滋病的研究进展[J];中华疾病控制杂志;2011年02期
2 凌焱;段海清;陈惠鹏;;合成生物学[J];军事医学科学院院刊;2006年06期
3 王立华,余健秀,胡晓晖,庞义;斜纹夜蛾核型多角体病毒BamHI-J片段序列分析(英文)[J];生物化学与生物物理学报;2001年06期
4 赵梅;周淑琴;杨莉娅;;天然药物抗HIV机制的研究进展[J];现代生物医学进展;2012年04期
5 刘高强,章克昌,王晓玲,魏美才;昆虫杆状病毒表达系统的研究与应用进展[J];中国生物工程杂志;2004年07期
6 胡显文,陈惠鹏,汤仲明,马清钧;美国、欧盟和中国生物技术药物的比较[J];中国生物工程杂志;2005年02期
7 张伍魁;范清林;宋礼华;;毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的研究进展及应用[J];中国生物工程杂志;2006年01期
8 李学仁;阮力;;HIV-1中和抗体疫苗研究进展[J];中国生物工程杂志;2008年08期
9 于长明;基因工程抗体表达系统的研究进展[J];生物技术通讯;2000年03期
10 高瑛瑛;阮力;;人免疫缺陷病毒/艾滋病细胞免疫疫苗研究进展[J];生物技术通讯;2010年03期
【共引文献】
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1 黄榕珍;;基因工程制药应用及研究进展[J];海峡药学;2010年12期
2 张腾霄;王斌;孙丽梅;赵大伟;侯林;高婧;;我国目前艾滋病毒感染特点探讨及防控状况调查[J];黑龙江医药;2011年01期
3 逄春华;董海霞;包艳玲;;生物制药产业的发展及药品生物的测定[J];黑龙江医药;2011年05期
4 闫景晨;;我国生物制药技术在西药制药中的应用[J];黑龙江科技信息;2010年27期
5 杨佳宁;孙翠玲;;浅谈生物制药技术在西药制药中的应用[J];黑龙江科技信息;2011年06期
6 王秋艳;满迎春;张国春;张晶敏;;胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响[J];华南国防医学杂志;2009年06期
7 何江帅;卢强;李伟;赵晓;冯祥汝;陈义龙;;鲤鱼白细胞介素-1β全长cDNA的克隆·鉴定及其差异表达分析(摘要)(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年03期
8 黄琼林;何瑞;詹若挺;陈蔚文;;青天葵EBP1基因原核表达载体的构建(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2012年06期
9 田伟;扈凤平;李立新;霍治;王帆;罗奇志;余平;;《医学免疫学》教学的几点体会[J];湖南医科大学学报(社会科学版);2007年04期
10 马楠;段广才;王奇;杨海燕;;河南省某地区配偶间HIV性传播状况调查[J];郑州大学学报(医学版);2011年06期
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1 罗政;魏霞;熊章华;;中药在直肠癌术后放疗中防护作用的临床研究[A];江西省首届中西医结合肿瘤学术研讨会论文集[C];2010年
2 朱昌雄;蒋细良;田云龙;郭萍;;生物农药研究的最新进展、问题、建议与展望[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年
3 彭界;;中老年呼吸道疾病患者MP-IgM检测分析[A];第二十五届航天医学年会暨第八届航天护理年会论文汇编[C];2009年
4 潘明沃;陈志强;古炽明;王树声;向松涛;吕立国;代睿欣;;前列腺癌浸润性树突状细胞CD1a、CD83的表达及与临床指标的相关性分析[A];第七次中国中西医结合泌尿外科学术年会暨第二次广东省中西医结合泌尿外科学术年会论文集[C];2009年
5 潘明沃;陈志强;古炽明;吕立国;代睿欣;;“扶正抑瘤法”对前列腺癌患者原发灶树突状细胞CD1a、CD83表达的影响[A];第七次中国中西医结合泌尿外科学术年会暨第二次广东省中西医结合泌尿外科学术年会论文集[C];2009年
6 潘明沃;陈志强;古炽明;王树声;向松涛;吕立国;代睿欣;;前列腺癌浸润性树突状细胞CD1a CD83的表达及与临床指标的相关性分析[A];第七次中国中西医结合泌尿外科学术年会暨第二次广东省中西医结合泌尿外科学术年会论文集[C];2009年
7 于德敏;张欣欣;张东华;陆志檬;詹勤;姜节洪;宋建华;陈新文;;乙型肝炎病毒C型重组杆状病毒的构建及鉴定[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
8 周立华;唐英;黄朝阳;郭会军;;从中医整体论角度探讨艾滋病非CD4+T细胞的免疫补偿机制[A];中华中医药学会防治艾滋病学术研讨会暨2006年年会论文集[C];2006年
9 苏爱华;丛喆;王卫;陈霆;魏强;;抗人B淋巴细胞单克隆抗体清除中国恒河猴体内B淋巴细胞效果观察[A];第十届中国实验动物科学年会论文集[C];2012年
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1 郑桂玲;鳞翅目昆虫胚胎细胞系的建立和高蛋白表达细胞克隆株的研究[D];山东农业大学;2010年
2 贾爱芹;清肝抑纤饮及其拆方防治大鼠肝纤维化的实验研究[D];山东中医药大学;2010年
3 杨红亚;脾肾两虚证双生子脑瘫的生物学基础研究[D];成都中医药大学;2010年
4 刘小民;华北大黑鳃金龟中肠cDNA文库的构建及其围食膜靶标蛋白的分离与鉴定[D];河北农业大学;2011年
5 杨艳;广西地区人群细胞因子基因多态性分析及其与肝细胞癌易感性的研究[D];广西医科大学;2011年
6 张丽青;嗜热毛壳菌超氧化物歧化酶基因的克隆、表达及转基因烟草耐盐性研究[D];山东农业大学;2011年
7 徐立新;MeJA对人参DS基因表达的影响及DS在酵母中的表达[D];吉林大学;2011年
8 刘弘;妇科Ⅰ号方治疗盆腔炎性疾病病理与免疫机制初探[D];北京中医药大学;2011年
9 杞锦政;热敏灸治疗哮喘的对照研究及艾灸量感关系探讨[D];广州中医药大学;2011年
10 彭绍忠;广藿香抗甲型流感病毒有效成分筛选及评价研究[D];广州中医药大学;2011年
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1 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 龚文芳;棉花抗细胞凋亡基因GhDAD1的克隆、定位及表达分析[D];华中农业大学;2010年
3 董瑞萍;唾液酸与2型猪链球菌致病性关系的研究[D];南京医科大学;2009年
4 蔡克敏;鼻内糖皮质激素对鼻息肉中Foxp3~+调节性T细胞的影响[D];南京医科大学;2009年
5 陈小慧;STEAP4基因在人脂肪细胞分化过程中的表达变化及其调控因素的研究[D];南京医科大学;2009年
6 仲伟磊;引入新的二硫键对植酸酶结构和功能的影响[D];山东农业大学;2010年
7 范忠玲;鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测[D];山东农业大学;2010年
8 王婷婷;O型FMDV VP1基因与山羊IL-18基因在昆虫细胞中的共表达与活性检测[D];山东农业大学;2010年
9 顾英;BE生物制药公司项目投资可行性研究[D];华东师范大学;2010年
10 刘文君;根据压力—容量曲线设置保护性通气方式对单肺麻醉患者的影响[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2010年
【二级参考文献】
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1 姚斌,张春义,王建华,范云六;高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母[J];中国科学C辑:生命科学;1998年03期
2 张应玖,金宁一,王宏伟,黄薇,张东威,沈家骢;用杆状病毒表达系统表达的HIV-2 gp105和gp36的反应原性与抗原特异性分析[J];吉林大学学报(理学版);2002年01期
3 洪华珠,彭建新;一株高水平表达重组蛋白昆虫细胞系的建立[J];昆虫学报;2001年03期
4 孙国勋,丁翠,蔡秀玉;杆状病毒的结构蛋白及其功能[J];昆虫学报;2001年03期
5 贲昆龙;徐建春;陆林;吕年青;程跃;陶剑;刘德凯;闵向东;曹筱梅;李石华;;男性包皮环切是艾滋病预防和生殖健康的一种“外科疫苗”[J];中华男科学杂志;2009年05期
6 姚斌,张春义,王建华,范云六,史秀云,王亚茹,李淑敏;产植酸酶的黑曲霉菌株筛选及其植酸酶基因克隆[J];农业生物技术学报;1998年01期
7 王文兵,张志芳,何家禄,吕鸿声,public.zj.js.cn;杆状病毒基因组DNA复制相关基因的研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2000年03期
8 张传溪,武家才;棉铃虫核型多角体病毒基因组结构及p10基因[J];生物化学与生物物理学报;2001年02期
9 王立华,余健秀,胡晓晖,庞义;斜纹夜蛾核型多角体病毒BamHI-J片段序列分析(英文)[J];生物化学与生物物理学报;2001年06期
10 周亚竟,易咏竹,张志芳,何家禄,张元兴,吴祥甫;杆状病毒囊膜糖蛋白gp64基因启动子活性分析(英文)[J];生物化学与生物物理学报;2003年01期
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1 刘国生;从75种传统药物中筛选抑制HIV-1蛋白酶活性的物质[J];国外医学.中医中药分册;1997年06期
2 阿沐;婴儿出生后的HIV-1母婴传播[J];中华医学信息导报;1997年18期
3 江文正,金宁一;表达HIV-1结构蛋白靶细胞的制备及鉴定[J];中国生物制品学杂志;2003年02期
4 沈成利,吴昊;急性HIV-1感染的传播和预防[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;2004年02期
5 何海洋;乌干达拉凯地区一夫一妻制HIV-1传播的可能性[J];国外医学.社会医学分册;2005年01期
6 曹凤,季阳;HIV-1 感染的长期非进展者的特征[J];中国性病艾滋病防治;1997年03期
7 李春元;影响HIV-1感染细胞从宫颈与阴道散播的高危因素[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;1998年02期
8 李春元;HAART治疗后血浆低水平HIV-1的病毒复制状况[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;1999年04期
9 李凯年;从滤纸干血标本中快速筛检HIV-1 DNA[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;1999年05期
10 吴玉立;用强效抗逆转录病毒药物治疗的患者在其外周血单核细胞内HIV-1的转录仍持续存在[J];中国艾滋病性病;2000年01期
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1 刘新泳;展鹏;李东岳;陈文敏;;抗耐药性HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂的设计、合成与活性研究[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年
2 魏飞力;汪习城;刘立峰;陈德喜;;HIV-1感染者脑脊液中病毒包膜基因分析[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
3 胡勤学;;(HIV-1粘膜感染中的侵入、传播和抑制)(英文)[A];2004年中国科学院新生病毒性疾病控制学术讨论会摘要集[C];2004年
4 段呈玉;;HIV-1病毒基因调控蛋白对胞内艾滋病病毒干预作用研究进展[A];中华中医药学会防治艾滋病分会第八次年会论文集[C];2011年
5 鲍毅;王晓辉;陈琳;何太平;;深圳市HIV-1不同亚型分布与传播途径的关联性分析[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
6 焦艳梅;吴昊;;研究ART治疗对使用不同辅助受体HIV-1病毒的影响[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
7 李丽娜;苏莉;张晓昀;黄晓燕;单志杰;翟红林;;关于HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂药物的三维定量构效关系和分子对接研究[A];第十一届全国计算(机)化学学术会议论文摘要集[C];2011年
8 李东岳;陈文敏;展鹏;Christophe Pannecouque;Erik De Clercq;刘新泳;;HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂etravirine类似物的设计、合成与活性评价[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年
9 李杰;林巍;金玲湘;胡健;冯婷婷;;HIV-1体外复制、检测系统的建立及评价[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年
10 唐蔚;王辉;张洁云;何清;;HIV-1高暴露持续血清阴性者非特异性T细胞免疫功能的研究[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 刘霞;甲流患者抗体能对抗多种流感病毒[N];科技日报;2011年
2 李天书;刘云涛;新生病毒敲响警钟[N];中国医药报;2004年
3 中国科学院院士 刘新垣;院士论言:战胜癌症有进展有信心[N];科技日报;2010年
4 记者 郭铭华;省政协举行生物医药产业发展报告会[N];黑龙江日报;2010年
5 刘汉权;穿心莲有望成为抗艾滋病新药原料[N];中国中医药报;2005年
6 吴一福;天然抗角蛋白自身抗体研究进展[N];中国医药报;2003年
7 一凡;科学论争与认知局限[N];中国妇女报;2004年
8 记者汪敏华;申城建成首个抗体基因库[N];解放日报;2003年
9 本报记者 马建忠;创新,向海洋要药[N];医药经济报;2008年
10 记者 陈冀;“用我们的鲜血去对抗非典”[N];新华每日电讯;2003年
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1 马晓东;非核苷类HIV-1逆转录酶抑制剂研究 Ⅰ:CH_2-DAPY衍生物的结构优化及构效关系研究 Ⅱ:BP类似物的分子设计、合成及构效关系研究[D];复旦大学;2011年
2 刘永健;云南省HIV-1流行毒株及HIV早期感染病毒准种的基因变异和分子进化研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
3 江华洲;男男性行为人群HIV-1早期感染检测策略及新发感染率研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年
4 靳昌忠;HIV-1性传播的关键分子DC-SIGN特异性表达机制研究[D];浙江大学;2011年
5 胡国平;虚拟筛选方法评价和靶向HIV-1整合酶与人类LEDGF/p75蛋白相互作用界面的抑制剂发现研究[D];华东理工大学;2012年
6 李娜;miR-34a抑制肝癌细胞侵袭转移和甲型减毒嵌合流感病毒诱导HIV-1广谱中和抗体的分子机制研究[D];吉林大学;2011年
7 苏锟楷;HIV-1整合酶S119D/E2C融合蛋白的定向整合及其整合位点的预测和分析[D];浙江大学;2011年
8 刘智慧;寡肽(OGP、HIV-1 tat~[47-57])的合成、聚合及功能研究以及NRSF/REST在转录调控方面的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
9 韩晓旭;我国部分地区HIV耐药变异和结构基因特征的研究[D];中国医科大学;2006年
10 贾峥;HIV-1表型耐药以及基因型耐药的检测与分析[D];北京协和医学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王瑞琴;HIV-1中和性抗体在杆状病毒表达系统的表达[D];西北农林科技大学;2012年
2 刘铁军;HIV-1生物性克隆病毒的分离与鉴定及蕨麻提取物体外抗HIV活性研究[D];河北医科大学;2011年
3 谢美榕;福建省HIV-1耐药基因变异现况及MSM HIV-1感染者流行毒株亚型分析研究[D];福建医科大学;2011年
4 王文波;诱导HIV-1中和抗体的膜蛋白抗原的优化和改造[D];中国药品生物制品检定所;2011年
5 瞿小旺;1.中国株CN54HIV-1Pol P66/P51在大肠杆菌中的表达与纯化  2.鼠IL-12和IL-23作为基因佐剂与HIV-1 DNA疫苗共免疫研究[D];华中农业大学;2004年
6 郝晓培;广谱中和活性样本HIV-1膜蛋白基因的克隆和功能鉴定[D];昆明医学院;2011年
7 朱娜;树突状细胞的分离培养及HIV-1假病毒感染实验研究[D];长春中医药大学;2012年
8 李平;HIV-1整合酶与抑制剂相互作用的分子模拟研究[D];北京工业大学;2010年
9 王遥;以HIV-1整合酶与gp41为靶点的药物设计[D];北京工业大学;2011年
10 张瑛;宽苞水柏枝抑制HIV-1复制有效成分及其构效关系的研究[D];北京协和医学院;2011年
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