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《西北农林科技大学》 2002年
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牛卵泡卵母细胞体外受精的研究

魏红芳  
【摘要】: 本研究利用屠宰黄牛卵巢,对卵巢表面2~6n皿卵泡卵母细胞的体外成熟(IVM)一体外受精(IVF)—受精卵的体外发育(IVD)进行了系列研究,并探讨了其影响因素,结果表明: (1)采用TCM-199与添加10%发情牛血清(ECS)培养牛卵泡卵母细胞,获得了较高的卵母细胞体外成熟率(81.39%)、卵裂率(56.05%)和桑囊率(30.94%),进一步证明在体外成熟培养液中单独添加10%的ECS是可行的,适宜在生产中推广应用。 (2)在卵母细胞体外成熟培养液和早期胚胎培养液中分别添加0.5μg/ml的谷胱甘肽(GSH),能够提高受精卵的桑椹胚及囊胚的发育能力。这表明GSH对牛胚胎的发育有一定的保护和促进作用。 (3)在卵母细胞成熟培养液(TCM-199+10%ECS)中添加1μg/ml表皮生长因子(EGF),可以明显地提高卵母细胞的体外成熟率、卵裂率,表明体外成熟培养液中添加EGF对卵母体外成熟和卵裂有良好的促进作用。 (4)对冻精的处理方法中的直接离心洗涤法、上游法和Percoll法进行了比较实验,结果显示,Percoll法与洗涤法之间卵裂率差异显著(P<0.05);而上游法与洗涤法的桑囊率差异显著(P<0.05),但Percoll法与上游法的卵裂率和桑囊率差异均不显著(P>0.05)。这表明在胚胎体外生产中,Percoll法与上游法都可采用。 (5)比较了在早期胚胎培养液中添加0.1mS/ml谷氨酰胺(Gln)与联合添加谷氨酰胺和表皮生长因子(EGF)对牛胚胎体外发育的影响,结果表明联合添加Gln与EGF可以提高胚胎4-8细胞发育率,而且可以显著促进桑囊胚的发育。 (6)建立了相对比较实用且有效的牛卵泡卵母细胞IVM—IVF—IVC程序:卵母细胞在TCM-199+10%ECS+1μg/mlEGF的成熟培养液中培养23~24h;冻精用BO液配制的30%及45%Percoll液进行洗涤(加有3mg/ml BSA和10μg/ml肝素钠),精卵在受精液(另加有5mM咖啡因)中共同孵育6-8小时;将受精卵从受精液中移入TCM-199+10%ECS+1μg/mlEGF+0.1mg/mlGln中与颗粒细胞单层(GCM)共同培养,直到发育至桑椹胚或囊胚。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S823.3

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