布鲁菌LPS对小鼠子宫内膜蜕膜化的影响

【摘要】：布鲁菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为布鲁菌外膜的主要成分,是布鲁菌的毒力因子之一,具有潜在的毒性,而小鼠已被广泛用于探讨LPS诱导妊娠丢失机制的模型建立。子宫内膜蜕膜化是子宫内膜一种特殊的分化过程,在胚胎正常着床和妊娠过程中起重要作用。为了研究布鲁菌脂多糖和妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的关系,本实验拟通过对小鼠子宫内膜蜕膜化组织学观察和相关因子变化的检测,初步探索布鲁菌LPS对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化过程的影响,分析布鲁菌LPS在引起小鼠早期流产中的作用及其机制,为探寻布病防控和检测新靶标提供依据。本试验应用HE染色观察组织形态,利用RT-qPCR、Western Blot和体外分离培养基质细胞及人工诱导蜕膜化等方法检测布鲁菌LPS对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化的影响。试验结果如下:1.以布鲁菌脂多糖作为诱导药物以建立阻碍胚胎着床的模型,将怀孕小鼠分为0、2、5、10μg/g不同剂量LPS组,每组6~8只孕鼠,于孕4 d腹腔注射,孕6 d采样观察。并统计胚胎着床结果。结果显示,随着布鲁菌LPS用药剂量的升高,平均着床胚胎数逐渐降低,当用药剂量为10μg/g时,小鼠胚胎的着床率为0%。5μg/g LPS组的着床率降低,与对照组有极显著差异。因此5μg/g LPS可以作为阻碍小鼠胚胎着床的模型,并用作后续试验。2.应用HE染色显示,与对照组相比,在孕6 d,布鲁菌LPS处理组小鼠子宫蜕膜化区域出现纤维蛋白溶解,在孕8 d,靠近胚胎的蜕膜细胞有大颗粒细胞渗透,蜕膜区域有大量间隙,胚胎周围出现细胞坏死。表明布鲁菌LPS使早期妊娠子宫组织形态发生改变。利用实时荧光定量PCR和Western Blot技术检测布鲁菌LPS对妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化相关因子IGFBP-1和CyclinD3表达的影响。结果表明,在孕5~8 d即妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化进程中,布鲁菌LPS能够不同程度的抑制小鼠子宫内膜蜕膜化标记因子的表达水平,提示布鲁菌LPS调节小鼠子宫内膜蜕膜化过程,是导致小鼠妊娠失败的原因之一。3.通过分离培养子宫内膜基质细胞及进行体外诱导研究布鲁菌LPS对体外蜕膜化进程的影响。利用实时荧光定量PCR检测布鲁菌LPS对蜕膜化相关因子CyclinD3和dPRP表达的影响,结果表明布鲁菌LPS在不同时间点降低了蜕膜化标志分子的表达,进一步证明布鲁菌LPS能够扰乱小鼠子宫内膜蜕膜化过程,影响小鼠的正常妊娠过程。