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《西北农林科技大学》 2012年
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凡纳滨对虾病原菌分离与鉴定和类Crustin基因的克隆及在副溶血弧菌感染条件下的表达分析

张艳艳  
【摘要】:本研究以海南南疆生物技术有限公司的500尾凡纳滨对虾为研究对象,对凡纳滨对虾分离的病原菌进行了菌种鉴定、生长曲线分析、攻毒和药敏分析,同时采用RT-PCR的技术克隆凡纳滨对虾的CL(Crustin-like即CL)基因;使用DNAstar、Clustalx、MEGA5.0、PROSITE、TMpred和SignalP软件分析其基因和蛋白的结构并预测功能;利用副溶血弧菌进行攻毒实验和实时定量PCR检测CL基因在病原侵染条件下的表达情况。验证CL基因是否参与在病原侵染条件下免疫应答,为进一步研究凡纳滨对虾的免疫机制和抗病育种奠定基础。 1.病原菌HL19的分析 本研究分离患病一月龄凡纳滨对虾养殖水中的病原菌,利用病原菌进行了菌落特征观察、生理生化鉴定、16S rRNA分子鉴定、生长曲线分析、药敏实验和和攻毒实验,发现该病原菌为哈维氏弧菌(Vibro harveyi),生长快速,从0-2h为调整期,从3-9h指数期HL19开始呈指数增长,生长快速,10~(-19) h为稳定期,最高浓度在18h为4.05×10~12CFU/ml;对强力霉素、氟哌酸、复达欣、菌必治、复方新诺明和四环素等13种药物敏感,对青霉素G、苯唑青霉素、羧苄青霉素、和头孢拉定等青霉素药物不敏感;注射1×10~6CFU/ml的哈维氏弧菌死亡率最小为0,而在1×10~(11)CFU/ml时死亡率最高为100%,该菌株的半致死浓度为(LD50)为4.66×10~8CFU/ml。 本研究对HL19进行菌种鉴定、生长曲线分析、药敏实验和和攻毒实验,发现维氏弧菌菌落的形态特征和生理生化的变化很大,主要原因是种类个体之间的存在差异;本研究分离的弧菌致病性不高,但是该菌生长速度快;因为青霉素类药物的滥用,使哈维氏弧菌的抗药性增加,对苯唑青霉素、氨苄青霉素、羧苄青霉素和头孢拉定等青霉素类产生了抗药性,不适合作为药物使用;对庆大霉素、复方新诺明、复达欣和利福平等比较敏感,可以用于药物治疗,为凡纳滨对虾前期生长的病害防治贡献了力量。 2.病原菌XG409的分析 利用本研究分离患病的二月龄3尾凡纳滨对虾的病原菌进行了菌落特征、生理生化鉴定、16S rRNA分子鉴定、生长曲线分析、药敏实验和和攻毒实验,鉴定出病原菌为副溶血弧菌(Vibro parahaemolyticus);生长快速,从0-8h为指数期XG409呈指数增长,9-17h为稳定期,18-24h为衰亡期;对氟哌酸、复方新诺明、复达欣和菌必治四环素等14种药物敏感,对青霉素G、苯唑青霉素、羧苄青霉素、和头孢拉定等青霉素药物不敏感。注射1×10~4CFU/ml副溶血弧菌死亡率最小为0,而在1×10~9CFU/ml时死亡率最高为100%,该菌株的半致死浓度为(LD50)为4.33×10~6CFU/ml。 对XG409进行菌种鉴定、生长曲线分析、药敏实验和和攻毒实验。结果显示XG409为副溶血弧菌,其基本特征和副溶血弧菌的特征相同;该菌繁殖速度快,适应力强;具有高致病性,在1×10~9CFU/ml浓度下,凡纳滨对虾全部死亡,48h大部分对虾都死亡,若不能及时治疗,很可能造成对虾的大面积死亡;对青霉素类的药物不敏感,可能是由于青霉素药物的滥用导致XG409产生了抗药性和药物本身的原因。氯霉素、妥布霉素、强力霉素、氟哌酸、奥复星、痢特灵、强力霉素、头孢三嗪和复方新诺明的可以制成药物,为生长后期的凡纳滨对虾的病害防治贡献了力量。 3.凡纳滨对虾CL基因克隆与分析 采用RT-PCR的技术克隆凡纳滨对虾的CL基因;使用DNAstar、Clustalx、MEGA5.0、PROSITE、TMpred和SignalP软件分析其基因和蛋白的结构并预测功能。首次从凡纳滨对虾的肝胰腺克隆到CL基因(序列号:JQ824114)的cDNA,全长为501bp,含有33bp的5′非翻译区(1-33bp)和24bp的3′非翻译区(478bp-501bp),编码区为444bp,共编码147个氨基酸。蛋白质结构预测含有一个信号肽,一个跨膜螺旋和一个WAP结构域。 CL基因相似性分析发现不同的物种间的Crustin基因差别很大,不同类型的Crustin基因可能有不同的功能,为进一步研究凡纳滨对虾的免疫机制和抗病育种奠定基础。 4. CL基因的实时定量分析 利用副溶血弧菌进行攻毒实验和实时定量PCR检测CL基因在病原侵染条件下的表达情况。实验证明,弧菌刺激导致CL基因表达量发生明显变化,总体呈现先降低后升高的趋势;对照组对虾CL基因的表达量在该时间段内基本保持稳定。 多年来,副溶血弧菌给对虾养殖造成了巨大损失;本研究发现Crustin基因与副溶血弧菌侵入的免疫反应密切相关,可以作为病原菌感染做对虾发病前期的参考指标。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S945.4

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周鲜娇;邱德全;;利用噬菌体防治对虾弧菌病的研究[J];北京水产;2007年01期
2 朱壮春;史相国;张淑杰;姜广健;邢朝斌;赵亚龙;李占军;吴鹏;;中草药对牙鲆病原迟钝爱德华氏菌的体外抑制作用研究[J];水产科学;2007年05期
3 王玉娥;邢晨光;王国良;;5种海洋致病弧菌对34种中草药敏感性的测定[J];水产科学;2008年05期
4 朱春华,徐志标;淡化养殖水体中Ca~(2+)与Mg~(2+)含量对南美白对虾生长的影响[J];淡水渔业;2002年06期
5 黎铭;李咏梅;曾地刚;陈秀荔;陈晓汉;;凡纳滨对虾CrustinⅠ基因的克隆与序列分析[J];广西农业科学;2009年06期
6 雷爱莹;;南美白对虾败血病病原菌(副溶血弧菌)的研究[J];广西水产科技;2005年01期
7 王大鹏;韦嫔媛;;对虾池混养的生态学原理及现状[J];广西水产科技;2008年01期
8 刘丽燕;游培亮;程开敏;刘建军;刘贤敏;刘晋;;南美白对虾虾苗的选择与放养注意要点[J];广东饲料;2010年03期
9 聂利红;刘宪斌;田胜艳;于鹏;;海水淡化高盐度尾液排放对海洋生态系统的影响[J];盐业与化工;2008年05期
10 阎斌伦;秦国民;暴增海;张晓君;毕可然;秦蕾;;三疣梭子蟹病原副溶血弧菌的分离与鉴定[J];海洋通报;2010年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 解永梅;张成玲;赵永强;张薇;张广民;;山东省大白菜黑腐病病原的鉴定及其生物学特性的研究[J];山东农业科学;2007年06期
2 姚良同;丁延芹;刘尧;陈一然;杜秉海;李俊;;玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验[J];山东农业科学;2008年03期
3 朱彭玲;陈强;丁延芹;姚良同;杜志兵;王晶;杜秉海;;新疆地区棉花根际拮抗菌的筛选与鉴定[J];山东农业科学;2008年06期
4 张广志;周红姿;杨合同;赵晓燕;;盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定[J];山东农业科学;2008年09期
5 张一;王凤忠;张铭铄;李妍;韩明渠;周波;毛志泉;;苹果园土壤中一株根皮苷降解菌的筛选[J];山东农业科学;2011年12期
6 凌晨;刘波;;2,4,6-三溴苯酚降解菌的筛选[J];安徽化工;2012年03期
7 鲍立宁,洪桂云,黄显怀;电极生物膜脱氮工艺中反硝化菌相分析[J];安徽建筑工业学院学报(自然科学版);2004年05期
8 刘营;李玉保;;鲁西地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J];安徽农学通报;2008年19期
9 曹宁;杨革非;王世彭;刘占云;汤晖;;大庆土壤盐碱菌的分离鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
10 曹红梅;冯杰;沙莎;刘力;;大西洋鲑腐皮病研究——鳃部病原菌的分离鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 窦瑞木;雷清泉;张改强;;番茄内生细菌TB-2生化特性及对番茄灰霉病菌的抑制作用[A];经济策论(上)[C];2011年
2 何丽斌;周宸;林克冰;;几种养殖贝类中副溶血弧菌的分离与鉴定[A];第三届全国现代生态渔业管理与技术研究[C];2011年
3 刘春;;鳢舒伯特气单胞菌内脏类结节病的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 马镝;;产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
5 黄华伟;王印庚;陈霞;张凤萍;;渡夏期养殖刺参腐皮综合征的发生与环境因子间的关系[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
6 邬纯鸿;黄毅;王文莉;钟代彬;吴广安;方艳军;;现代化奶牛场乳房炎病因调查及其防治[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
7 余东游;刘韶娜;李卫芬;黄海智;;一株异养型亚硝酸盐转化菌的分离鉴定及特性研究[A];全国畜禽和水产养殖污染监测与控制治理技术交流研讨会论文集[C];2008年
8 胡治刚;胡江春;刘丽;汪思龙;苏振飞;王书锦;;海洋微生物复合制剂改善桉树人工林土壤质量研究[A];微生物实用技术生态环境应用学术研讨会论文集[C];2008年
9 刘爱民;王敏;黄为一;;抗生素对一株假单胞菌耐镉能力的影响及其红外光谱分析[A];微生物实用技术生态环境应用学术研讨会论文集[C];2008年
10 李俊;陈济安;邱志群;赵清;舒为群;;一株降解DBP菌株CQ0302的分离鉴定及其降解特性研究[A];重庆市预防医学会2005年学术交流会论文集[C];2005年
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1 郎亚军;Ectoines高效制备技术及其应用研究[D];大连海事大学;2010年
2 张天时;中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)育种的模型分析与遗传参数评估[D];中国海洋大学;2010年
3 赵永刚;副溶血弧菌tdh、trh和tlh基因的克隆、表达及基因敲除对其溶血活性的影响[D];中国海洋大学;2010年
4 李永芹;养殖鱼类病原菌检测芯片技术的建立[D];中国海洋大学;2010年
5 郭彪;光照和温度波动对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)蜕皮和生长的影响及机制的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
6 赖晓芳;中国对虾应答WSSV侵染相关基因的研究[D];中国海洋大学;2010年
7 赵祺;冻土细菌新种和冰缘植物内生细菌新种的特征和多相分类学研究[D];兰州大学;2010年
8 朱兵峰;枯草杆菌两步法生产四甲基吡嗪的调控及机制的研究[D];江南大学;2010年
9 王大红;粘细菌Stigmatella WXNXJ-B产生新型抗肿瘤抗生素的研究[D];江南大学;2010年
10 肖仔君;Acetobacter sp. CCTCC M209061细胞催化潜手性酮不对称还原反应的研究[D];华南理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭姗姗;臭氧处理对冰温保鲜脆肉鲩鱼片品质的影响[D];华中农业大学;2010年
2 罗晶晶;斑点叉尾鮰生鱼片加工过程中的微生物变化[D];华中农业大学;2010年
3 郎晓磊;肠道菌对苏云金芽胞杆菌家蚕杀虫活性的作用[D];华中农业大学;2010年
4 逯晋忠;苏云金芽胞杆菌对云斑天牛的抗性研究[D];华中农业大学;2010年
5 张献芳;利用半夏凝集素构建内生工程菌及其抗同翅目害虫效果研究[D];华中农业大学;2010年
6 韩亚超;新型微生态制剂的研制[D];华中农业大学;2009年
7 袁玮;贵州省苗族腌酸汤中产乳酸菌素菌的筛选与初步研究[D];华中农业大学;2010年
8 郭慧芝;中华绒鳌蟹cDNA文库的构建及免疫相关基因的克隆与表达[D];华中农业大学;2010年
9 贺中华;黄鳝肠道菌群的初步分析和益生菌的开发与应用研究[D];华中农业大学;2010年
10 孟小亮;黄颡鱼肠道益生菌的筛选及其应用研究[D];华中农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王豪;孙晓红;;利用PCR技术快速检测水产品中副溶血性弧菌[J];安徽农业科学;2009年15期
2 李正中;花粉、灵芝与珍珠中必需氨基酸的定量测定与分析比较[J];氨基酸杂志;1988年04期
3 唐开华;何宝富;;水产养殖病害的发生及防治措施[J];现代农业科技;2008年15期
4 毛芝娟,刘国勇,陈昌福;大黄鱼溃疡病致病菌的初步分离与鉴定[J];安徽农业大学学报;2002年02期
5 柳敏海;罗海忠;陈波;彭志兰;傅荣兵;;铜、镉对鮸鱼幼鱼鳃丝Na~+-K~+-ATPase和肝脏SOD酶活性的影响[J];安全与环境学报;2007年04期
6 吴楠;张毅;李惠云;张高峰;刘青;魏华;;壬基酚和雌二醇干扰罗氏沼虾卵黄蛋白原VTG基因表达的效应[J];动物学杂志;2007年04期
7 张坷,万志;南美白对虾三种类型红体病的防治方法[J];北京水产;2004年04期
8 夏福祖;筏式养殖鲍鱼中常见的敌害生物[J];水产科学;1992年06期
9 毛芝娟,卓华龙;锯缘青蟹细菌性传染病的病原菌研究[J];水产科学;2001年01期
10 朱振乐;杂色蛤与对虾混养技术[J];水产科学;2001年04期
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1 许雅香;对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白基因克隆、表达及表达产物抗病效果的研究[D];浙江大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王秀华;肽聚糖对对虾免疫因子的作用及在对虾养殖中的应用[D];中国海洋大学;2002年
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中国期刊全文数据库 前10条
1 蔺红苹;邱德全;谭龙艳;;水体使用副溶血弧菌噬菌体对对虾体内宿主的防治研究[J];渔业现代化;2007年02期
2 樊景凤;梁玉波;宋立超;王斌;臧红梅;李文哲;;凡纳滨对虾红体病病原菌间接ELISA快速检测方法的研究[J];水产学报;2006年01期
3 周鲜娇;邱德全;;利用噬菌体防治对虾弧菌病的研究[J];北京水产;2007年01期
4 周鲜娇;邱德全;;亚硝酸氮和副溶血弧菌对凡纳滨对虾部分免疫指标的影响[J];水生态学杂志;2009年01期
5 张晓君;陈翠珍;阎斌伦;房海;秦国民;徐静;;凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)病原副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的表型及分子特征[J];海洋与湖沼;2009年05期
6 纪荣兴;邹文政;鄢庆枇;戴春光;;凡纳滨对虾“肌肉白浊病”病原的初步研究[J];集美大学学报(自然科学版);2008年03期
7 纪荣兴;邹文政;鄢庆枇;戴春光;;凡纳滨对虾“肌肉白浊病”病原的初步研究[J];集美大学学报(自然科学版)网络版(预印本);2008年03期
8 朱宏友;王广军;余德光;谢骏;;水温骤降后凡纳滨对虾血清中NO、NOS水平及对副溶血弧菌的敏感性[J];大连水产学院学报;2006年01期
9 林惠山;戚隽渊;乔燕平;;凡纳滨对虾高产养殖水质优化技术探讨[J];水产科技情报;2006年04期
10 章跃陵;叶向群;陈洁辉;黄通旺;胡忠;李远友;;凡纳滨对虾28.5kD血蓝蛋白的降解新片段[J];中国水产科学;2008年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘小龙;杨林;习欠云;汪元梅;江青艳;张永亮;;凡纳滨对虾过氧化物还原酶基因的克隆和鉴定[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
2 杨利艳;曹文红;吉宏武;章超桦;;超低温速冻凡纳滨对虾的保水工艺研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 丁兆坤;辛文伦;陈秀荔;肖群平;陈晓汉;;凡纳滨对虾亲环素A基因的克隆及表达[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
4 张晓军;张同武;赵翠;张兵;柳承璋;李富花;胡松年;相建海;;凡纳滨对虾基因组的初步分析[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 刘小龙;杨林;习欠云;熊接华;江青艳;张永亮;;复合植物多糖对凡纳滨对虾免疫及抗氧化功能的影响[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
6 曹平;黄翔鹄;李长玲;;颤藻对凡纳滨对虾生长和免疫相关酶活力的影响[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
7 杨世平;吴灶和;简纪常;;沼泽生红冬孢酵母对凡纳滨对虾抗氧化相关基因表达的影响[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
8 管越强;王慧春;康现江;;虾青素对凡纳滨对虾的免疫防护和抗氧化酶基因转录的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
9 曾名湧;郭红;刘尊英;曾惠;朱素芹;;凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)腐败变质与优势腐败菌群体感应研究[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
10 李桂英;宋晓玲;孙艳;;饲料中益生菌对凡纳滨对虾部分免疫酶活的影响[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴凡;“低盐养殖凡纳滨对虾食味劣化及调控”通过鉴定[N];中国渔业报;2010年
2 缪翼;“低盐凡纳滨对虾饲料风味改良剂”获国家专利[N];中国渔业报;2010年
3 张元跃;南宁海产品副溶血弧菌检出率高达71.4%[N];中国食品质量报;2006年
4 高晶霞记者 吴天飞;市卫生监督部门发布食品安全预警[N];哈尔滨日报;2007年
5 本报记者 周丽;如何安全应对腹泻[N];河北日报;2006年
6 ;海鲜中毒进入“高发期”[N];人民日报;2006年
7 韩振奎;腹泻原因各不同胡乱止泻恶果生[N];中国石化报;2004年
8 ;水产原良种新增13品[N];中国渔业报;2011年
9 原河北大学医学部医疗系副主任、副教授 刘照福;腹泻不可胡乱止[N];广东科技报;2006年
10 符壮才 刘嫦玉;细菌鞭毛镀银染色有新方法[N];健康报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张莹;凡纳滨对虾和中华绒螯蟹免疫相关因子功能及应用的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
2 刘晓华;谷胱甘肽对凡纳滨对虾抗氧化防御的调控机理[D];华中农业大学;2010年
3 张健;免疫增强剂对凡纳滨对虾幼虾生长、免疫及抗应激的影响[D];中山大学;2012年
4 段妍;凡纳滨对虾游泳行为生理生态学实验研究[D];中国海洋大学;2012年
5 郜卫华;长期低盐胁迫诱导凡纳滨对虾肝胰腺差异表达基因的分析和鉴定[D];中国海洋大学;2012年
6 侯纯强;水中钙浓度对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)蜕皮和生长的影响及生理生态学机制[D];中国海洋大学;2011年
7 蒋鲁岩;副溶血弧菌分子生物学检测方法的建立及其应用[D];南京农业大学;2007年
8 夏西超;KK-42对凡纳滨对虾生长发育相关基因时空表达的影响[D];河南师范大学;2011年
9 李喜莲;凡纳滨对虾肌肉组织中体重调控相关基因的筛选、克隆鉴定及功能研究[D];西北农林科技大学;2011年
10 郭彪;光照和温度波动对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)蜕皮和生长的影响及机制的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张艳艳;凡纳滨对虾病原菌分离与鉴定和类Crustin基因的克隆及在副溶血弧菌感染条件下的表达分析[D];西北农林科技大学;2012年
2 陈淑湘;不同冷藏条件对凡纳滨对虾品质的影响[D];海南大学;2012年
3 刘晓敏;发酵制备腺苷甲硫氨酸及其对凡纳滨对虾的应激保护[D];广东海洋大学;2010年
4 王亮;凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)冰温气调保鲜技术的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 池岸英;凡纳滨对虾微波蒸煮参数优化及风味成分分析[D];广东海洋大学;2012年
6 张新节;三种水环境下,饲料钾对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长和生理特性的影响[D];广东海洋大学;2011年
7 杨长明;凡纳滨对虾人工授精与生长发育研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 韦振娜;凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)对植物蛋白源的利用研究[D];广东海洋大学;2010年
9 冉维亮;环境因子对凡纳滨对虾性别分化的影响[D];广东海洋大学;2010年
10 程传龙;不同品质的鱼粉对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的影响[D];广东海洋大学;2010年
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