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《西北农林科技大学》 2015年
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西葫芦未授粉子房培养及胚囊植株倍性鉴定技术研究

唐桃霞  
【摘要】:为建立一个完善的西葫芦单倍体资源创制技术体系,本研究以6份不同基因型材料西葫芦未授粉子房为试材,通过未授粉子房培养,探讨西葫芦基因型、培养基添加不同种类与配比的激素、子房采样时期、预处理方式和外源添加物对胚状体诱导的影响来提高西葫芦大孢子培养效果;并对胚囊植株通过根尖染色体、叶片气孔保卫细胞、流式细胞仪3种倍性鉴定方法的结果比较,获得一种经济有效的西葫芦胚囊植株倍性鉴定技术。本研究的主要结果如下:1.西葫芦未授粉子房接种在含有不同激素的MS培养基上,诱胚效果比较趋势TDZ+NAATDZ6-BA+NAA;不同激素种类组合的9种培养基中供试材料平均诱导率P8P9P7P5P6P4P2P3P1。由此得出,西葫芦未授粉子房最适培养基为P8,即MS+30 g·L-1 Suc+8 g·L-1 Agar+0.05 mg·L-1 TDZ+0.25 mg·L-1 NAA。2.西葫芦基因型和未授粉子房采样时期均影响着胚状体的诱导效果。6个基因型材料中诱导效果最好基因型材料是XH14-3,其次是XH13-7;开花前1 d采样胚状体诱导率最高,采样时期诱导效果比较呈现开花前1 d开花前2 d开花当天的趋势;由此得出,开花前一天是西葫芦未授粉子房培养取样的最佳时期。3.西葫芦未授粉子房在4℃下经不同时间处理后,胚状体诱导效果因材料不同其效果不同。XH14-3材料经4℃预冷处理24 h可显著提高诱导率和降低玻璃化率,但对XH13-7材料无效果。4.西葫芦未授粉子房切片接种培养基后经35℃热激处理4 d,5 d和6 d,对胚状体诱导率均无显著性影响,仅能提早或延迟西葫芦不同基因型材料胚状体出胚时间,导致玻璃化胚增加。5.在培养基P8中添加10、20、30 mg·L-1的Ag NO3不仅可极显著的降低西葫芦未授粉子房胚状体的玻璃化率,而且有利于缩短最早出胚天数,其最早出胚天数较对照缩短2~5 d,尤以添加20 mg·L-1 Ag NO3效果最好。6.西葫芦未授粉子房诱胚培养基P8中添加20 mg·L-1秋水仙碱,培养2、4、6 d后胚珠生长受到抑制,胚状体诱导率随着添加秋水仙碱培养天数的增加而依次降低,并容易引起胚状体玻璃化。由此得出,20 mg·L-1秋水仙碱对西葫芦未授粉子房诱导胚状体存在着抑制作用。7.三种胚囊植株倍性鉴定结果与植株田间形态鉴定比较,根尖染色体鉴定准确率为68.75%;叶片气孔保卫细胞鉴定准确率为87.50%;流式细胞仪鉴定准确率为100%;研究得出,西葫芦大孢子培养获得胚囊植株适宜早先选用叶片气孔保卫细胞初鉴倍性,对于倍性不确定的植株再用流式细胞仪进一步鉴定倍性,可以提高鉴定的准确率和降低成本。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S642.6

【参考文献】
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