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《西北农林科技大学》 2001年
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芥菜(Brassica juncea Coss)植株原位真空渗入遗传转化体系的研究

金万梅  
【摘要】: 芥菜营养丰富,栽培面积广泛,但在生产上存在着病虫害严重、产量低、品质差等问题。 解决的根本途径是培育新品种,常规育种不仅年限长,而且目标性状常常与不良经济性状呈紧 密连锁关系。转基因技术能将目标基因直接导入植物染色体组中,育种效率高。国内关子芥菜 遗传转化技术还很不成熟,难以适宜育种需求。真空渗入法以其独特的优点受到了广泛的关注 和探索。本试验通过对影响转化效果诸因素的研究试图建立芥菜植株原位真空渗入高效遗传转 化体系,为该法的广泛应用提供理论依据和方法技术。 本项研究于1999年6月至2001年5月,以芥菜雪里凝和园叶芥为材料,采用人工低温处 理和春秋播期试验以及对影响原位真空渗入遗传转化效果的真空渗入时间、菌液浓度、渗入培 养基、芥菜生长发育时期、组织器官和农杆菌菌株进行处理试验,建立了芥菜原位真空渗入遗 传转化体系,获得了以下主要结果: 1.雪里散和圆叶芥芥菜种子经 50C温烫 10min,23oC浸种 2-6h,催芽 20h,或 23t浸种 5 h 不催芽,置0-4’C处理25d 圆叶芥9月20日、9月30日和2月27日,雪里数9月30日和2 月27日露地播种,均易形成芥菜植株原位真空渗入遗传转化适宜苗态。 2.通过对影响转化效果的诸因素的研究,建立了芥菜植株原位真空渗入高效遗传转化方法: 真空渗入时间为Zmin/间歇30s/30s或Zmin/间歇1.smin/30s;菌液浓度OD。为0.8-l二,渗入培 养基为 l/ZMS无机十B。有机;菌株采用强感染型的;在蕾期对花蕾进行真空渗入。 3.初步建立一种鉴定转基因植株的方法--生长点点滴筛选法,该法筛选雪里敦和圆叶芥 的最佳潮霉素浓度为 800mg/L,筛选时间自接种潮霉素后 10d开始。筛选转化体的标准:真叶 长出,叶色显绿,生长正常。由于其不需要培养基,无污染,节省药品,筛选出的转化体移栽 成活率高,具有一定的应用前景。 4.建立了培养基筛选芥菜转基因植株的潮霉素最佳浓度和筛选最佳时期。25mg/L为芥菜 雪里票和圆叶芥潮霉素筛选的最佳浓度;筛选的最佳时间从16日龄开始。鉴别转化体的标准: 在潮霉素浓度为 25m叭的筛选培养基上,16日龄以上的雪里燕和圆叶芥植株生长正常,叶片现 绿,有侧根发出或真叶长出或既有侧根又有真叶出现。 5.参考微量DNA提取方法,成功地提取了用于PCR扩增的芥菜DNA,并建立了PCR扩 增反应体系。 6.获得了转基因植株。本试验经潮霉素筛选获抗性苗386棵,随机取样六棵,对其提取基 因组DNA,进行PCR分子检测,均有条带扩出,证明外源基因己整合在芥菜基因组DNA上。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S637.03

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 严慧玲;农杆菌介导的甘蓝遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2003年
2 贾庆利;外源基因在拟南芥转基因植株中的遗传研究[D];西北农林科技大学;2004年
3 杨慧莹;结球白菜抗逆基因遗传转化方法的研究[D];兰州理工大学;2010年
4 韩笑;白菜浸花法转基因技术研究[D];曲阜师范大学;2012年
【参考文献】
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1 刘金元,时香玉,陈晓,曾昭海,周柱华,陈建爱,王兴军;利用基因枪技术转化小麦、玉米的研究[J];山东农业科学;1999年02期
2 巩振辉,何玉科;拟南芥基因转移新方法一真空渗入法的研究[J];西北植物学报;1996年03期
3 王光清,王蕴珠,胡容霞,杨金水,葛扣麟,李美珍,陈根法,郑振钧,王吟雪,王垂丁;青菜花粉管通道法导入外源DNA的研究初报[J];复旦学报(自然科学版);1996年02期
4 张利平;曹孜义;李唯;;高等植物基因转移技术研究进展[J];甘肃农业大学学报;1991年03期
5 马伯军,袁妙葆,王光清,杨金水,葛扣麟;一种简便的遗传转化技术在大麦中的应用[J];广西植物;1998年01期
6 董延瑜;植物基因转移研究进展[J];湖南农学院学报;1994年06期
7 周奕华,韩厉玲,王兰岚,宋桂英,陈正华;利用激光微束穿刺法将GUS基因导入百脉根并获得转基因植物的研究[J];激光生物学报;1998年01期
8 王罡,李静;植物抗病及抗虫基因工程的研究进展[J];吉林农业科学;1998年01期
9 蔡小宁,佘建明,朱祯,朱卫民,袁希汉,苏小俊;建立青菜(Brassica chinensis)农杆菌介导法基因转化体系[J];江苏农业学报;1997年02期
10 王琴芳,薛爱红,黄大昉;转基因植物产业化现状与发展趋势[J];中国农业科技导报;2000年02期
【共引文献】
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1 牛永东,许丽艳,李恩民;酵母单杂交诱饵质粒pHis-3NF和pLacZ-3NF的构建与鉴定[J];癌变.畸变.突变;2003年01期
2 欧阳松应,徐寿水,沈文律,周传香,李春艳,欧阳红生;人PTEN基因表达载体的构建及其在U_(251)细胞中的表达[J];癌变.畸变.突变;2004年04期
3 李涛,石年,吴又桐,周丽,董洁,王素青,陈亮;Bcl-2在溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡机制中的作用[J];癌变.畸变.突变;2004年05期
4 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
5 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
6 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
7 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
8 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
9 姜先荣;杨杰;周衍茂;;转基因技术应用及转基因产品安全性研究进展[J];合肥师范学院学报;2008年03期
10 薛炳烨,束怀瑞;应用基因工程改良果实成熟特性研究进展[J];山东农业科学;2002年04期
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1 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 姜福星;刘凤栾;赵梁军;;植物类原球茎研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 田永强;张荣意;朱中元;;人乳头瘤病毒线性平行杂交分型检测条件的建立及优化[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
4 梁权;毛培菊;罗春贞;王缦;;HIV-1跨膜蛋白gp41的截短表达及其免疫反应性[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
5 朱勤勋;严雪;韩友斌;;鼠源IgG抗体F(ab')2片段及Fab片段的制备纯化及其免疫活性研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
6 朱美财;占志;王雅静;蔡庆;;刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中的表达及在TPA纯化中的应用[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
7 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
8 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
9 谭万忠;;论作物病害田间诊断与实验室检验原理和技术[A];庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛论文集[C];2007年
10 翟红;刘庆昌;;甘薯及其近缘野生种遗传转化的研究[A];作物科学研究理论与实践——'2000作物科学学术研讨会文集[C];2001年
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1 王庆莲;苹果多胺和脯氨酸合成代谢相关基因的功能鉴定[D];山东农业大学;2009年
2 郭爱疆;猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原表位及组织定位的研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 赖晓芳;中国对虾应答WSSV侵染相关基因的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 郑小坚;家蚕类胰岛素基因BBX-B8的功能研究[D];苏州大学;2010年
5 曾卫军;拟南芥(Arabidopsis thaliana)受胁迫因子诱导激活启动子的筛选及其应用研究[D];华东师范大学;2011年
6 王发明;柚(citrus grandis Osbeck)单染色体AFLP分子标记体系及文库的建立[D];福建农林大学;2010年
7 孙国清;不同抗虫棉品种杀虫蛋白表达研究及影响抗虫性分析[D];新疆农业大学;2010年
8 周茜;混沌理论及应用若干问题的研究[D];南开大学;2010年
9 高山;蛋白质点突变效果预测与突变数据库研究[D];南开大学;2010年
10 李红霞;几种抗病毒药剂对烟草花叶病毒的抑制作用及相关机理研究[D];河北农业大学;2010年
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1 韩秀萍;幽门螺杆菌基因敲除方法的建立及其应用研究[D];华中农业大学;2010年
2 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
3 张帆;dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究[D];华中农业大学;2010年
4 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
5 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
6 余姣姣;天蓝放线紫红素生物合成上调基因的克隆及其对阿维菌素产量的影响[D];华中农业大学;2010年
7 卢增斌;防治水稻螟虫单项技术措施的评价及储备技术—转基因水稻对非靶标生物影响的研究[D];华中农业大学;2010年
8 黄潘;鸡胚性分化早期性别差异表达miRNAs的鉴定及其特性分析[D];华中农业大学;2010年
9 陈龚莉;不同居群栝楼分子遗传多样性及生物碱分析[D];华中农业大学;2010年
10 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
【同被引文献】
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1 刘栓桃,赵智中,何启伟;大白菜转基因育种及分子标记研究进展[J];山东农业科学;2004年03期
2 张传坤;陈立群;张青;;大白菜基因工程研究进展[J];安徽农业科学;2009年25期
3 朱加保,杨可胜,产焰坤,胡积送,刘方志,郑曙峰,徐道青,江本利;转Bt基因抗虫棉卡那霉素田间鉴定技术研究[J];安徽农业大学学报;2005年01期
4 余文贵;现代生物技术在蔬菜品种改良中的应用(上)[J];长江蔬菜;1996年09期
5 赵军良;梁爱华;徐鸿林;朱祯;;豇豆胰蛋白酶抑制基因改良大白菜抗虫性的研究(英文)[J];西北植物学报;2006年05期
6 巩振辉,何玉科;拟南芥基因转移新方法一真空渗入法的研究[J];西北植物学报;1996年03期
7 苏军,段榕琦,胡昌泉,王锋;农杆菌介导小白菜的gus基因瞬间表达[J];福建果树;2000年02期
8 刘凡,王国英,曹鸣庆;农杆菌介导的植物原位转基因方法研究进展[J];分子植物育种;2003年01期
9 朱玉,于中连,林敏;草甘膦生物抗性和生物降解及其转基因研究[J];分子植物育种;2003年04期
10 张庆祝,韩天富;植物非组培遗传转化方法研究的进展[J];分子植物育种;2004年01期
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1 朱月林;李式军;;TDZ对不结球白莱离体子叶不定芽形成的效应[A];中国园艺学会第九届学术年会论文集[C];2001年
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1 薛万新;白菜类蔬菜叶球发育相关基因的分子克隆及其转基因植物研究[D];西北农林科技大学;2001年
2 严继勇;BcpLH反义基因在大白菜中的转化及其功能的研究[D];浙江大学;2004年
3 徐恒戬;利用真空渗入法获得转基因抗虫白菜及其转化机理的研究[D];山东农业大学;2004年
4 韩德俊;甘蓝型油菜再生体系与农杆菌介导的甜菜碱合成基因遗传转化研究[D];西北农林科技大学;2005年
5 卢其能;马铃薯花色苷及其生物合成的主要关键酶基因的克隆与表达分析[D];南京农业大学;2006年
6 马雄风;苎麻抗虫基因遗传转化研究[D];中国农业科学院;2009年
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1 刘敏;采用花序浸染法将线性基因表达框导入拟南芥[D];大连理工大学;2011年
2 韩丽伟;花粉管通道法介导aiiA和TuMV-CP基因转化大白菜的研究[D];东北农业大学;2011年
3 谢小波;转cry1Ab水稻遗传表达与性状变异的研究[D];浙江大学;2001年
4 宋正旭;小白菜植株原位真空渗入遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2002年
5 严慧玲;农杆菌介导的甘蓝遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2003年
6 付绍红;floral-dip法转化甘蓝型油菜有关影响因素研究[D];四川农业大学;2005年
7 韩国民;玉米SBEⅡb不同类型RNAi载体的构建及原位转化方法的研究[D];安徽农业大学;2006年
8 刘亭亭;白菜花发育过程的形态学、细胞学及超微结构观察[D];浙江大学;2007年
9 韦献雅;拟南芥CRY1基因C末端导入甘蓝型油菜的遗传表达及卡那霉素抗性筛选方法研究[D];四川农业大学;2007年
10 张好富;酿酒酵母Rad52基因转化拟南芥及转化体筛选技术研究[D];浙江大学;2008年
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1 陈冬朋;于丽杰;;花粉管通道法在番茄转基因上的应用[J];北方园艺;2010年14期
2 王雷;于丽杰;凌春莹;李然红;;花粉管通道法介导il-4基因转化大白菜(Brassica pekinensis Rupr.)的研究初探[J];分子植物育种;2006年06期
3 金晓霞;于海凤;于丽杰;;农杆菌介导的人白细胞介素-4基因转化甘蓝的研究[J];北方园艺;2013年15期
4 彭洪雨;张鹏;及晓宇;于丽杰;;转il-4基因番茄及其杂交F_1代的筛选与表现型分析[J];中国农学通报;2011年10期
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1 董灵艳;玉米转淀粉分支酶反义和干扰基因后代的遗传变异分析[D];吉林农业大学;2011年
2 彭洪雨;转il-4基因番茄(Lycopersicon esculentum)及其杂交后代的il-4遗传与表达研究[D];哈尔滨师范大学;2011年
3 贾庆利;外源基因在拟南芥转基因植株中的遗传研究[D];西北农林科技大学;2004年
4 于守江;Cry Ⅰ AC基因的克隆及转化结球甘蓝的研究[D];东北农业大学;2007年
5 赵秀枢;农杆菌介导单、双价抗虫基因Bt、Bt-pinⅡ基因对观赏羽衣甘蓝的遗传转化研究[D];西南大学;2009年
6 韩笑;白菜浸花法转基因技术研究[D];曲阜师范大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘金元,时香玉,陈晓,曾昭海,周柱华,陈建爱,王兴军;利用基因枪技术转化小麦、玉米的研究[J];山东农业科学;1999年02期
2 张成合;高等植物的基因转移及其在作物改良上的潜力[J];河北农业大学学报;1991年04期
3 雷勃钧,尹光初,卢翠华,钱华,张开旺,周思君,王树林;外源DNA直接导入大豆的研究[J];大豆科学;1991年01期
4 巩振辉,何玉科;拟南芥基因转移新方法一真空渗入法的研究[J];西北植物学报;1996年03期
5 吴伯骥,崔亚亚,陈毅平;植物细胞遗传操作的进展[J];大自然探索;1987年01期
6 林红,李晓方,梁宁;以农杆菌为介导的GUS基因在籼稻中的转移[J];广东农业科学;1996年05期
7 张利平;曹孜义;李唯;;高等植物基因转移技术研究进展[J];甘肃农业大学学报;1991年03期
8 马伯军,袁妙葆,王光清,杨金水,葛扣麟;一种简便的遗传转化技术在大麦中的应用[J];广西植物;1998年01期
9 董延瑜;植物基因转移研究进展[J];湖南农学院学报;1994年06期
10 刘稚,樊梦康,崔澂;土壤根癌杆菌体外转化胡萝卜悬浮培养细胞[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1987年05期
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1 夏双梅,张进,汪新娥,高振峰,张广辉;真空渗入对菜薹叶表面扫描结构的影响[J];信阳师范学院学报(自然科学版);2001年02期
2 张广辉,巩振辉;基于真空渗入遗传转化的菜薹苗态建成方法研究[J];河南农业大学学报;2003年02期
3 刘巧真;王永亮;刘卫群;李浩;王小彦;;真空渗入浸染转化烟草的初步研究[J];河南农业科学;2006年03期
4 张广辉,巩振辉,薛万新,陈启林;大白菜和油菜真空渗入遗传转化法初报[J];西北农业大学学报;1998年04期
5 尚霄丽;冯建灿;朱道圩;邢东方;马春华;;真空辅助农杆菌介导中华猕猴桃高效遗传转化体系的建立[J];中国细胞生物学学报;2010年01期
6 曹传增,刘凡,赵泓,蔡民华,徐恒戬;影响不结球白菜真空渗入转基因频率的几个因素[J];华北农学报;2003年04期
7 权瑞党,尚梅,张举仁;农杆菌介导的玉米自交系愈伤组织转化条件的优化[J];植物生理与分子生物学学报;2003年03期
8 金万梅,巩振辉;芥菜真空渗入遗传转化体系适宜苗态的建成[J];西北农业学报;2000年04期
9 宋正旭,巩振辉,金万梅,顾丽红;小白菜植株原位真空渗入遗传转化适宜苗态建成方法的研究[J];西北农业学报;2002年03期
10 张燕红;黄乐平;周小云;王冬梅;;农杆菌真空渗透法转化棉花花粉的初步研究[J];棉花学报;2008年05期
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1 刘凡;徐恒戬;;白菜中农杆菌介导真空渗入转基因机理研究[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
2 金万梅;巩振辉;吕元红;;芥菜植株原位真空渗入遗传转化技术的研究[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
3 尚霄丽;冯建灿;朱道圩;邢东方;;中华猕猴桃高效瞬时表达体系的建立[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
4 陶大立;靳月华;杜英军;;针叶树针叶和叶绿体自由基ESR信号的转变[A];第十届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];1998年
5 李德全;张建华;;冬小麦根系渗透调节的研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
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1 刘凡;白菜抗虫基因工程及bar基因的遗传飘移研究[D];中国农业大学;2004年
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4 严慧玲;农杆菌介导的甘蓝遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2003年
5 王春萍;彩叶草再生体系的建立及其遗传转化的初步研究[D];西南大学;2007年
6 金万梅;芥菜(Brassica juncea Coss)植株原位真空渗入遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2001年
7 杨慧莹;结球白菜抗逆基因遗传转化方法的研究[D];兰州理工大学;2010年
8 宋正旭;小白菜植株原位真空渗入遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2002年
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