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《西北农林科技大学》 2000年
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成年体细胞克隆山羊研究

郭继彤  
【摘要】: 1.比较了切剖法和抽吸法从屠宰山羊卵巢表面卵泡采集得到的可用卵母细胞数。 实验切剖了4201个卵巢,平均采集可用卵母细胞数4.95枚/卵巢(20794枚/4201 卵巢)。用抽吸法抽取了360个卵巢,平均采集可用卵母细胞数为2.86枚/卵巢 (1029枚/360卵巢)。结果表明两种采集方法采集的可用卵母细胞数差异显著。 用切剖法采集不同季节屠宰的山羊卵巢卵母细胞,结果繁殖季节(10-1月)卵 巢可采集到可用卵母细胞4.50枚/卵巢(3160枚/702卵巢),非繁殖季节(3- 6月)卵巢可采集到可用卵母细胞5.17枚/卵巢(3134/607)。不同季节采集的 卵母细胞数差异显著。结果表明非繁殖季节屠宰的山羊卵巢可采集到更多的可 用卵母细胞。 2.将繁殖季节采集的3286枚卵丘-卵母细胞复合体用于体外成熟,成熟率为67.7% (2223/3286)。非繁殖季节采集的卵巢卵丘-卵母细胞复合体3295枚,成熟率 74.1%(2440/3295)。结果表明不同季节采集的卵母细胞体外成熟率有显著差异。 将采集的屠宰山羊卵巢分别置于20-24℃、25-29℃和30-35℃ 6-8h后,切剖采 到卵丘-卵母细胞复合体2916、6779、702枚。成熟培养后,成熟率分别为69.9% (2039/2916)、69.5%(4713/6779)和56.1%(394/702)。结果表明在30℃以 上存放运送的卵巢中采集的卵母细胞成熟率差,显著低于30℃以下存放的卵巢。 另外,卵母细胞的直径Ф<150μm、150μm<Ф<160μm、Ф>160μm时,卵母 细胞的成熟率分别为0%(0/120)、70.5%(229/325)和79.6%(86/108)。结果 表明卵母细胞直径小于150μm时于本实验条件下不能用于体外成熟。在成熟液 中添加FSH/LH或HMG时,卵母细胞的成熟率分别为68.9%(1813/2633)和74.2% (2637/3556)。结果表明这两种激素对卵母细胞的体外成熟没有显著影响。成 熟液中添加10ng/ml EGF对成熟也没有促进作用,不添加EGF时成熟率为70.0% (403/576),添加EGF时为71.2%(826/1160)。 3.用7%和8%的乙醇激活成熟的山羊卵母细胞7min、10%和20%的乙醇激活5min、 10%的乙醇激活10min,结果卵裂率分别为10.4%(42/403),10.7%(31/289)、 11.0%(31/282),7.1%(3/42)、12.9%(30/233)。在这五组激活的卵裂率之间 无显著差异。这表明乙醇对山羊卵母细胞的激活能力差。用Sr~(2+)-CB激活山羊卵 母细胞6h,12h,16h,24h时的卵裂率分别为2.2%(3/139),80.4%(436/542), 78.8%(178/226),70.1%(60/85);囊胚发育率分别为0%(0/139),15.6%(68/436), 10.1%(18/178),1.6%(1/60)。激活6h时的卵裂率极显著低于其它组。囊胚 的发育率在12h和16h时无显著差异,但与激活6h和24h组相比差异极显著。 结果表明Sr~(2+)-CB激活山羊卵母细胞的适宜时间为12h。用离子酶素联合 成年体细胞克隆山羊的研究 6-DMAP-CB或 6-DMAP激活时,在 6-DMAP培养 4h、Zh和 0.sh时卵裂率分别为 75.9%(154/203)、79.3%(218/275)、80.2%(138/172),囊胚发育率为 16.2f (25/154)、24.8y(54/218)和 18.8%(26/138)。结果表明激活率和囊胚发育 率都无显著差异.在 6-DMAP-CB中培养 4h、Zh时卵裂率为 81.6%(460/564)、 77.9%(120/154),囊胚发育率为 20.9%(96/460)、19.2%(23/120)。与 6-DMAP 培养组相比卵裂率和囊胚发育率都无显著差异.用 DC 120v/。m,20 p s H次电 激活山羊卵母细胞的结果,卵裂率 6 5.3X(15 4/2 36),进一步在卜DMAP中培养 4h后的囊胚发育率为 2.3%(2/84).山羊卵母细胞对温度刺激不敏感,22C激 活 3h和 12h时,激活率为 0.3%(1/265)和 6.2%(8/129)。 4.用 TCM199、mCRlaa、mCRlaa-TCM199、BO-TCM199与山羊卵丘细胞共培养系统培 养激活的山羊卵母细胞,其卵裂率分别为 64.8%(465/718)、64.8%(237/366)、 69.0y(436/632)、75%(54/72)。囊胚发育率分别为 11.4%(53/465)、20.3% (48/237)、15.6%(68/436)、18.5%(10/54).结果表明,四组培养液对卵裂 无显著影响。囊胚的发育率在mcRlaa-TCMI”最高,与TCM199组相比差异极显 著;在没有卵丘细胞共培养时,mCRlaaBSA、mCRlaaBSAFBS、mCRlaaFBS、mCRIBSA、 mCRIFBS培养胚胎的卵裂率无显著差异,但 mCRlaaBSA和 mCRlaaBSAFBS中的囊 胚发育率分别为 30.5%(32/1口5)和 23.6%(58/246),显著高于 mCRIBSA、mCRIFBS、 mCRlaaPBS组中的囊胚发育率0K(0/60)、6.8%(6/88)、8.OH(V87)。囊胚发 育率在mCRIFBS和mCRlaaFBS组之间无显著差异. 5.利用常规的组织培养技术,建立了山羊颗粒细胞、卵丘细胞和成年耳皮肤成纤 维细胞的培养方法,获得了颗粒细胞、卵丘细胞和皮肤成纤维细胞的传代培养 物.这些传代培养物经过冷冻保存后?
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:S827.34

【引证文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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6 俞腾飞;异源因子诱导山羊IPS细胞[D];华中农业大学;2011年
7 吴海凤;绵羊幼羔的超数排卵及其体外受精[D];甘肃农业大学;2011年
8 俞晓丽;山羊早期胚胎发育过程中胚胎干细胞标记分子的表达检测[D];西北农林科技大学;2011年
9 胡媛媛;两步体外成熟法对绵羊卵母细胞发育能力的影响[D];河北农业大学;2012年
10 王炜;电场导入1,4,5-三磷酸肌醇(IP_3)激活小鼠卵母细胞的研究[D];西南农业大学;2003年
【二级参考文献】
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【相似文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国重要报纸全文数据库 前10条
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2 闵保望;波本杂交山羊生产技术[N];中国畜牧水产报;2001年
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5 本报记者 曾永联;“贩羊热”带来“养羊热”[N];广西日报;2006年
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8 柏海萍 彭辰阳 陈锦艳;江苏射阳:试水“草根银行”的喜与忧[N];人民政协报;2009年
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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7 赵博渊;山羊RanBP9和CD320基因克隆、组织表达与多态性分析[D];西南大学;2014年
8 邓腊梅;西南地区山羊高繁殖力候选基因的研究[D];重庆大学;2010年
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10 万江春;不同山羊牧压强度对南方人工草地山羊采食量及生产性能的影响[D];中国农业科学院;2012年
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