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《西北农林科技大学》 2002年
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朱鹮亲缘关系鉴定的RAPD及蛋白质多态性研究

邱荣斌  
【摘要】: 应用随机扩增多态DNA(RAPD)和蛋白质多态性技术对陕西洋县40只笼养朱鹮进行了多态性研究,筛选出了适合朱鹮的最佳PCR扩增体系,构建了亲缘关系树状图,分析了RAPD技术应用于鉴定朱鹮亲缘关系的可行性。同时,对40只朱鹮血浆运铁蛋白(Tf)、后白蛋白(Pa)、白蛋白(Alb)、前白蛋白(Pre)4个位点的蛋白质多态性进行了探索研究,并与RAPD技术进行了比较性探讨。 结果显示:(1)随机扩增多态DNA分析易受诸多因素的影响,如:TaqDNA聚合酶、引物和Mg~(2+)浓度以及模板DNA用量等。本试验对各种影响因素进行了梯度筛选,得到朱鹮最佳的PCR扩增体系为:引物(10pmol/ul)1ul、TaqDNA聚合酶(1U/ul)1.5ul、dNTP(2.5Mm)2.0ul、Mg~(2+)(25mM)2.5ul、模板10ng、灭菌纯水17ul、总体积25ul。扩增程序:94℃预变性3min;(94℃变性30sec,36℃退火1min,72℃延伸2min)45个循环;72℃保温10min;4℃保存。 (2)在优化的反应条件下,对40个RAPD随机引物进行了筛选,共获得了5个扩增效果理想,重复性好的引物(B-03、B-09、B-19、B-20、B-36),占所用引物的12.5%。5个引物共扩增出742条清晰的DNA条带,其中多态性条带582条,占78.4%。 (3)根据扩增的结果分别用皮尔逊相关法和欧氏距离法构建了40只的亲缘关系树状图,从树状图可以很明朗地看出:19和32号,18和26号,22和23号,5和31号个体亲缘关系特别近;28和29号,39和36号,2和33号,38和12号个体的亲缘关系相对较远。两种聚类方法所反映出的个体间的亲缘关系基本相符。 (4)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)结果表明,单从以上4个蛋白质位点还不能揭示该40只朱鹮个体间的变异情况,多态性频率为0,而RAPD结果则显示40只朱鹮的平均带纹相似率为0.86,说明该小群体仍然有14%的变异。因此,只要利用分子生物学地各种技术,深入开展朱鹮现有群体DNA多样性的研究,彻底搞清现有群体DNA分子的各种类型和个体间的亲缘关系,据此找出DNA差异较大的个体进行有目的的选配,就能防止近交退化,这对于保护朱鹮,尽快摆脱濒危状态有着重要的意义。
【学位授予单位】:西北农林科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q953

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