苦皮藤内生真菌中杀虫杀菌活性物质的初步研究

【摘要】： 植物内生真菌(Plant endophytic fungi)是在植物寄主中度过全部或近乎全部生活周期而不使寄主表现任何症状的一类真菌。作者于2000年9月至2002年6月对杀虫植物苦皮藤(Celastrus angulatus)中内生真菌的杀虫杀菌活性物质进行了初步的研究，取得了以下结果： 采用常规的内生真菌分离方法，以马铃薯葡萄糖培养基、Czapek培养基为分离用培养基，从苦皮藤根和侧枝的表皮、韧皮部和木质部中分离得到39株内生真菌。 以粘虫为供试昆虫，在500μg／ml的浓度下测定了39株内生真菌发酵产物粗提物的胃毒和触杀活性。结果表明，1B菌株菌丝体的丙酮提取物对3龄粘虫有毒杀作用，24h后的死亡率为85.3％。 以番茄灰霉病菌(Botrytis cintrea)、小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulata)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)和辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)为供试菌种，在500μg／ml的浓度下，采用抑制菌丝生长速率法对39株内生真菌发酵产物进行了杀菌活性筛选，发现1L、2B和5J 3菌株的发酵产物丙酮粗提物均对供试病原菌有不同程度的杀菌活性。盆栽试验结果表明，在500μg／ml的浓度下，3菌株的丙酮粗提物对小麦白粉病的治疗和保护作用均在60％以上，1L和2B 2菌株的丙酮粗提物对黄瓜霜霉病的治疗和保护作用均在50％以上。 在活性追踪指引下，采用Pre-TLC技术，从IB菌株菌丝体的丙酮粗提物中分离到1个杀虫活性物质1B-4，采用红外光谱和核磁共振波谱技术初步鉴定为一类羟基取代的长链脂肪酸类化合物，可能为两个异构体的混合物。 在活性追踪指引下，采用常压柱层析、HPLC制备等技术，从1L菌株发酵产物的丙酮提取物中分离到3个结晶1L-3、1L-6和1L-8，其中1L-6杀菌活性最强，在500μg／ml浓度时，抑制番茄灰霉病菌的菌丝生长达92.7％。 采用菌落观察和孢子观察相结合的真菌分类方法，对1I、2B和5I三株内生真菌进行了菌株鉴定，初步判断1I为Rhynchosporium sp.喙孢霉属，2B为Fusarium prolifenafum.镰刀菌属，5I为Pestalotiopsis sp拟盘多毛孢属。